一个微泡膜蛋白及其应用制造技术

细胞微泡与疾病有关，本发明专利技术涉及一个新发现的磷酸化CSE1L(染色体分离-1类蛋白，chromosome?segregation?1-like?protein)微泡膜蛋白及其应用。所揭示包含可与CSE1L或磷酸化CSE1L结合的组合物，用于分离、检测或结合微泡，应用于疾病诊断或治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一个新发现的磷酸化CSElL细胞微泡膜蛋白及其应用。
技术介绍
细胞微泡(microvesicles)是由细胞膜衍生释放到细胞外环境中的小粒子,其大小约直径O. Iym至100 μπι。微泡参与蛋白酶、基因、小分子核糖核酸(RNA)、激素受体、细胞胞器等，在细胞与细胞之间的转移，因而与多种疾病，包括癌症的恶化有关(Simak 2006； Cocucci 2009 ；Muralidharan-Chari2010)。肿瘤细胞的侵袭和转移为癌症患者死亡的主要因素。肿瘤细胞藉由分泌蛋白酶，分解细胞外基质而进行癌侵袭和癌转移。由肿瘤细胞释放的微泡，富含可分解细胞外基质的蛋白酶，从而在癌细胞的侵袭和转移上，起到重要作用(Cocucci 2009)。CSElL 蛋白(染色体分离-I 类蛋白，chromosome segregation 1-likeprotein)或称细胞凋亡易感蛋白(CAS, cellular apoptosis susceptibility protein)(GenBank登录号U33286),高度表现于多种癌症的组织检体(Brinkmannl995 ；Tung 2009 ；Tai 2010) o CSElL之前被Scherf等人发现可被细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulated kinase, E RK)憐酸化，因此是一个酪氨酸憐酸化蛋白(tyrosinephosphorylated protein),且Scherf等人发现酪氨酸磷酸化的CSElL蛋白其功能在于促使细胞蛋白由细胞质往细胞核运输(Scherf 1998)。目前所查资料表明，和CSElL蛋白相关的专利包括US6，664，057是关于鉴别一种与癌症有关之人类染色体20ql3. 2上之新颖扩增子(amplicon)(此扩增子含CSElL基因)。US 6，072，031是关于CSElL之互补脱氧核糖核酸(complementary DNA, cDNA)及胺基酸序列，用于侦测正常细胞及癌细胞中CSElL基因之表现及扩增，此外将反义CSElL基因序列引入活细胞中可抑制细胞凋亡。US 6，207，380是关于衍生自角蛋白/细胞角蛋白、CSElL或mat-8的多肽及多核苷酸于人体泌尿道组织之表现，用于侦测、诊断、监测、活体内造影、预防或治疗个体罹患泌尿系统疾病(如泌尿系统癌)。US 6，207，380亦揭示特异结合至泌尿道组织角蛋白/细胞角蛋白、CSElL或mat-8编码之多肽或蛋白质之抗体，该分子有助于治疗泌尿道疾病。故US6，207, 380描述利用特异结合至泌尿道组织之角蛋白/细胞角蛋白、CSElL或mat-8之抗体以治疗泌尿道疾病。US 6，232，086揭示CSElL之互补脱氧核糖核酸及胺基酸序列，用于侦测正常细胞及癌细胞中CSElL基因之表现及扩增。US 6，156，564是关于侦测人类增生性细胞之方法，其包含测量人体组织检体中CSElL蛋白质之表现量，以及侦测该人类蛋白质表现量较正常非增生性人类细胞之CSElL蛋白质表现量高至少两倍以上。US 6，440，737是关于调控CSElL基因表现之反义化合物、组合物及方法。US20080081339是关于测量几十个体液抗体，包括体液中CSElL “自体抗体“(非CSElL蛋白)作为前列腺癌的诊断标志物。US20050260639是关于检测从体液或身体组织分离出之“癌细胞”内的CSE1L，以诊断胰腺癌。W02009/052573是关于检测从体液或身体组织分离出之“癌细胞”内的几百个转录核糖核酸包括CSElL的核糖核酸，以诊断胃肠癌。US20100120074是关于测量体液中的CSElL蛋白以诊断转移性癌症。由上述之说明可知这些先前技艺(专利)的内容，都在侦测细胞层级之CSElL基因表现或体液CSElL蛋白。
