利用HPLC测定手性液液萃取水相布洛芬对映体浓度的方法，是一种手性液液萃取体系水相中布洛芬两种对映体的浓度的测定方法。该方法采用α1-酸性糖蛋白类手性柱，以甲醇-磷酸盐/磷酸缓冲盐作为流动相，在适当的紫外检测波长和流速下，通过校正曲线法测定手性液液萃取体系水相溶液中布洛芬两种对映体的浓度。该方法能够使布洛芬两种对映体达到基线分离，能够准确测定布洛芬对映体的浓度，该方法简单、快速、准确、有效，精密度高，重现性好，为S-布洛芬质量标准的制定建立了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种利用HPLC法测定手性液液萃取体系水相溶液中布洛芬对映体浓度的方法。
技术介绍
布洛芬(ibuprofen) 是一种重要的非甾体药物，因为其镇痛、消炎和退热的作用远比阿司匹林、保泰松和扑热息痛强而备受消费者青睐，多年来一直占据消炎镇痛类药物销售额的榜首。布洛芬分子α位是手性碳原子，存在一对光学活性异构体，化学结构式为 现代药理实验证明，其药理活性主要是S-型布洛芬产生的，S-型布洛芬的疗效比R-型布洛芬高约160倍，且主要的毒副作用都是由R-型布洛芬引起的。因此制备单一的S-布洛芬给药可以显著减小剂量、提高疗效、减少对人体的毒副作用。液液萃取分离布洛芬对映体技术由于在生产过程中易于实现自动化的连续生产以及能耗低的优点，被认为是一项具有开发前景的拆分技术。故建立一种准确测定布洛芬两种对映体浓度的方法，对其生产有重大指导意义，也能够推进手性药物开发技术健康有序的发展。迄今为止，仅有少量文献报道了布洛芬的色谱分析方法，主要由手性流动相添加法和正相色谱直接分析法两大类分析方法，前者比较有代表性的是李成平等(药物分析杂志，2005，25 (4) =426-428)以 Agilent Eclipse XDB-C8 柱作为分析柱，以水甲醇乙腈=78 17 5，其中羟丙基-β-环糊精的浓度是80mmol/L，0. 2%磷酸，pH=4. 50的液作为流动相，流速I. Oml/min，分离度约为I. 42，两种对映体的保留时间分别为48min和56min,尽管该方法拆分效果尚可，但是分析时间过长，进行液液萃取实验时往往需要分析的样品较多，该分析方法不利于提高实验效率。关于正相色谱直接法，Crowther等研究者(Anal. Chem.，1984，56，2921-2926)以Pirkle型手性固定相附着于硅胶颗粒上作为手性填P|Hg:254nm检测波长下，以正己烧异丙醇=97 3(体积比)作为流动相,在2ml/min的流速下实现了对布洛芬外消旋体的色谱拆分；宋少芳等(药物分析杂质，2002，22(1) :50-52)以Chiral OD-H柱作为分析柱，以正己烷醋酸=99 I作为流动相，成功的对布洛芬对映体实现了分离，该分析方法虽成功实现了布洛芬对映体的分离，但是存在的问题是作为流动相的色谱正己烷价格昂贵，另外该分析方法比较苛刻，溶解样品的溶液需为有机溶剂，且其极性不能大于流动相的极性，否则会降低分离度直至无法达到基线分离，不能满足手性液液萃取体系水相布洛芬对映体浓度的分析要求。因此迫切需要开发一种能够分析手性液液萃取体系水相溶液布洛芬对映体浓度的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种利用HPLC测定手性液液萃取水相布洛芬对映体浓度的方法，准确测定手性液液萃取水相布洛芬两种对映体的浓度。申请人:发现，以α「酸性糖蛋白类手性柱作为分析柱，以含有甲醇的磷酸钠-磷酸缓冲溶液作为流动相，在适当的检测波长和流速下可以将液液萃取体系水相溶液中的布洛芬对映体进行有效色谱分离，同时对于手性液液萃取体系，由于水相和油相经充分混合振荡，水相溶液中容易混入痕量有机溶剂，此时取样分析会引起色谱峰偏离基线，影响峰面积积分准确性，无法正确分离分析布洛芬对映体，加入甲醇能够显著改善这一状况。本专利技术采用的检测波长为220nm±3nm时，其中检测波长为220nm时， 紫外吸收强度适中，故检测波长优先选择220nm。本专利技术采用的缓冲盐溶液的pH值范围6. 5-7. O,使用pH值为7. O时，分离度最高，故选择pH值为7.0。本专利技术的方法的流动相中，缓冲盐-甲醇混合溶液中甲醇的体积分数是O. 5%-2%，选择甲醇体积分数为2%，原因在于保证达到基线分离的前提下，使用甲醇体积分数2%的流动相进行样品测试可以使分析时间最短，提高分析效率。本专利技术所述的分离分析方法，可按照以下方法实现(I)待测样品溶液的制备主要分为两种样品溶液的制备①将布洛芬外消旋体用磷酸盐/磷酸溶液溶解，配制成浓度为O. 0006g/L-0. 