本发明专利技术公开了一种用于鉴定或辅助鉴定小麦春化基因VRN-1的引物对组及其应用。本发明专利技术所提供的引物对组由引物对组A、引物对组B和引物对组C组成；所述引物对组A中的四条引物由序列1、序列2、序列3和序列4所示DNA单链组成；所述引物对组B的三条引物由序列5、序列6和序列7所示DNA单链组成；所述引物对组C的三条引物由序列8、序列9和序列10所示DNA单链组成。本发明专利技术所提供的引物对组中各引物对之间不存在相互抑制作用和错配，检测结果可靠、重复性好，成本低，且特异性强，检测过程耗时短；本发明专利技术对检测小麦品种的冬春性，进而提高育种的效率，加强对育种高代的选择具有重要意义；另外，本发明专利技术使得在小麦推广和引种过程中，有更强的目标性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术 涉及一种用于鉴定或辅助鉴定小麦春化基因VRN-I的引物对组及其应用。
技术介绍
春化阶段是小麦生长发育的基本阶段之一。小麦的春化反应与其生育期及适应性密切相关，是指导小麦区划和新品种推广的主要依据之一，受春化基因控制。春化基因决定小麦全生育周期长短的7(T75%。Iwaki和Van Beem等研究表明，世界不同地区小麦品种的春化基因组成存在差异，反映了不同生态类型对品种春化反应的要求不同。春化基因VRN-I编码的蛋白为MADS-box转录因子，受低温诱导促进开花，是普通小麦春化作用的一类主要基因，包括3个位点VRN-A1、VRN-Bl和VRN-D1，分别位于5A、5B和5D染色体长臂上。3个基因位点不同的等位变异对春化作用的效应不同，显性等位变异Vm-Al的效应最强，表现为对春化作用高度不敏感，同时对Vrn-Bl和Vrn-Dl位点基因具有上位性效应；显性等位变异Vrn-Bl和Vrn-Dl对春化作用的敏感性较弱，两者之间未发现彼此间的上位作用。Yan和Fu等发现，VRN-I春化基因变异类型受其启动子区和第一个内含子区决定。在普通小麦中，VRN-Al位点有4种变异类型，分别为Vrn-Ala、Vrn-Alb、Vrn-Alc和vrn-Al，其中 Vrn-Ala、Vrn-Alb 和 Vrn-Alc 表现为显性，vrn-Al 为隐性；VRN_B1 和 VRN-D1位点一般通常存在两种等位变异类型，即显性和隐性等位变异。与隐性等位变异类型相比，显性等位变异Vrn-Ala和Vrn-Alb分别在启动子区域插入和缺失了一定数量的碱基序列，而显性Vrn-Alc、Vrn-Bl和Vrn-Dl在第一个内含子序列出现了大片段碱基的缺失。在普通小麦中，VRN-Al位点存在4种等位变异，需要用3对引物分别进行3次PCR检测；VRN-B1和VRN-Dl位点两种等位变异，需要用两对引物分别进行两次PCR检测。为此，检测I个小麦材料春化基因VRN-I的3个位点等位变异组成，需要连续进行7次PCR检测，检测程序繁琐，实验成本高。多重PCR这一概念自1988年由Chambercian等提出后，由于其快速、高效、低成本等一系列的优点，使得这项技术在生命科学领域得到了广泛的应用，如植物种质纯度鉴定、植物分子育种、植物病虫害检测等。利用多重PCR技术，在同一个PCR反应体系中加入两对或两对以上特异性引物进行扩增，可以同时检测出多个等位变异类型，降低检测成本，提高效益。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供用于鉴定或辅助鉴定待测小麦春化基因的多重PCR引物对组、试剂盒，以及利用所述多重PCR引物对组鉴定或辅助鉴定待测小麦春化基因的方法。本专利技术所提供的用于鉴定或辅助鉴定待测小麦春化基因的多重PCR引物对组，由引物对组A、引物对组B和引物对组C组成；所述引物对组A由特异于所述VRN-Al基因的两个引物对组成；所述引物对组B由特异于所述VRN-Bl基因的两个引物对组成；所述引物对组C由特异于所述VRN-Dl基因的两个引物对组成；所述引物对组A中，所述特异于VRN-Al基因的两个引物对分别为序列表中序列I和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对1，以及序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的引物对2 ；所述引物对组B中，所述特异于VRN-Bl基因的两个引物对分别为序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的引物对3，以及序列5和序列7所示的两条单链DNA组成的引物对4 ;所述引物对组C中，所述特异于VRN-Dl基因的两个引物对分别为序列表中序列8和序列9所示的两条单链DNA组成的引物对5，以及序列8和序列10所示的两条单链DNA组成的引物对6。其中，序列I由20个核苷酸组成；序列2由20个核苷酸组成；序列3由20个核苷酸组成；序列4由20个核苷酸组成；序列5由20个核苷酸组成；序列6由23个核苷酸组成；序列7由22个核苷酸组成；序列8由21个核苷酸组成；序列9由19个核苷酸组成 ’序列10由21个核苷酸组成。 本专利技术中，所述VRN-Al基因有四个等位基因，分别是Vrn-Ala、Vrn-Alb, Vrn-Alc和vrn-Al (前三个表现为显性，最后一个表现为隐性)；所述VRN-Bl基因有两个等位基因，分别是Vrn-Bl和vrn-Bl (前一个表现为显性，后一个表现为隐性)；所述VRN-Dl基因有两个等位基因，分别是Vrn-Dl和vrn-Dl (前一个表现为显性，后一个表现为隐性)。