鸡产蛋性状相关基因—BMP15基因SNP分型试剂盒制造技术

鸡产蛋性状相关基因—BMP15基因SNP分型试剂盒，属于生物技术领域。其特征是所述的试剂盒由盒体，盒体内的衬垫，衬垫的各孔腔内分别置入的引物混合物P、DNATag酶、扩增缓冲液、dNTP、Buffer和内切酶组成。本实用新型专利技术通过设计特异性引物，PCR扩增和RFLP方法，使得产物更具特异性，保证了SNP分型的准确性。本实用新型专利技术设计合理，使用方便、结果可靠且成本低廉。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于生物
，利用PCR-RFLP技术检测提供一种鸡产蛋性状相关基因一骨形态发生蛋白15 (BMP15)SNP分型的试剂盒。
技术介绍
骨形态发生蛋白15 (bone morphogenetic protein 15, BMP15)是 β -转化生长因子(TGF-β )超家族的成员之一，是一种在卵巢中优先表达的卵母细胞衍生因子(Ostukaat el 2001)，对卵泡发育、优质卵泡的选择及排卵等雌性生殖过程的许多环节都起着关键作用(Patricia at el 2000 ；Shimasaki at el 2004)。研究表明，BMP15 基因在鸡的卵巢 中优先表达，并能启动信号转导因子的信息通路，对促性腺激素诱导孕酮生成具有强烈的抑制作用(Elis at el 2007)，说明BMP15基因对鸡的产蛋性能起着重要的调控作用。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP),作为第三代遗传标记已得到飞速发展，目前已经有多种发展成熟的检测技术，如单链构象多态性(SSCP)、限制性酶切片段长度多态性(RFLP)、DNA芯片以及Taqman探针等技术手段。限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术就是利用PCR扩增目的DNA，扩增产物再用特异性内切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝胶电泳上分型。该技术具有特异性高、检测快速、通用性强、适用范围广、成本低廉等特点，目前已成功应用于人类疾病及禽病相关基因分子标记的SNP检测和基因诊断试剂盒的研发。经过对现有国内外文献和专利的检索，至今未见有BMP15基因多态性位点与鸡产蛋性状相关性的报道。
技术实现思路
本技术的目的是为了给鸡产蛋性状相关基因一BMP15基因C397T的检测提供一种准确性高、快速、价格低廉的基因分型试剂盒。本技术的目的是通过以下技术方案实现的，鸡产蛋性状相关基因一BMP15基因SNP分型试剂盒，其特征是所述的试剂盒由盒体，盒体内的衬垫，衬垫的各孔腔内分别置入的引物混合物P、DNA Tag酶、扩增缓冲液、dNTP、Buffer和内切酶组成。其中引物混合物P详细信息如下引物混合物P表示用于BMP15基因PCR扩增的上下游引物混合物，引物信息如下上游引物5’GGGTTTTAGCCCTGATCTTGCACTC 3’下游引物5’ATCACCCATTGCCACCACCTTACCT 3，。本试剂盒使用方法I、PCR扩增SNP位点所在片段I) PCR扩增反应体系准备PCR的反应体系为20μ1，其中包括扩增缓冲液(IOXbuffer)2. 5 μ 2. 5mM dNTP2. Ομ 引物P (5uM) μ 模板DNA (约 δΟ ng )IM-I5U/ul TaqO. 5M-I加水补至20μ1在200μ1的PCR薄壁管中，按照以上反应体系加入试剂，充分混匀后短暂离心。2 ) PCR扩增反应程序设置在^pendorf PCR仪上设置如表I所述，程序设置完毕后，将PCR反应管放入PCR仪进行反应扩增。