08g/L的溶液，通过色谱分析，得到布洛芬两种对映体浓度随峰面积的变化关系。②以布洛芬外消旋体溶于磷酸盐/磷酸溶液得到O. 08g/L的布洛芬外消旋体溶液作为水相，以L-酒石酸正戊酯的正辛烷溶液作为油相完成手性液液萃取实验，分液之后取水相布洛芬溶液过滤通过色谱分析得到水相中未知样品的峰面积。(2)样品检测采用以a r酸性糖蛋白作为填料的手性色谱柱，流动相为甲醇-磷酸盐/磷酸缓冲盐溶液，流速为O. 3-0. 5ml/min，检测波长为210_230nm，取步骤(I)制备好的待测样品溶液①和②分别注入HPLC，检测后得到谱图并进行分析，通过对样品溶液①进行分析得到浓度随峰面积变化的标准曲线，将样品溶液②的未知峰面积代入样品溶液①的标准曲线，得到手性液液萃取水相布洛芬两种对映体的浓度。进一步，步骤(2)所述的甲醇的体积分数为O. 5%-2. 0%。进一步，所述的甲醇的体积分数为2%。进一步，所述的磷酸盐为磷酸钠。进一步，步骤(2)使用甲醇-磷酸盐/磷酸缓冲盐溶液的pH值范围为6. 5-7. O。进一步，甲醇-磷酸盐/磷酸缓冲盐溶液的pH值为7. O。进一步,步骤(2)所述的流动相的流速为O. 5ml/min。进一步，步骤(2)所述的检测波长为220nm±3nm。其中HPLC仪岛津输液单元为LC-20AT，检测器为SPD-20A，脱气机为D⑶_A5s色谱柱AGP(日本 DAICEL 公司，IOOmmX4. 6mm, 5 μ m)手性柱流动相磷酸钠/磷酸缓冲盐甲醇=98 2 (体积比)检测波长220nm流速0.5ml/min 柱温室温由上述技术方案可知，本专利技术采用以a i-酸性糖蛋白类作为填料的Chiral-AGP(DAICEL公司，IOOmmX 4. 6mm, 5 μ m)手性色谱柱，能够有效的分析分离布洛芬对映体；选择磷酸钠/磷酸缓冲盐溶解样品，确保了溶液的稳定性；加入体积分数2%的甲醇，能够避免液 液萃取体系水相溶液混入的痕量有机溶剂导致的基线偏移，提高了分离分析的准确性；选择进样体积20 μ L，提高了色谱峰的对称性；表明该方法简单、快速、准确、有效，精密度高，重现性良好，为S-布洛芬质量标准的制定建立了基础。附图说明图I实施例1，甲醇(2%)-磷酸钠/磷酸(ρΗ=7· 0)，流速O. 5ml/min的HPLC谱图，测定手性液液萃取实验水相布洛芬溶液两种对映体的浓度，检测波长220nm图2实施例2，甲醇(O. 5%)-磷酸钠/磷酸(pH=6. 5)，流速O. 5ml/min的HPLC谱图，测定布洛芬外消旋体样品浓度为O. 02g/L，检测波长220nm图3实施例3，甲醇(2%)-磷酸钠/磷酸(pH=7. 0)，流速O. 3ml/min的HPLC谱图，测定布洛芬外消旋体样品浓度为O. 0006g/L，检测波长230nm图4实施例3，甲醇(2%)-磷酸钠/磷酸(pH=7. 0)，流速O. 5ml/min的HPLC谱图，测定布洛芬外消旋体样品浓度为O. 08g/L，检测波长210nm图5对比例1，异丙醇(1%)-磷酸钠/磷酸(pH=7. 0)，流速O. 5ml/min的HPLC谱图，测定手性液液萃取实验水相布洛芬溶液两种本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用HPLC测定手性液液萃取水相布洛芬对映体浓度的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）待测样品溶液的制备制备以下两种样品溶液：①将布洛芬外消旋体用磷酸盐/磷酸溶液溶解，配制成浓度为0.0006g/L？0.08g/L的溶液，通过色谱分析，得到布洛芬两种对映体浓度随峰面积的变化关系；②以布洛芬外消旋体溶于磷酸盐/磷酸溶液得到0.08g/L的布洛芬外消旋体溶液作为水相，以L？酒石酸正戊酯的正辛烷溶液作为油相完成手性液液萃取实验，分液之后取水相布洛芬溶液过滤通过色谱分析得到水相中未知样品的峰面积；（2）样品检测采用以α1？酸性糖蛋白作为填料的手性色谱柱，流动相为甲醇？磷酸盐/磷酸缓冲盐溶液，流速为0.3？0.5ml/min，检测波长为210？230nm，取步骤（1）制备好的待测样品溶液①和②分别注入HPLC，检测后得到谱图并进行分析，通过对样品溶液①进行分析得到浓度随峰面积变化的标准曲线，将样品溶液②的未知峰面积代入样品溶液①的标准曲线，得到手性液液萃取水相布洛芬两种对映体的浓度。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：任钟旗，程永琪，赵丹，郭志敏，张卫东，刘君腾，
申请(专利权)人：北京化工大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。