公开了病毒载体组合物，其包含表达一种或多种有生物活性的哺乳动物鸟苷酸环化酶蛋白的多核苷酸序列。还公开了将它们用于预防、治疗和/或改善至少部分源自于体内鸟苷酸环化酶缺陷的疾病、病症、异常状态或机能障碍的至少一种或多种症状的方法。在特定实施方案中，使用重组腺相关病毒（rAAV）载体来治疗或改善莱伯氏先天性黑蒙以及由功能性视网膜特异性鸟苷酸环化酶1（retGC1）的不存在或减少所引起的其他病症的症状。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
总的来说，本专利技术涉及分子生物学和病毒学领域，具体来说，涉及使用表达至少第一核酸区段的重组腺相关病毒(rAAV)组合物的方法，所述核酸区段编码至少第一治疗性基因产物，特别是那些可用于预防、治疗或改善哺乳动物眼睛的疾病、病症、创伤、损伤或机能障碍的一种或多种症状的产物。在特定实施方案中，本专利技术提供了包括表达生物功能性鸟苷酸环化酶肽、多肽或蛋白的rAAV载体的组合物，其用于一种或多种研究性、诊断性和/或治疗性方法中，包括例如治疗哺乳动物眼睛的一种或多种病症或疾病，特别是用于在人类中治疗先天性视网膜失明，包括视网膜营养不良例如I型莱伯氏先天性黑蒙(LCA1)。此外还提供了用于制备基于rAAV载体的鸟苷酸环化酶药物的方法，所述药物用于基于病毒载体、包括例如rAAV-LCAl载体的基因疗法中，在人类中治疗或改善鸟苷酸环化酶缺陷的一种或多种症状。相关技术描述莱伯氏先天性黑蒙(LCA)在1869年由德国眼科医生TheodorLeber博士首次描述为一种先天类型的视网膜色素变性(RP)，并且是最早和最严重的遗传性视网膜病形式，占所有遗传性视网膜营养不良的约6%。LCA是一类视网膜的退化疾病，并且是儿童先天性失明的最常见病因。这种常染色体隐性病状通常在婴儿出生时或其生命的第一个月期间被识别，其特征为完全失明或视力极大受损、眼底正常和视网膜电图(ERG)熄灭(参见例如Perrault等，1996)。尽管具有这些功能缺陷，但LCAl患者在他们的黄斑和周边视网膜两者中多年保留有一些视杆和视锥光受体。疾病的症状包括视网膜机能障碍、眼球颤动(眼球震颤)、视力受损、瞳孔反射慢和最终失明。通过遗传分析，已显示指派到LCAl基因座的鸟苷酸环化酶-I (Gucy2d)中的突变在所有报道的LCA病例中占20% (参见例如Milam等,2003 ；Perrault等，1996 ；Perrault等，2000)。患有LCAl的患者数量约为患有视网膜色素上皮特异性65-kDa蛋白(RPE65)缺陷的疾病形式(LCA2)的患者数量的两倍，后一种疾病形式近年中在基因疗法界内吸引了大量注意。据估计有200,000美国人患有I型莱伯氏病。Gucy2d编码鸟苷酸环化酶(retGCl)，其在光受体外段膜中表达(参见例如Dizhoor等，1994;Liu等，1994)，并在光转导的恢复期中发挥作用。降低或废止该酶活性的突变被认为在视杆和视锥光受体中产生慢性曝光的生物化学等同物。LCA通常被视为光受体发育受损或已正常发育的细胞的极早退化的结果。LCAl基因座(⑶CY2D)已通过纯合子定位法被定位于人类染色体17pl3. I(LCA1)。现有技术的缺点目前没有有效的预防或治疗方法可用在人类中预防或治疗LCAl。专利技术概述本专利技术通过提供新的、并非显而易见并且有用的基于rAAV的遗传构建物，克服了现有技术中固有的限制，所述构建物编码一种或多种治疗性哺乳动物多肽，特别是鸟苷酸环化酶家族的蛋白、肽、多肽，用于预防、治疗和/或改善由有生物活性鸟苷酸环化酶多肽·的活性的缺乏或缺陷而引起或加重的一种或多种哺乳动物疾病、病症或机能障碍，或其一种或多种症状。具体来说，本专利技术提供了编码一种或多种哺乳动物视网膜特异性鸟苷酸环化酶(retGCl)多肽的遗传构建物，所述构建物用于治疗诸如LCAl的病状以及由正常生理水平的鸟苷酸环化酶多肽的缺陷或缺乏所显示出的其他眼睛病状，例如隐性或显性形式的视锥-视杆营养不良。