通过敲除基因构建高产几丁质酶苏云金芽胞杆菌的方法技术

通过敲除（yvoA）基因构建高产几丁质酶苏云金芽胞杆菌的方法属于生物工程技术领域。本方法首先以苏云金芽胞杆菌ATCC35646为出发菌株，以温度敏感型载体pKSV7为骨架构建一个基因敲除载体pKSV-ued，利用同源重组原理，通过双交换过程敲除苏云金芽胞杆菌ATCC35646菌株基因组yvoA基因的方法，构建了一个高产几丁质酶菌株CJ212。经过几丁质酶活测定，确定改良菌株产几丁质酶的能力大大提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及通过敲除yvoA基因提高苏云金芽胞杆菌几丁质酶产量的方法，属于生物工程

技术介绍
苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是一种革兰氏阳性菌,其在生长周期的稳定期形成的芽胞及伴胞晶体使其独具特性。由于苏云金芽胞杆菌制剂对靶标昆虫有特异性毒杀作用，且对人畜安全、不危害环境，在农业、林业和卫生害虫的防治上得到了广泛应用。许多Bt菌除了合成杀虫晶体蛋白夕卜，也能产生几丁质酶。Bt几丁质酶不仅具有杀虫增效作用，对病原真菌也有抑制作用，具有防治农作物病虫害的作用(Liu D, Cai J, Xie CC, Liu C，Chen YH. Purification and partial characterizationof a 36-kDa chitinase from Bacillus thuringiensis subsp. colmeri, and itsbiocontrol potential. Enzyme and Microbial Technology, 2010, 46(34): 252 - 256.Xiao L, Xie本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过敲除yvoA基因构建高产几丁质酶苏云金芽胞杆菌（Bacillus？thuringiensis）的方法，其特征在于该方法包括：第1、yvoA基因敲除载体pKSV？ued的构建第1.1、设计序列表中SEQ？ID？No.1所示的引物yvoAup？F和SEQ？ID？No.2所示的引物yvoAup？R，以苏云金芽胞杆菌ATCC35646基因组DNA为模版PCR扩增yvoA基因上游序列，获得1059bp的yvoAup核酸片断；第1.2、设计序列表中SEQ？ID？No.3所示的引物yvoAdown？F和SEQ？ID？No.4所示的引物yvoAdown？R，以苏云金芽胞杆菌ATCC35646基因组DN...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡峻，陈建，李丽娜，石天威，陈月华，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：