一种用于早期检测下颌前突的血清/血浆miRNA标志物及应用，该标志物为let-7i-3p或miR-595中的一种或者两种组合物。本发明专利技术所述的血清/血浆miRNA标志物研制出的检测试剂或工具，为下颌前突的发生和进展机制的研究提供数据支持；通过血清/血浆miRNA标志物诊断试剂盒的研制和应用，使得下颌前突的早期检测方便易行，为口腔正畸临床医生及早发现骨性下颌前突并采取有效恰当的治疗方案提供有力的支持，从而有效地减少了治疗时间并避免了不必要的往返治疗，还能够对病例进行治疗动态评估及预后监测，从而有助于减少下颌前突的复发。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及一种用于早期检测下颌前突患者的血清/血浆miRNA标志物及其应用。
技术介绍
下颌前突导致的前牙反合是口腔正畸临床的常见畸形。前牙反合，俗称“地包天”，表现为正中咬合时上前牙位于下前牙内侧，可影响牙齿和面型的美观、降低咀嚼效率，甚至导致颞下颌关节病并影响心理健康。由于复杂的颅颌面结构及不可预测的下颌生长方向，下颌前突所致的骨性反合治疗难度很大，且治疗后易复发，部分患者在治疗5-8年后仍需要正畸和正颌手术联合治疗。骨性反合是逐渐发育形成的，下颌前突的早期检测诊断有利 于治疗方案的制定，也有利于疗效的评估和复发机率的预测。下颌前突无论是对患者本身的生活还是心理都有较大的危害，但是目前的体检方法无法准确地判断前牙反合到底是由骨性的下颌前突还是单纯的功能性错合导致。因此，要有效地治疗下颌前突，获得更好的治疗效果和预后情况，就需要获得更为灵敏、特异、易于检测的标志物。microRNA (miRNA)是一类非编码的单链小分子RNA，广泛存在于各生物物种中，目前发现有8000余种。它可与信使RNA(mRNA)上任意与之互补的序列相结合而抑制基因转录，或者使mRNA降解从而抑制基因表达。在各类小RNA中，miRNA具有最广泛的调节功能，它能对基因活动(生长、分化、凋亡等)的各个层面进行调节，它在细胞中担当“刹车”的功能，保障基因表达的准确性，在疾病的发生发展中发挥重要作用。miRNA虽然只占人类基因总数的2%，却调控着人类30%以上的基因的表达。它被Science杂志评为2002年度“十大科学突破”之首，超过物理学界的中微子等重大发现，Nature、Science等杂志曾连续四年强调其重要性；miRNA研究的突破性进展，被称为可与HGP (人类基因组计划)相提并论，是生物医学领域近20年来重大成果之一。目前，围绕miRNA的研究在国内外正如火如荼地进行着，我们不难推测miRNA将是未来几年内研究的焦点之一。miRNA不仅具有高度的组织特异性，以往研究还表明血清/血浆在室温24小时后再反复冻融8次，其中miRNA含量仍保持不变，它们的稳定性使得其实际值与在病人身上得到的测试值吻合得很好，从而在判断血清/血浆异常表达miRNA的功能时有其可行性。寻找疾病的生物学标志一直是一个重要的研究领域。从患病部位(如肿瘤组织等)取组织测定蛋白或核酸表达，寻找该病的生物学标志，有利于了解该疾病的形成机制，以及早期诊断和治疗、疗效检测等，但该操作创伤较大，不利于临床广泛开展。血清/血浆样本采集方便、创伤性小，易于实施，IOul便足够分析数十种miRNA的表达水平。近来研究表明血清/血浆miRNA标志物在骨骼和颅颌面发育过程中发挥着重要调控作用，并可用于多种疾病的前期诊断和治疗指导，但还没有关于血清/血浆miRNA用于检测下颌前突方面的报道。
技术实现思路
解决的技术问题本专利技术的首要目的在于针对现有技术的上述不足，提供一种用于早期检测下颌前突的血清/血浆miRNA标志物。本专利技术的另一目的是提供上述血清/血浆miRNA标志物在制备上颌前突早期诊断、预后检测的试剂盒中的应用。本专利技术的又一目的是提供用于下颌前突早期检测的试剂盒。申请人:通过分离和研究下颌前突及年龄匹配的正常对照血清/血浆中的miRNAs，寻找与下颌前突高度相关的高特异性和敏感性的miRNAs，为下颌前突的早期检测、筛查和诊断提供数据支持，为下颌前突的预后及临床治疗效果的评价提供数据支持。技术方案 一种用于早期检测下颌前突的血清/血浆miRNA标志物，该标志物为let_7i_3p或miR-595中的一种或者两种组合物。上述用于早期检测下颌前突的血清/血浆miRNA标志物在制备早期检测下颌前突的试剂盒中的应用。