在一个实施方案中，本专利技术提供了包括至少第一多核苷酸的重组腺相关病毒(rAAV)载体，所述第一多核苷酸包含与编码至少第一哺乳动物鸟苷酸环化酶蛋白、肽或多肽的至少第一核酸区段可操作地连接的启动子。优选情况下，所述启动子是光受体特异性启动子(例如人类视紫红质蛋白激酶启动子)或遍在的启动子(例如截短的嵌合CMV-鸡β -肌动蛋白启动子)。优选情况下，所述第一核酸区段编码至少第一哺乳动物鸟苷酸环化酶蛋白、肽或多肽，其包含至少第一连续氨基酸序列区域或基本上由其构成或可选地由其构成，所述至少第一连续氨基酸序列区域与SEQ ID NO 1,SEQ ID NO :2、SEQ ID N0:3、SEQID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ IDN0:10或SEQ ID NO :11中描述的任一种或多种哺乳动物鸟苷酸环化酶蛋白中所示的至少约60、约70、约80、约90、或约100个或更多个连续氨基酸序列的至少第一序列区域具有至少约80%、约85%、或约90%或以上的同一性。在某些实施方案中，所述至少第一核酸区段优选编码包括至少第一连续氨基酸序列区域的至少第一哺乳动物鸟苷酸环化酶蛋白、肽或多肽，所述至少第一连续氨基酸序列区域在一级氨基酸序列上与 SEQID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO 10 和 SEQID NO 11中列出的任一种或多种哺乳动物鸟苷酸环化酶蛋白序列中所示的至少约100、约110、约120、约130、约140或约150个或更多个连续氨基酸序列具有至少约91%、约92%、约93%、约94%或约95%或以上的同一性。优选情况下，所述至少第一核酸区段编码至少一种或多种哺乳动物鸟苷酸环化酶蛋白、肽或多肽，其各自优选包含至少第一连续氨基酸一级序列，所述一级序列与包括SEQID N0:1、SEQ ID NO :2、SEQID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ IDNO 7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO 10 和 SEQ ID NO 11 的一项或多项中所示的至少第一鸟苷酸环化酶蛋白的至少约90、约110、约130、约150或约170个或更多个连续氨基酸的至少第一序列区域具有至少约95%、至少约96%、至少约97%、至少约98%或至少约99%的同一'I"生。优选情况下，本专利技术的rAAV载体包括编码至少第一哺乳动物鸟苷酸环化酶蛋白、肽或多肽的至少第一核酸区段，所述蛋白、肽或多肽包含SEQ ID NO 1, SEQ ID NO :2、SEQID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ IDN0:9、SEQ ID N0:10和SEQ ID NO :11的任一项或多项的氨基酸序列，或基本上由所述氨基酸序列构成或可选地由所述氨基酸序列构成，或者本专利技术的rAAV载体包括与一个或多个 这样的序列互补或在严紧至高度严紧杂交条件下与这样的序列特异性杂交的多核苷酸序列。优选情况下，所述第一哺乳动物鸟苷酸环化酶蛋白、肽或多肽在体外和在转化的哺乳动物细胞内、优选在转化的人类宿主细胞内具有鸟苷酸环化酶活性。在特定情况下，当编码所述鸟苷酸环化酶肽、蛋白或多肽的核酸区段与能够在哺乳动物本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：沙浓·伊丽莎白·博伊，威廉·W·豪斯威尔斯，桑福德·里昂·博伊，
申请(专利权)人：佛罗里达大学研究基金公司，
类型：
国别省市：
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