一种海参体表细菌DNA提取方法技术

本发明专利技术公开一种海参体表细菌DNA提取方法，其通过对样品进行超低温冷冻以降低样品粘度，以利于样品中的细菌分散到具有缓冲、降低粘度的洗脱液Ⅰ中；再在菌体收集步骤中，通过多次低速离心除去样品中糊状的多糖和蛋白；粘多糖和杂蛋白的脱除步骤中，裂解液中添加了CTAB溶液以去除粘多糖，添加蛋白酶K以进一步去除可溶性杂蛋白的干扰；最终通过洗脱液Ⅱ抽提的方法，获得细菌DNA。本发明专利技术采用常用的试验试剂，无需特殊的实验条件，操作简单，重复性好，细菌DNA提取质量高。该方法适用于从富含多糖、蛋白样品中提取细菌DNA，具有广泛的应用范围、应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种海参体表细菌DNA提取方法。
技术介绍
近些年随着我国水产养殖、加工业的飞速发展，仿刺参养殖与加工数量逐年递增。开展仿刺参体表、肠道菌群多样性分析，可以为海参的微生态·学研究提供极好的原始资料和数据、为更好的了解海参携带的生物信息、为我国海参养殖和加工业的健康发展提供良好帮助。细菌总DNA提取方法较多，主要有CTAB、试剂盒、苯酚氯仿抽提等方法，在实际操作中切实可行。仿刺参表皮含有大量的粘液物质，其富含蛋白质和粘多糖，按照通用细菌总DNA提取方法，根本无法正常提取到海参体表细菌总DNA，提取的细菌DNA电泳图拖尾严重。根据多年的实验摸索和反复操作，在CTAB方法基础上，增加了样品前处理以降低样品的粘度，以及采用增加蛋白酶量和CTAB溶液去除杂蛋白和粘多糖物质，可获得理想的海参体表细菌DNA。微生物在自然界分布广泛，细菌DNA的提取极易受其所处环境的影响。通常处于空气、水体、土壤中的细菌可采用常规的细菌DNA提取方法。而附生、寄生的细菌通常处于植物或动物的体表或体内，生存环境富含多糖和蛋白质等营养物质，采用常规方法很难将它们与宿主分离，因此常本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海参体表细菌DNA的提取方法，其特征在于：包括以下步骤，（1）海参样品处理：取鲜活海参用无菌生理盐水冲洗三次，无菌封装后，迅速放置？80℃保存24h，取出海参在无菌条件下，用无菌刀片刨刮海参体表，将刨刮物放于无菌离心管中，50mL离心管装湿重6~10g的海参体表刨刮物；（2）海参体表菌体收集：①向步骤（1）获得的离心管中，加入15~20mL洗脱液Ⅰ，常温下300rpm震荡5~10min，使刨刮下的海参体表粘稠物与洗脱液Ⅰ充分混合；②4℃下1000rpm离心5~8min，去除下层海参组织沉淀物及上层糊状物，将剩余液体转移到另一无菌离心管中；③重复步骤②直至完全去除沉淀物和糊状物；④将步骤③所...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：侯红漫，张公亮，高美玲，孙黎明，王璐，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：