表I PCR扩增反应程序 94!C5分钟 94;C__IJf_SS1C30秒35循琢 72;C15 秒 72CC10分钟 4 cC_ 保存_3)反应结束后，取5μ1反应产物在2%琼脂糖胶，I X TBE中电泳，检测反应是否成功。2、RFLP酶切并鉴定基因型第一步所得PCR产物取7ul，加入2ullOXbuffer (内切酶配套)，内切酶(Bar I )0. 5ul，超纯水10. 5μ1，充分混匀后短暂离心，然后放入37°C水浴锅中水浴10小时，最后取6ul酶切产物在3%琼脂糖凝胶，I X TBE中电泳，用凝胶成像分析系统显像，鉴定基因型。本技术通过设计特异性引物，PCR扩增和RFLP方法，使得产物更具特异性，保证了 SNP分型的准确性。本技术设计合理，使用方便、结果可靠且成本低廉。附图说明图I为本技术的结构示意图。图2为本技术中BMP15基因PCR产物扩增图。图3为本技术BMP15基因PCR产物RFLP分型。图中I、盒体；2、衬垫；3、引物混合物P ;4、DNA Tag酶；5、扩增缓冲液;6、dNTP ;7、Buffer ;8、内切酶。具体实施方式本技术结合具体实施例和附图作进一步说明。应理解，这些实施例仅用于说明目的，而不用于限制本技术的范围。鸡产蛋性状相关基因一BMP15基因SNP分型试剂盒，由盒体，盒体内的衬垫，衬垫的各孔腔内分别置入的引物混合物P、DNA Tag酶、扩增缓冲液、dNTP、Buffer (内切酶缓冲液)和内切酶组成。运用本试剂盒对260只邵伯鸡母系母鸡BMP15基因C397T SNP位点进行分型。I、样品采集260只邵伯鸡母系母鸡的血液，应用传统的苯酚/氯仿法提取DNA，并将DNA 浓度稀释到50ng/ μ I。2、PCR扩增反应及结果PCR扩增及检测结果按照试剂盒使用方法进行 PCR扩增SNP位点所在片段I) PCR扩增反应体系准备PCR的反应体系为20μ1，其中包括扩增缓冲液(IOXbuffer)2. 5μ12. 5mM dNTP2. Ομ 引物P (5uM) μ 模板DNA (约 50 ng ) μ 5U/ul Taq0. 5M-I加水补至20μ1在200μ1的PCR薄壁管中，按照以上反应体系加入试剂，充分混匀后短暂离心。2) PCR扩增反应程序设置在^pendorf PCR仪上设置如表I所述，程序设置完毕后，将PCR反应管放入PCR仪进行反应扩增。表I PCR扩增反应程序权利要求1.一种鸡产蛋性状相关基因一BMP15基因SNP分型试剂盒，其特征是所述的试剂盒由盒体，盒体内的衬垫，衬垫的各孔腔内分别置入的引物混合物P、DNA Tag酶、扩增缓冲液、dNTP、Buffer和内切酶组成。专利摘要鸡产蛋性状相关基因—BMP15基因SNP分型试剂盒，属于生物
其特征是所述的试剂盒由盒体，盒体内的衬垫，衬垫的各孔腔内分别置入的引物混合物P、DNATag酶、扩增缓冲液、dNTP、Buffer和内切酶组成。本技术通过设计特异性引物，PCR扩增和RFLP方法，使得产物更具特异性，保证了SNP分型的准确性。本技术设计合理，使用方便、结果可靠且成本低廉。文档编号C12Q1/68GK202671540SQ201220222519公开日2013年1月16日 申请日期2012年5月17日 优先权日2012年5月17日专利技术者黄华云, 黎寿丰, 赵振华, 李春苗 申请人:江苏省家禽科学研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡产蛋性状相关基因—BMP15基因SNP分型试剂盒，其特征是所述的试剂盒由盒体，盒体内的衬垫，衬垫的各孔腔内分别置入的引物混合物P、DNA？Tag酶、扩增缓冲液、dNTP、Buffer和内切酶组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄华云，黎寿丰，赵振华，李春苗，
申请(专利权)人：江苏省家禽科学研究所，
类型：实用新型
国别省市：