所述引物对组A中，所述序列I、所述序列2、所述序列3和所述序列4共四条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为f I. 5 Γ . 5 Γ . 5 Γ . 5 ;所述引物对组B中，所述序列5、所述序列6和所述序列7共三条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为2 2. 5 Γ . 5 2^2. 5 ;所述引物对组C中，所述序列8、所述序列9和所述序列10共三条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为广I. 5 Γ . 5 Γ . 5。在本专利技术的一个实施例中，所述引物对组A中，所述序列I、所述序列2、所述序列3和所述序列4共四条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为I : I I I ;所述引物对组B中，所述序列5、所述序列6和所述序列7共三条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为2 :I 2 ;所述引物对组C中，所述序列8、所述序列9和所述序列10共三条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为1:1:1。含有所述引物对组的试剂盒也属于本专利技术的保护范围。所述引物对组的制备方法也属于本专利技术的保护范围。该引物对组的制备方法可包括将所述引物对组中各序列所示单链DNA分别单独包装的步骤。所述试剂盒的制备方法也属于本专利技术的保护范围。该试剂盒的制备方法可包括如下步骤将所述引物对组中各序列所示单链DNA分别单独包装后，与下述物质中的至少一种包装在同一试剂盒内PCR反应缓冲液、DNA聚合酶和4种dNTP。鉴定或辅助鉴定待测小麦含有Vrn-Ala、Vrn-Alb, Vrn-Alc和vrn-Al这四种基因中哪一种、含有Vrn-Bl和vrn-Bl这两种基因中哪一种，以及含有Vrn-Dl和vrn-Dl这两种基因中哪一种的方法也属于本专利技术的保护范围。该方法具体可包括如下(I)和(2)步骤所述(I)为如下bl)、b2)和 b3):bl)以待测小麦的基因组DNA为模板，用所述引物对组中的所述引物对组A进行PCR反应，所述PCR反应的退火温度为60°C ；b2)以待测小麦的基因组DNA为模板，用所述引物对组中所述引物对组B进行PCR反应，所述PCR反应的退火温度为65°C ；b3)以待测小麦的基因组DNA为模板，用所述引物对组中的所述引物对组C进行 PCR反应，所述PCR反应的退火温度为65°C ；(2)检测步骤(I)得到的PCR产物的大小，按照如下方法根据PCR产物确定所述待测小麦含有Vrn-Ala、Vrn-Alb, Vrn-Alc和vrn-Al这四种基因中哪一种、含有Vrn-Bl和vrn-Bl这两种基因中哪一种，以及含有Vrn-Dl和vrn-Dl这两种基因中哪一种以所述引物对组A进行PCR反应，若所述PCR产物中同时含有715bp和624bp的两个DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有Vrn-Al本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于鉴定或辅助鉴定待测小麦春化基因的多重PCR引物对组，所述小麦春化基因为VRN？A1基因、VRN？B1基因和VRN？D1基因，其特征在于：所述多重PCR引物对组由引物对组A、引物对组B和引物对组C组成；所述引物对组A由特异于所述VRN？A1基因的两个引物对组成；所述引物对组B由特异于所述VRN？B1基因的两个引物对组成；所述引物对组C由特异于所述VRN？D1基因的两个引物对组成；所述引物对组A中，所述特异于VRN？A1基因的两个引物对分别为序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对1，以及序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的引物对2；所述引物对组B中，所述特异于VRN？B1基因的两个引物对分别为序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的引物对3，以及序列5和序列7所示的两条单链DNA组成的引物对4；所述引物对组C中，所述特异于VRN？D1基因的两个引物对分别为序列表中序列8和序列9所示的两条单链DNA组成的引物对5，以及序列8和序列10所示的两条单链DNA组成的引物对6。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：穆培源，张晓科，相吉山，张影全，桑伟，徐红军，韩新年，聂迎彬，崔凤娟，邹波，
申请(专利权)人：新疆农垦科学院，
类型：发明
国别省市：
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