本发明专利技术公开了一株鸡源浸麻芽孢杆菌及其制备的菌剂和应用，鸡源浸麻芽孢杆菌保藏编号：CGMCC?NO.6573。育雏阶段按0.15wt%浸麻芽孢杆菌微生物菌剂添加入饲料中；育成阶段到上市日龄按0.1wt%浸麻芽孢杆菌微生物菌剂添加入饲料中。本发明专利技术通过从健康成年160日龄放养公鸡的盲肠内容物分离出一株浸麻芽孢杆菌。在经历人工胃肠道环境耐受选择后，优化该菌株的固体发酵条件并生产出含足够活菌数的浸麻芽孢杆菌微生物菌剂。本发明专利技术将微生物活菌制剂直接添加入饲料，笼养鸡肉中具有特征“鸡香味”挥发性风味组分和含量得到了显著地提高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株鸡源浸麻芽孢杆菌的筛选及其制备的菌剂对鸡肉风味的改善应用，属于生物
技术介绍
在厌倦少风味的饲料鸡或圈养鸡后，近年来，人们越来越追求散养下的口感、风味都更优的放养土鸡。后院养鸡作为农户提高经济收入的一种饲养方式。放养鸡在扩大的栖息环境下，足够的自由采食行为增加，不仅降低了饲料消耗，其鸡肉风味也更受到消费者的喜爱。有别于可控制的笼养条件，鸡在放养的环境中能自由接触到各种微生物，它们随着鸡啄食行为的发生进入肠道并定殖下来，对宿主的肠道微环境的形成、稳定、营养物质的吸收或提高饲料利用转化率都有影响。微生物菌剂添加入动物日粮中，益生菌以活的有机体形式对预防外界环境变化是 肠道菌群的紊乱作用明显，研究表明它可直接刺激免疫器官的发育，或使SIgA生物合成增力口，提高消化道黏膜免疫功能。而芽孢杆菌类的抑菌效果已发现有促进家兔机体免疫的作用；另外，芽孢杆菌在生长繁殖过程中产生的短链不饱和脂肪酸能降低肠道的PH值，而有效抑制病原菌的生长；或参与多种营养物质(如维生素、氨基酸、活性酶)的合成，并参与肠道内蛋白质、脂肪、微量元素的代谢，为动物新陈代谢提供能量。对禽肉风味的大量研究揭示，脂肪族芳香化合物对鸡肉风味区别于其他动物风味贡献重大。美拉德反应、脂质降解反应以及它们产生的物质相互作用能产生大量与鸡肉风味有关的挥发风味物。其中，肌肉中不饱和脂肪酸加热产生的许多脂质氧化的产物如2反，4反-癸二烯醛和Y -十二内酯具有较低的风味阈值，对特征性鸡肉风味非常重要。微生物在合成风味成分中发挥着积极的作用。比如乳酸乳球菌(LactococcusIactis)或其他乳酸菌产生了对乳制品的风味非常重要的物质一二乙酰。而谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)能提高卩比嗪类物质的含量,而增加肉中坚果和烘烤的风味。因此，通过对从160日龄健康放养鸡盲肠中分离筛选出的一株浸麻芽孢杆菌，在通过模拟人工胃肠道环境的耐受试验后，按照固体发酵最优化条件制备出粉状微生物菌剂，直接添加入鸡群饲料中，改善上市日龄时(72日龄)动物个体鸡肉风味指标的应用意义重大。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株从鸡盲肠内容物中分离筛选出的、并通过模拟人工胃肠道环境耐受试验的浸麻芽孢杆菌，并对该菌株以饲料原料为培养基的固体发酵条件优化，制备得到含浸麻芽孢杆菌活菌的微生物菌剂以及对改善鸡肉风味上的应用。一株鸡源浸麻芽孢杆菌，保藏编号=CGMCC NO. 6573。所述的鸡源浸麻芽孢杆菌制备的菌剂，制备方法包括以下步骤(1)种子培养将所述的鸡源浸麻芽孢杆菌菌株，在无菌条件下用接种环接I 2环于40ml液体种子培养基中，以120转/分钟的转速、37°C恒温摇床培养48h，得一级种子液；以接种环接2 3环于同样配方的液体种子培养基中，以120转/分钟的转速、37°C恒温摇床培养36小时，得二级种子液；(2)固体发酵培养以3% 10%质量比的接种量，将二级种子液接种于经121°C、30分钟灭菌的固体培养基中，按照料水比I : O. 9-1. 5 g/ml和容量比为8% 24%在发酵瓶进行混合后，置于恒温培养箱上，控制环境温度在35 42°C，并用带4层灭菌纱布封口 ；时常拍打发酵瓶壁，使上、中、下料舒散、混合，发酵72小时，发酵结束；(3)发酵产物晾干将发酵产物于干净搪瓷盘，加入两倍量饲用玉米粉(过40目筛)混合均匀，平摊散开放置于通风处自然风干，当含水率低于10%时结束风干过程，收集产物并粉碎，过40目筛，所得粉末即为含浸麻芽孢杆菌活菌的固体发酵成品。