本发明专利技术涉及一种日本血吸虫多态性抗原基因及其用作疫苗的用途。具体地，本发明专利技术公开了日本血吸虫被膜蛋白Sj29的37个等位基因的序列，并提供了Sj29重组蛋白的表达与纯化的方法。本发明专利技术还公开了制作Sj29单价等位基因疫苗以及Sj29多价等位基因疫苗的方法，并证实Sj29诱导的免疫保护具有等位基因特异性，多价等位基因疫苗可以提高疫苗的保护效果。基于本发明专利技术的新发现，可用于研制克服抗原多态性的新型血吸虫病多价疫苗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学和寄生虫领域；更具体地，本专利技术涉及一种日本血吸虫多态性抗原基因及其用作疫苗的用途，并提供一种对于双倍体病原体血吸虫具有更好免疫保护效果的新型疫苗。
技术介绍
血吸虫被膜覆盖于血吸虫虫体表面，是血吸虫体表的重要组成部分，构成“寄生虫-宿主”接触表面。被膜上的蛋白是血吸虫病疫苗的重要候选抗原，例如已经广泛研究的两种血吸虫病疫苗候选分子，血吸虫23kD蛋白(Sj23或Sm23)和血吸虫四跨膜蛋白2(Sm-TSP-2)都定位在血吸虫被膜上。 Sm29是最近鉴定的曼氏血吸虫被膜蛋白。该蛋白含有一个由26个氨基酸组成的信号肽和一个C末端单跨膜结构。在小鼠攻击感染模型中，该蛋白显示出良好的免疫保护效果。用该蛋白免疫小鼠能诱导小鼠产生强烈的Thl免疫应答，减虫率和肠减卵率可分别达到51%和60%，同时还能减少50%的肉芽肿。通过比较日本血吸虫转录组序列数据库，发现在日本血吸虫中也存在与Sm29高度同源的蛋白(定名为Sj29)。Sj29除了序列与Sm29高度同源外，其半胱氨酸数量和位置等与Sm29完全一致。但是S j29免疫小鼠只能诱导23 %的减虫率，远低于Sm29诱导的51%的减虫率。Sj29诱导的免疫保护效率远低于Sm29的原因可能与病原体抗原序列多态性有关。病原体抗原序列多态性是一种有利于病原体逃避宿主的免疫压力的手段，也是“病原体-宿主”长期协同进化的结果。在单倍体病原体引起的疾病中，如流感、艾滋病和疟疾等，抗原多态性对疫苗保护效果的影响已经得到广泛报道，但是目前还没有关于其如何影响双倍体病原体疫苗的报道。目前本领域尚缺乏效果令人满意的血吸虫疫苗，因此迫切需要开发新的提高血吸虫免疫保护效果的疫苗以及相关物质。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种日本血吸虫多态性抗原基因。本专利技术的另一目的在于提供对双倍体病原体血吸虫具有更好免疫保护效果的新型疫苗。本专利技术的另一目的在于提供所述新型疫苗的制法以及用于所述新型疫苗的相关物质(包括免疫原及其编码序列等)。在本专利技术的第一方面，提供了一种编码日本血吸虫Sj29蛋白的多核苷酸，所述多核苷酸的序列选自下组⑴如SEQ ID NO n所示的核酸序列，其中η为选自1-37的正整数；(ii)如SEQ ID NO :m所示的核酸序列，其中m为选自38-40的正整数。在另一优选例中，所述的核酸序列编码日本血吸虫Sj29蛋白。在另一优选例中，所述的多核苷酸具有以下单核苷酸多态性位点SNP 在SEQ ID NO n的DNA序列162位，其中η为选自1-37的正整数，且SNP为C/G/A三态突变。在另一优选例中，所述多核苷酸选自；如SEQ ID NO :η所示的DNA序列，其中η选自正整数2、4、20。在本专利技术的第二方面，提供了一种分离的日本血吸虫Sj29蛋白，所述Sj29蛋白由本专利技术第一方面所述的多核苷酸所编码。在另一优选例中，所述的日本血吸虫Sj29蛋白由如SEQ ID NO :n所示的核酸序列所编码，其中η为选自1-37的正整数。 在本专利技术的第三方面，提供了一种分离的DNA分子，所述的DNA分子编码本专利技术第二方面所述的蛋白。在另一优选例中，所述的DNA分子与SEQ ID NO η所示的任一核酸序列相似性为85%-100%，其中η为选自1-37的正整数。在本专利技术的第四方面，提供了一种载体，所述载体含有本专利技术第三方面所述的DNA分子。在另一优选例中，所述载体为表达载体，包括原核表达载体和真核表达载体。更佳地，所述载体是毕赤酵母表达载体。在本专利技术的第五方面，提供了一种宿主细胞，所述细胞含有本专利技术第四方面所述的载体，或者所述宿主细胞的染色体整合有本专利技术第一方面所述的多核苷酸或本专利技术第三方面所述的DNA分子。