【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药领域，尤其涉及一种药物筛选方法、用于促进胞外基质交联的药物及其应用。
技术介绍
弹性纤维为多种器官提供弹性， 而胶原蛋白为机体提供支撑作用。 现在已知，弹性纤维交联度的降低会导致一系列的结缔组织的病变，例如皮肤松弛、肺气肿、心血管异常、血管增生诱发的视网膜黄斑退变、性器官脱垂及尿失禁。这些病变均属老年性慢性病，虽然不致死但大大影响人们的生活质量。因此，探索提高机体的弹性纤维的维护是提高人们生活质量的重要手段。弹性蛋白多聚体沉积是弹性纤维维持交联度的一个重要因素，早于2004及2006年，Liu 及其同事发现赖酰基氧化酶1 （Lysyl oxidase-like 1, LOXL1） 是特异地维护机体弹性纤维的发育及其更新的关键因子。没有LOXL1直接特异性地影响弹性纤维的交联形成，进而导致一系列的动态结缔组织的病变，包括皮肤松弛、肺气肿、心血管异常、血管增生诱发的视网膜黄斑退变、性器官脱垂及尿失禁。进一步研究发现，随着组织器官的老化，LOXL1的水平大大降低，并伴随着弹性纤维交联度的下降及弹性蛋白单体无序堆积的增加...
【技术保护点】
一种药物筛选方法，用于筛选出对LOXL1基因表达有促进作用的物质，其特征在于，所述药物筛选方法中，包括以下步骤：？A、构建由人LOXL1基因启动子控制表达ZsGreen的二代慢病毒载体：将人LOXL1基因启动子片段克隆到慢病毒载体pLVX？IRES？ZsGreen1上，并将慢病毒载体pLVX？ZsGreen上原有的CMV启动子置换下来，得到二代慢病毒载体pLenti？PLOXL1？ZsGreen，所述二代慢病毒载体pLenti？PLOXL1？ZsGreen含有由人LOXL1基因启动子控制表达ZsGreen的元件PLOXL1？ZsGreen；B、用二代慢病毒载体感染人成纤维细...
【技术特征摘要】
1.一种药物筛选方法，用于筛选出对LOXL1基因表达有促进作用的物质，其特征在于，所述药物筛选方法中，包括以下步骤：
A、构建由人LOXL1基因启动子控制表达ZsGreen的二代慢病毒载体：将人LOXL1基因启动子片段克隆到慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1上，并将慢病毒载体pLVX-ZsGreen上原有的CMV启动子置换下来，得到二代慢病毒载体pLenti-PLOXL1-ZsGreen，所述二代慢病毒载体pLenti-PLOXL1-ZsGreen含有由人LOXL1基因启动子控制表达ZsGreen的元件PLOXL1-ZsGreen；
B、用二代慢病毒载体感染人成纤维细胞，构建整合有PLOXL1-ZsGreen元件的人成纤维细胞；
C、药物筛选：将所述整合有PLOXL1-ZsGreen元件的人成纤维细胞接种于培养基中，贴壁过夜；将待测物质溶解于DMSO中并加入到人成纤维细胞的细胞培养基中；经过培养后，检测人成纤维细胞的绿色荧光强度，通过检测绿色荧光强度是否增加来判断待测物质对LOXL1基因表达的促进作用。
2.根据权利要求1所述的药物筛选方法，其特征在于，所述步骤B的具体过程为：
将二代慢病毒包装体系包装并浓缩成...
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