【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及,尤其涉及的是一种利用高效液相色谱法检测玉米细胞核DNA和线粒体DNA甲基化水平的方法。
技术介绍
随着DNA甲基化研究的逐步深入,DNA甲基化水平的检测已发展成为一门内容丰富的方法学。DNA甲基化常用的分析方法为MSAP法,该法被广泛应用于水稻、棉花和拟南芥等基因组的胞嘧啶甲基化评定。但是,MSAP法所使用的同裂酶(如HpaII和MspI)不能切割所有的甲基化位点,识别范围有限。相比较而言,HPLC法能方便、快速、准确地测定整个基因组的甲基化水平,它能在宏观上对整个基因组的DNA甲基化水平进行大规模的分析测 定,这恰恰是具有识别位点特异性的MSAP法所不具备的。HPLC法是生物化学、分子生物学、医药学等学科领域与专业最为重要的分离分析技术,也可以应用于测定全基因组DNA甲基化水平。继Wagner等首次用HPLC法测定植物5mC的含量以来,该法被广泛应用于植物DNA甲基化水平的检测。Johnston等用该方法对茶薦子基因组中5mC含量进行了分析,丁明丽用该法测定了小麦成熟胚脱分化过程中的DNA甲基化水平,表明HPLC方法可达到对植物DNA甲基化水平 ...
【技术保护点】
利用高效液相色谱法检测玉米细胞核DNA和线粒体DNA甲基化水平的方法,其特征在于,可供处理100份1μg?DNA的水解混合液配制方法为:将250U?Benzonase、300mU磷酸二酯酶I、200U碱性磷酸酶加入至5mL?pH为7.9的Tris?HCl水解缓冲液内;流动相的pH:对于线粒体DNA,用磷酸调节pH至3.42;对于细胞核DNA,用磷酸调节pH至3.0;色谱条件为:色谱柱:C18填料色谱柱;流速:0.8?mL/min,检测器波长:287nm;柱温:35℃;进样量:20uL;流动相:甲醇:5mM戊烷磺酸钠:三乙胺(10:90:0.2,V/V),并用磷酸调节pH分别至3.42和3.0。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:曹墨菊,荣廷昭,张晨,张艳花,汪静,卢艳丽,刘和洋,汪瀚宇,王继玥,曾文兵,汪生庆,刘坚,高世斌,周树峰,胡尔良,
申请(专利权)人:四川农业大学,
类型:发明
国别省市:
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