稳定的功能嵌合纤维二糖水解酶I类酶制造技术

本发明专利技术内容涉及CBH?I嵌合体融合的多肽、编码该多肽的核酸以及用于产生该多肽的宿主细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开内容涉及生物分子工程和设计，以及工程化的蛋白和核酸。背景纤维素酶混合物在生物质转化过程中的表现除了取决于纤维素底物的物理状态和组成以外，还取决于许多酶特性，包括稳定性、产物抑制、不同纤维素酶组分之间的协作、生产性结合(productive binding)相对非生产性吸附(nonproductive adsorption)、以及pH依赖性。鉴于纤维素水解的多变量性质，具有多样的纤维素酶选择来优化用于不同应用和原料的酶制剂是令人期望的。概述本公开内容提供了大体纯化的嵌合多肽，其包括来自至少两个不同的亲本纤维二糖水解酶I (CBH I)多肽的至少两个结构域，其中这些结构域从N端到C端包含(区段1)_(区段2)-(区段3)-(区段4)-(区段5)-(区段6)-(区段7)-(区段8);其中区段I包含与 SEQ ID NO 2( “1”)、SEQ ID NO :4( “2，，)、SEQ ID NO :6( “3，，)、SEQ ID NO :8( “4”)或SEQ ID NO :10 (“5”)的氨基酸残基从大约I或从大约18或19到大约X1至少50-100%相同的序列；区段 2 包含与 SEQ ID NO :2(“1”)、SEQ ID NO :4( “2”)、SEQ ID NO :6( “3”)、SEQID NO :8( “4”)或 SEQ ID NO :10( “5”)的氨基酸残基 X1 到大约 X2 至少 50-100%相同的序列;区段 3 包含与 SEQ ID NO 2( “1，，)、SEQ ID NO :4( “2，，)、SEQ ID NO :6( “3”)、SEQ ID NO 8( “4”)或 SEQ ID NO :10( “5”)的氨基酸残基 X2 到大约 X3 至少 50-100%相同的序列；区段 4 包含与 SEQ ID NO 2( “1，，)、SEQ ID NO :4( “2，，)、SEQ ID NO :6( “3”)、SEQ ID NO 8( “4”)或 SEQ IDNO :10( “5”)的氨基酸残基 x3 到大约 x4 至少 50-100%相同的序列;区段 5 包含与 SEQ ID NO 2( “1，，)、SEQ ID NO :4( “2，，)、SEQ ID NO :6( “3”)、SEQID NO 8( “4”)或 SEQ ID NO :10( “5”)的氨基酸残基 X4 到大约 X5 至少 50-100%相同的序列；区段 6 包含与 SEQ ID NO 2( “1，，)、SEQ ID NO :4( “2，，)、SEQ ID NO :6( “3”)、SEQ ID NO 8( “4”)或 SEQ ID NO :10( “5”)的氨基酸残基 x5 到大约 x6 至少 50-100%相同的序列;区段 7 包含与 SEQ ID NO 2( “1，，)、SEQ ID NO :4( “2，，)、SEQ ID NO :6( “3”)、SEQ ID NO 8( “4”)或SEQ IDNO :10( “5”)的氨基酸残基X6到大约X7至少50-100%相同的序列；及区段 8 包含与 SEQ ID NO :2( “1，，)、SEQ ID NO :4( “2”)、SEQ ID NO :6( “3”)、SEQID NO :8( “4”)或SEQ ID NO :10( “5”)的氨基酸残基X7到大约X8至少50-100%相同的序列；且其中X1是SEQ ID NO :2、4、6或8的残基47、48、49、50、51或52，或是SEQ ID NO:10 的残基 48、49、50、51、52 或 53 ;x2 是 SEQ ID NO :2 或 10 的残基 92、93、94、95、96 或 97，或是 SEQ ID NO :4、6 或 8 的残基 91、92、93、94、95 或 96 ;x3 是 SEQ ID NO :2 的残基 127、128、129,130,131 或 132，或是 SEQ ID NO :4 或 6 的残基 125、126、127、128、129 或 130，或是 SEQID NO :8 的残基 126、127、128、129、130 或 131，或是 SEQ ID NO : 10 的残基 123、124、125、126、127 或 128 ;x4 是 SEQ ID NO :2 的残基 175、176、177、178、180 或 181，或是 SEQ ID NO 4或 SEQ ID NO :6 的残基 173、174、175、176、177 或 178，或是 SEQ ID NO :8 的残基 174、175、176、177、178 或 179，或是 SEQ ID NO : 10 的残基 171、172、173、174、175 或 176 ;x5 是 SEQ IDNO :2 的残基 221、222、223、224、225 或 226，或是 SEQ ID NO :4 或 SEQ ID NO :6 的残基 219、220、221、222、223 或 224，或是 SEQ ID NO 8 的残基 220、221、222、223、224 或 225，或是 SEQID NO :10 的残基 217、218、219、220、221 或 222 ;x6 是 SEQ ID NO :2 的残基 268、269、270、271、272 或 273，或是 SEQ IDNO :4 或 SEQ ID NO :6 的残基 266、267、268、269、270 或 271，或是 SEQID NO :8 的残基 267、268、269、270、271 或 272，或是 SEQ ID NO : 10 的残基 264、265、266、267、268 或 269 ;x7是SEQ ID NO :2 的残基 384、385、386、387、388 或 389，或是 SEQ IDNO :4 的残基 385、386、387、388、389 或 390，或是 SEQ ID NO :6 的残基 378、379、380、381、382或 383，或是 SEQ ID NO :8 或 10 的残基 383、384、385、386、387 或 388 ;并且 X8 是对应于 ·SEQID NO 2 的残基 454、SEQ ID NO 4 的残基 457、SEQID NO 6 的残基 458、SEQ ID NO 8 的残基 453、SEQ ID NO : 10 的残基 455、或者具有序列 SEQ ID N0:2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO :8或SEQ ID NO :10的多肽的C端的氨基酸残基，且其中嵌合多肽具有纤维二糖水解酶活性和与包含SEQ ID NO :2、4、6、8或10的CBH I多肽相比改善的热稳定性、pH稳定性和/或表达。在前述的另一实施方案中，区段I包含SEQ ID N0:2(“1”)、SEQ ID NO:4( “2”)、SEQ ID NO 6( “3”)、SEQID NO 8( “4”)或 SEQ ID NO :10( “5”)的氨基酸残基从大约I或从大约18或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：弗朗西斯·H·阿诺德，皮特·海因策尔曼，
申请(专利权)人：加州理工学院，
类型：
国别省市：