在另一优选例中，所述宿主细胞为酵母细胞，更佳地为毕赤酵母表达细胞。在本专利技术的第六方面，提供了一种单核苷酸多态性位点SNP，所述SNP位于SEQIDNO η的DNA序列162位，其中η为选自1_37的正整数，且SNP为C/G/Α三态突变。在本专利技术的第七方面，提供了一种分离的日本血吸虫Sj29的多核苷酸，所述多核苷酸具有以下单核苷酸多态性SNP 在SEQ ID NO n的DNA序列162位，其中η为选自1-37的正整数，且SNP为C/G/A三态突变。在另一优选例中，所述的多核苷酸的长度为20_1000bp，较佳地为25_500bp，更佳地为 30-200bp。在本专利技术的第八方面，提供了一种产生日本血吸虫Sj29蛋白的表达方法，所述方法包括步骤在适合表达所述蛋白的条件下，培养本专利技术第五方面所述的宿主细胞，从而表达出所述蛋白；和分离所述蛋白。在本专利技术的第九方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有(a)药学上可接受的载体以及(b)本专利技术第二方面所述的蛋白或本专利技术第一方面所述的多核苷酸。在另一优选例中，所述的组合物是疫苗组合物。在另一优选例中，所述的组合物是多价疫苗组合物，其中该疫苗组组合物含有针对不同Sj29基因簇的Sj29蛋白。在另一优选例中，所述的多价疫苗组合物含有2-37种本专利技术第二方面所述的Sj29蛋白。在本专利技术的第十方面，提供了一种对日本血吸虫Sj29等位基因进行分类的方法，所述方法包括步骤(I)提取日本血吸虫核酸；和(2)测定所述日本血吸虫核酸在对应于SEQ ID NO : I的DNA序列第162位的核苷酸种类，并根据该核苷酸种类对日本血吸虫Sj29等位基因进行分类。在另一优选例中，步骤(2)中还包括根据日本血吸虫等位基因的该核苷酸种类确定162位的纯合或杂合情况。在另一优选例中，在步骤(2)中如下确定162位的纯合或杂合类型·C162C :纯合子AA型；G162G :纯合子BB型；A162A :纯合子CC型；C162G :杂合子AB型；C162A :杂合子AC型；G162A :杂合子BC型。在本专利技术的第十一方面，提供了一种对日本血吸虫进行分类的方法，所述方法包括步骤(I)提取日本血吸虫核酸；和(2)测定所述日本血吸虫核酸在对应于SEQ ID NO : I的DNA序列第162位的核苷酸种类，并确定162位的纯合或杂合情况；(3)根据162位的纯合或杂合情况，对日本血吸虫进行分类。在另一优选例中，在步骤(2)中，根据纯合或杂合类型，如下确定162位的纯合或杂合类型C162C :纯合子AA型；G162G :纯合子BB型；A162A :纯合子CC型；C162G :杂合子AB型；C162A :杂合子AC型；G162A :杂合子BC型。在另一优选例中，如下对日本血吸虫进行分类C突变对应Sj29基因簇ClusterA，G突变对应Sj29基因簇Cluster B, A突变对应Sj29基因簇Cluster C。在另一优选例中，如下对日本血吸虫进行分类。纯合子AA型则该日本血吸虫的一对等位基因均属于Sj29基因簇A ；纯合子BB型则该日本血吸虫的一对等位基因均属于Sj29基因簇B ；纯合子CC型则该日本血吸虫的一对等位基因均属于Sj29基因簇C ；杂合子AB型则该日本血吸虫的一个等位基因属于Sj29基因簇A，一个等位基因属于Sj29基因族B ；杂合子AC型则该日本血吸虫的一个等位基因属于Sj29基因簇A，一个等位基因属于Sj29基因族C ；杂合子BC型则该日本血吸虫的一个本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种编码日本血吸虫Sj29蛋白的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列选自下组：(i)如SEQ？ID？NO：n所示的核酸序列，其中n为选自1？37的正整数；(ii)如SEQ？ID？NO：m所示的核酸序列，其中m为选自38？40的正整数。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：潘卫庆，徐新东，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。