一种快速高效检测亚硫酸盐处理后DNA甲基化修饰的PCR方法技术

本发明专利技术涉及一种快速高效检测亚硫酸盐处理后DNA甲基化修饰的PCR方法。采用的技术方案是：1）设计一对外部引物A1和A2，一对内部引物B1和B2；2）PCR扩增：包括两轮PCR过程，第一轮PCR为降落式PCR，所用引物为A1和A2，或A1和B2，或B1和A2；第二轮PCR的扩增为普通PCR，所用引物为B1和B2，模板为第一轮PCR产物1-2ul，所用酶为ExTaq或普通rTaq；3）扩增产物小于700bp。本发明专利技术具有扩增效率高、实验成本低、实验周期短、检测快速易掌握且实验结果稳定性好、在实验室中易完成的特点，可以广泛应用到人类、哺乳动物以及植物基因组特定基因的甲基化修饰检测中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，尤其涉及表观遗传学修饰中DNA甲基化修饰方式的检测手段。
技术介绍
DNA甲基化(DNA methylation)是真核生物基因组最常见的一种DNA共价修饰形式，是表观遗传学的一个重要方面。DNA甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)和少量的N6-甲基腺嘌呤(N6-mA)及7-甲基鸟嘌呤(7_mG)。真核生物中，DNA甲基化主要是以5-甲基胞嘧啶的形式存在。由于DNA甲基化特别是胞嘧啶甲基化在真核生物基因组中十分普遍，故受到生命科学界的极大关注。大量研究表明，DNA甲基化参与了高等生物的多种细胞活动。这其中主要包括组织特异性基因的表达，异染色质的形成，发育机制，转座子的转 座激活，X染色体的失活，基因组印记和肿瘤基因的形成等。DNA甲基化还能引起染色体结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质互作方式的改变，从而控制基因表达。因此，对于真核生物(特别是人类和植物)的甲基化修饰作用与基因“时”，“空”表达调控之间的关系；是分子生物学中非常热点的研究之一。然而如何利用快速简易的方法检测出甲基化的修饰位点是一棘手问题，目前应用的比较广泛的方法是亚硫酸盐本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速高效检测亚硫酸盐处理后DNA甲基化修饰的PCR方法，其特征在于包括如下步骤：一）设计一对外部引物A1和A2，一对内部引物B1和B2；二）PCR扩增：包括两轮PCR过程，第一轮PCR的扩增参数：1）一轮扩增参数：95℃或94℃？？45S或30S，62℃？？45S或30S，72℃？？60S；2）以后每轮退火温度递减1℃，扩增9轮；或退火温度递减0.7℃，扩增11轮；3）然后按下列参数扩增25轮：95℃或94℃？？45S或30S，52℃？45S或30S，72℃？？60S；4）第一轮PCR为降落式PCR，所用引物为A1和A2，或A1和B2，或B1和A2；？第二轮PCR的扩增参数1）按照下列参数...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王红艳，王秋雨，韩阳，周婵，王铮，
申请(专利权)人：辽宁大学，
类型：发明
国别省市：