所述固体培养基的配方，按质量百分含量计2%葡萄糖，1%蛋白胨，O. 5%氯化钠，O. 5%牛肉膏，I. 7%琼脂粉，加灭菌水至完全溶解，调节pH至6. 8 7，高压121 °C灭菌30分钟后冷却备用； 所述液体培养基的配方，按质量百分含量计2%葡萄糖，1%蛋白胨，O. 5%氯化钠，O.5%牛肉膏，加灭菌水至完全溶解，调节pH至6. 8 7，高压121°C灭菌30分钟后冷却备用；上述固体发酵培养基配方及制备方法为以百分比计，将玉米、豆柏、麦麸打碎过40目筛，按照玉米600g，豆柏300g，麦麸50g，高压115°C灭菌15分钟，冷却后无菌条件下加磷酸缓冲液1000ml,自然pH即可。所述菌剂的应用，育雏阶段按O. 15wt%浸麻芽孢杆菌微生物菌剂添加入饲料中；育成阶段到上市日龄按O. lwt%浸麻芽孢杆菌微生物菌剂添加入饲料中。本专利技术从160日龄成年放养公鸡的盲肠内容物中分离筛选出一株浸麻芽孢杆菌，并优化菌株的固体发酵条件以提高有效活菌数的含量，每克固体发酵成品中浸麻芽孢杆菌活菌数达到6. 9X 109CFU/mL ;将该微生物菌剂添加到禽饲料中，饲喂笼养鸡群以开发出风味更佳的鸡肉。本专利技术通过从健康成年160日龄放养公鸡的盲肠内容物分离出一株浸麻芽孢杆菌。在经历人工胃肠道环境耐受选择后，优化该菌株的固体发酵条件并生产出含足够活菌数的浸麻芽孢杆菌微生物菌剂。本专利技术将微生物活菌制剂直接添加入饲料，笼养鸡肉中具有特征“鸡香味”挥发性风味组分和含量得到了显著地提高。具体实施例方式以下结合具体实施例，对本专利技术进行详细说明。实施例I :(I)宿主选择从散养鸡农户处选购一只健康的160日龄公鸡；除饲喂基础日粮夕卜，动物个体在充足的户外活动中自由觅食；(2)菌种分离与筛选分离自散养鸡盲肠内容物；取2g内容物置于80°C恒温水浴锅内IOmin后，直接涂抹于芽孢杆菌固体培养基上，37°C培养24小时；将芽孢杆菌固体培养基上生长所占比例最高的单个菌落重新接种在新的芽孢杆菌固体培养基上，37°C培养24小时；(3)菌株保藏步骤(2)筛选得到的浸麻芽孢杆菌SCS3菌株已于2012年9月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号=CGMCC NO. 6573,分类命名浸麻芽孢杆菌Bacillus macerans。(4)人工胃液耐受试验将(3)所述菌株，在无菌条件下按照系列稀释法在pH2 4的人工胃液中培养2小时，并进行稀释平板计数计算活菌数，以O小时活菌数为参照；人工胃液配方为依据中国药典2010版，取稀盐酸16. 4毫升，加水约800毫升与胃蛋白酶10克，摇匀后，加水稀释成1000毫升即得，放入4°C冰箱备用；(5)菌落计数以系列稀释法进行平板计数，结果为(3)所述菌种浸麻芽孢杆菌经人工胃液耐受试验后活菌数在PH2人工胃液中培养O小时后活菌数为2. 12X IO6CFU/mL，两小时后活菌数为2. 34 X 106CFU/mL ;在pH3人工胃液中培养O小时后活菌数为 3.lX106CFU/mL，两小时后活菌数为I. 3X106CFU/mL ;在？財人工胃液中培养O小时后活菌数为3. 3X 106CFU/mL，两小时后活菌数为2. 45 X 106CFU/mL。(6)人工胰液耐受试验将(3)所述菌株，在无菌条件下按照系列稀释法再人工肠液中培养O 3小时，并进行稀释平板计数计算活菌数，以O小时活菌数为参照。人工胰液配方为依据中国药典2010版，取磷酸二氢钾6. 8克，加水500毫升溶解，用O. 4%氢氧化钠回调pH本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株鸡源浸麻芽孢杆菌，保藏编号：CGMCC？NO.6573。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙静，刘益平，李念珍，熊彦，朱庆，钟航，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：
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