一种栉孔扇贝担轮幼虫细胞系的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种栉孔扇贝担轮幼虫细胞系的培养方法，栉孔扇贝担轮幼虫专用细胞培养基中添加维持细胞代谢需求的少量营养因子，即实现了栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞的良好生长状态，随着细胞的分裂能够实现细胞的稳定传代培养，操作简单且成本低廉，同时采用栉孔扇贝担轮幼虫专用无钙海水等渗缓冲液浸泡与机械法结合的方式实现了对细胞的完全解离，无需经任何酶类的消化，该培养方法对栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞的损伤小，成本低效率高，具有可重复性，本发明专利技术建立了一种稳定的海洋无脊椎动物细胞体外培养的方法，能够实现细胞的体外增殖和传代培养，是首个海洋贝类的连续细胞系，对除栉孔扇贝之外的其他贝类细胞建系具有重要的指导意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞培养
，尤其涉及一种栉孔扇贝担轮幼虫细胞系的培养方法。
技术介绍
截至目前国内外尚无人建立海洋双壳类细胞的体外培养体系，将范围扩展至软体动物门类，目前仅有一个细胞系成功建立，来自一种淡水蜗牛。细胞的取材：体外培养的细胞多取材于动物胚胎、成年动物组织、人体手术活体材料，幼虫细胞是兼具胚胎细胞和幼虫期特有细胞性质的高分裂能力的细胞，是一类具有体外培养前景的细胞来源。虾夷扇贝担轮幼虫细胞的体外培养。参考文献：Primary cell culture fromembryos of the Japanese scallop Mizuchopecten yessoensis(Bivalvia)(1991Cytotechnology)贻贝面盘幼虫细胞的体外培养。(备注：面盘幼虫是担轮幼虫下一个发育阶段。)参考文献：Isolation and partial characterization of myogeniccellsfrom mussel larvae i本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种栉孔扇贝担轮幼虫细胞系的培养方法，其特征在于，该培养方法包括以下步骤：将单个栉孔扇贝担轮幼虫细胞均匀分布在含有0.5毫升栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞专用高抗生素培养液的直径为35毫米细胞培养皿中，并放置到20？23℃的生化培养箱中培养，16？24小时后得贴壁的栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞；根据栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞专用培养基的颜色变化，每3？7天替换栉孔扇贝担轮幼虫细胞专用培养基2毫升，当栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞形成克隆时，挑取出来实现早期传代；当传代后的栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞长满细胞培养瓶底面后，采用机械传代法完成栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞的传代培养。

【技术特征摘要】
1.一种栉孔扇贝担轮幼虫细胞系的培养方法，其特征在于，该培养方法包
括以下步骤：
将单个栉孔扇贝担轮幼虫细胞均匀分布在含有0.5毫升栉孔扇贝担轮幼虫
体外培养细胞专用高抗生素培养液的直径为35毫米细胞培养皿中，并放置到
20-23℃的生化培养箱中培养，16-24小时后得贴壁的栉孔扇贝担轮幼虫体外培
养细胞；
根据栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞专用培养基的颜色变化，每3-7天替
换栉孔扇贝担轮幼虫细胞专用培养基2毫升，当栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细
胞形成克隆时，挑取出来实现早期传代；
当传代后的栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞长满细胞培养瓶底面后，采用
机械传代法完成栉孔扇贝担轮幼虫体外培养细胞的传代培养。
2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，栉孔扇贝担轮幼虫体外培
养细胞专用高抗生素培养液中添加有2500-25000单位/毫升青霉素、
2500-25000微克/毫升链霉素。
3.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述栉孔扇贝担轮幼虫体
外培养细胞专用培养基由L15基础培养基、5％胎牛血清、1％栉孔扇贝血清、2
毫摩尔谷氨酰胺、100单位/毫升青霉素、100微克/毫升链霉素构成。
4.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤五，当传代后的栉孔
扇贝担轮幼虫体外培养细胞长满细胞培养瓶底面后，采用机械传代法完成栉孔...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志峰，晏萌，季爱昌，毕颖，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：