技术实现思路
本专利技术的一方面涉及于体外分离、结合或检测微泡的方法，用以诊断或治疗疾病。在本专利技术的一方面涉及诊断肿瘤的方法，包含以下步骤1)取得哺乳动物之体液；2)于体外检测受检测个体体液中微泡的CSElL或磷酸化CSElL量；2)于体外检测正常个体体液中微泡的CSElL或磷酸化CSElL量做为对照组；3)依据受检测个体与对照组个体 体液中微泡的CSElL或磷酸化CSElL量的差别，判别受检测个体是否有肿瘤。在本专利技术的一方面涉及诊断肿瘤的方法，包含以下步骤1)取得哺乳动物之体液；2)于体外检测受检测个体体液中磷酸化CSElL量；2)于体外检测正常个体体液中磷酸化CSElL量做为对照组；3)依据受检测个体与对照组个体体液中磷酸化CSElL量的差别，判别受检测个体是否有肿瘤。在本专利技术的一方面涉及由体液分离微泡的方法，包含以下步骤1)取得哺乳动物之体液；2)于体外以可和CSElL或磷酸化CSElL结合的抗体，分离与抗体结合之微泡。在本专利技术的一方面涉及检测体液中微泡的方法，包含以下步骤1)取得哺乳动物之体液；2)于体外以抗CSElL抗体或抗磷酸化CSElL抗体，检测与抗体结合之微泡。在本专利技术的一方面也涉及以可和CSElL或磷酸化CSElL结合的抗体与细胞微泡结合，用于预防或治疗疾病的方法。优先考虑的疾病是癌症。在本专利技术的一方面也涉及以含有抗CSElL抗体或抗磷酸化CSElL抗体的组合物与细胞微泡结合，以用于诊断或治疗疾病。优先考虑的疾病是癌症。本专利技术的其它用途，特点，及优点可以从下面的详细描述和数据图标中显示。附图说明图I为本专利技术实施例I的图，以免疫墨点法(immunoblotting),分析B16-dEV,B16-ras, B16-CSE1L，和 B16_Ras/anti_CSElL 细胞的 Ras 和 CSElL 蛋白的表达量。图2为本专利技术实施例2的图，显示v-H-ras癌基因转染诱导癌细胞微泡生成。图3为本专利技术实施例3的图，显示v-H-ras癌基因转染增加癌细胞分泌CSE1L。图4为本专利技术实施例4的图，显示CSElL是一个磷酸化的蛋白。图5为本专利技术实施例5的图，显示v-H-ras癌基因转染增加癌细胞内CSElL蛋白之磷酸化，以及磷酸化CSElL蛋白存在于癌血清中。图6为本专利技术实施例6的图，显示磷酸化ERK与CSElL高表达于大肠直肠癌肿瘤，且相对表染色强度一致。图7为本专利技术实施例7的图，显示CSElL介导v-H-ras癌基因所诱导的癌细胞微泡生成。图8为本专利技术实施例8的图，显示CSElL介导v-H-ras癌基因所诱导的癌细胞侵袭。图9为本专利技术实施例9的图，显示CSElL介导v-H-ras癌基因所诱导的癌细胞转移。图10为本专利技术实施例10的图，显示CSElL位于微泡膜，而且抗CSElL的抗体能够寻找并结合肿瘤。图11为本专利技术实施例11的图，显示抗磷酸化CSElL抗体针对磷酸化CSElL蛋白 的专一'I"生结合。图12为本专利技术实施例12的图，显示磷酸化CSElL蛋白位于细胞微泡。图13为本专利技术实施例13的图，显示相对于由健康献血者血清中分离到的微泡，由癌症患者血清中分离到的微泡有较高的CSElL和磷酸化CSElL盛行率。图14为本专利技术实施例14的图，显示相对于健康献血者血清的磷酸化CSE1L，癌症患者血清有较高的磷酸化CSElL盛行率。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可结合CSE1L的抗体或可结合磷酸化CSE1L的抗体。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：江明聪，
申请(专利权)人：江明聪，
类型：发明
国别省市：