用普鲁士蓝平板定量测定L-氨基酸氧化酶活力的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用普鲁士蓝琼脂平板定量检测L-氨基酸氧化酶活力的方法：用打孔器在普鲁士蓝琼脂平板上打出直径为4~10mm的小孔，然后将小孔中加入待测液，室温静置10~300min，待测液产生的过氧化氢在所述的小孔周围形成蓝色圈，测定蓝色圈的直径，根据过氧化氢与蓝色圈直径制作的标准直线来确定过氧化氢释放量，从而推论得L-氨基酸氧化酶活力；所述待测液以交替假单胞菌B3（Pseudoalteromonas?sp.B3）发酵培养获得的酶为酶源，以L-氨基酸为底物，25～50℃，pH为5～9条件下反应0.5～2h，获得的反应液即为待测液；本发明专利技术方法具有成本低，操作简单方便，适用性广，稳定性高等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及L-氨基酸氧化酶活力测试方法，特别涉及一种利用普鲁士蓝琼脂平板定量检测L-氨基酸氧化酶活力的方法。
技术介绍
L-氛基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,简称 LAA0,酶学编号为ECl. 4. 3. 2)是一种以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)或单核苷酸(FMN)为辅基的黄素蛋白酶。此酶能够特异性催化L-氨基酸的氧化脱氨生成α -酮酸、氨和过氧化氢。因此，它能被应用于L-氨基酸定量分析、LD-氨基酸的拆分和α-酮酸的制备。近年来有文献报道了 LAAO本身具有抗菌、杀虫、抗病毒等生物活性，还具有与血小板相互作用、细胞毒性及诱导细胞凋亡的作用，其在生物医药领域具有极其广阔的应用前景。·LAAO被发现广泛存在于微生物、蛇毒、鱼的表皮粘液、老鼠、海兔子等多种生物体中。目前检测LAAO活性的常用方法有2种，即荧光法和分光光度法。这2种方法均是依据测定由LAAO催化底物所生成的H2O2变化量来实现的。荧光法是依据酶促反应产生的H2O2可使无荧光性的高香草酸等物质转变为有强烈荧光的物质，根据反应体系荧光值的变化来测定LAAO酶活。此方法虽然测定精确度、灵敏度都较高，但本文档来自技高网...

【技术保护点】
用普鲁士蓝琼脂平板定量检测L？氨基酸氧化酶活力的方法，其特征在于所述方法为：（1）普鲁士蓝琼脂平板的制备：将10~30g/L氯化铁水溶液与10~30g/L铁氰化钾水溶液以体积比0.2~6:1混合制成混合液，然后将混合液与MM琼脂液以体积比1:5~20混合摇匀，在115℃下灭菌30min，倒平板，制成所述普鲁士蓝琼脂平板；所述MM琼脂液终浓度组成为：酵母膏0～10g/L、蛋白胨2～20g/L、琼脂15～30g/L，pH？5～9，溶剂为水；（2）L？氨基酸氧化酶活力的测定：取步骤(1)制得的普鲁士蓝琼脂平板，用打孔器在所述普鲁士蓝琼脂平板上打出直径为4~10mm的小孔，然后将小孔中加入待测液，室温...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余志良，周宁，裘娟萍，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：