一种下颌前突早期检测诊断试剂盒，该试剂盒用于检测血清/血浆中let-7i_3p或miR-595中的一种或者两种组合物。一种下颌前突早期诊断试剂盒，该试剂盒含有一种或者两种血清/血浆miRNA标志物的引物let-7i_3p的引物(Taqman引物探针货号002172)和miR-595的引物(Taqman引物探针货号001987),可由Applied Biosystems公司(美国)购得。所述诊断试剂盒，该试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如Taq酶，逆转录酶，缓冲液，dNTPs, MgCl2和DEPC水等；还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术所述的血清/血浆miRNA标志物的筛选方法包括以下步骤(图I)(I)建立统一标准的标本库和数据库以标准操作程序(SOP)从医院采集的血液样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料。(2)血清/血衆miRNA差异表达谱分析采用microarray生物芯片，对下颌前突患者和正常对照者的血清/血浆中已知的人全部成熟miRNAs进行检测，筛选出差异表达的miRNAs :let-7i_3p (SEQ ID No. I),miR-595 (SEQ ID No.2),miR-16-2_3p (SEQ ID No. 3)和 miR-367-5p (SEQ ID No. 4)(表 I)。(3)用实时定量PCR方法(Taqman探针法)筛选可用作检测标志物的血清/血浆miRNA:对下颌前突患者和正常对照者的血清/血浆进行miRNA的提取，逆转录，并进行大样本实时定量分析验证，确定能够用于区分下颌前突患者和正常对照组的miRNAs let-7i-3p (SEQ ID No. I)和 miR-595 (SEQ ID No. 2)。(4)血清/血浆miRNA诊断试剂盒的研制根据实时定量PCR最终筛选出的差异表达的血清/血衆miRNAs,开发特异miRNAs( let-7i_3p、miR-595中的一种或者两种)诊断试剂盒，实现临床上对下颌前突的早期检测和预后监测的目的。诊断试剂盒包括let-7i-3p、miR-595的Taqman引物探针,逆转录酶，Taq酶,缓冲液，dNTPs等试剂。本专利技术使用的检测方法可以选自microarray生物芯片、miRNA提取、逆转录、实时定量PCR方法中的一种或几种。以下是本专利技术进一步的说明在microarray生物芯片测序结果,本专利技术人检测到18例下颌前突和18例正常对照血清/血浆中存在差异表达且有统计学意义(P〈0. 05)的miRNAs包括miR-16-2_3p，miR-369_3p, miR-24-2_5p, miR_450a, miR-500a_3p，miR-595, miR-502_3p, miR-18a_3p,miR-367_5p, miR-3142, let_7i_3p。根据上述结果,选择满足下列条件的miRNAs并用实时定量PCR进一步验证1)两组的差异倍数达2倍及2倍以上(P〈0. 05)的miRNA作为本专利技术中初步筛选出的血清/血浆marker ;2)这些miRNAs在两组研究对象中的芯片拷贝数都要大于50，以提高检测效率。满足上述条件的miRNAs 包括miR-16-2-3p，miR-595，miR-367-5p，let_7i_3p (图2)。实时定量PCR结果发现在剩下的42例下颌前突和50例正常对照样本中，有2种miRNAs在下颌前突组和正常对照组中的表达情况存在显著本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于早期检测下颌前突的血清/血浆miRNA标志物，其特征在于该标志物为let？7i？3p或miR？595中的一种或者两种组合物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马俊青，王林，张阳，谷妍，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：
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