本发明专利技术公开了防治香蕉冠腐病的芽孢杆菌及其应用，该芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌B28,?于2011年2月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC?No.4623。该枯草芽孢杆菌B28制备的生防菌剂用于防治香蕉冠腐病，该生防菌剂中枯草芽孢杆菌B28含量为109-1011cfu/ml。本发明专利技术通过对峙培养、复筛、杀菌活性物质分析、紫外线照射、剂型研制、防腐试验、定植试验、存活试验、防腐安全性评价等步骤筛选出专门杀死引起香蕉果实腐烂的真菌的芽孢杆菌B28（Bacillus?subtilis），该菌适应性强，耐干旱，耐高温和低温，能分泌强烈杀真菌多肽物质，能与其它杀真菌的化学杀菌剂和生理保鲜剂混用，能在香蕉果实上定植下来并持续分泌杀菌物质，能在香蕉果实采后防腐中广泛应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物领域，涉及一种防治香蕉冠腐病的生防菌株B28及其应用。
技术介绍
由香蕉炭疽菌(Colletotrichummusae)、可可球二抱菌(Botryodiplodiatheobromae)、奇异长 _ 壳菌(Ceratocystis paradoxa)、串珠键刀菌(Fusariummoniliforme)、半裸镰刀菌(Fusarium semitectum)等真菌感染引起的香蕉冠腐病能导致15—30%的香蕉果实腐烂，由此每年造成的损失近4. 2—8. 4亿元。为了减少香蕉的腐烂，延长货架期，香蕉采收后都要用杀菌剂处理，杀死或抑制果实上的真菌，减少由真菌引起的果 实腐烂。目前，香蕉果实的防腐主要靠化学防腐剂，常用的化学防腐剂有三唑类杀菌剂(敌力脱、晴氨唑、氟硅唑)，咪唑类(施保克、施保功)，特克多，扑海因，咪鲜安，苯来特，多菌灵，甲基托布津等。化学防腐剂处理香蕉果实，有一部分会残留在果实上，人食用后会进入人体，引起急性或慢性中毒；同时，化学防腐剂还会进入水体、土壤、空气等地方造成环境污染；更为重要的是，化学防腐剂的大量使用，使病菌产生抗药性，使很多防腐剂失去了作用。生物防腐剂是由对人畜和环境安全的活的微生物菌体及其分泌的抗真菌物质组成，施用在香蕉果实上，对人无毒无害，人食用后很安全；对环境安全，进入自然环境后不污染环境。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种安全、高效的防治香蕉冠腐病的芽孢杆菌，该芽孢杆菌，容易在香蕉上定植和成活，不易死亡，药效期长；长期和大量使用病菌不易产生抗药性。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为提供一种防治香蕉冠腐病的芽孢杆菌，其中，该芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌B28，于2011年2月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No. 4623。该枯草芽孢杆菌B28培养基为牛肉膏I 3g、蛋白胨8 10g、酵母膏O. 8 lg、NaCl I 3g、蒸馏水1000毫升，初始pH值7. 2 7. 4, 30°C, 160转每分钟振荡培养48小时，培养后离心的温度O 4°C，离心转速为4000 6000rpm，离心时间为15 40min。本专利技术还提供一种枯草芽孢杆菌B28的应用，该枯草芽孢杆菌B28制备的生防菌剂用于防治香蕉冠腐病，该生防菌剂中枯草芽孢杆菌B28含量为109-10ncfU/ml。生防菌剂是将枯草芽孢杆菌B28培养后离心浓缩，低温干燥后加蒸馏水制得，最终活性菌的浓度为109-10ncfu/ml。该枯草芽孢杆菌B28为菌体杆状，周生鞭毛，芽孢位于菌体中间，芽孢椭圆形，孢囊不膨大，菌体大小O. 4-0. 6μ mX I. 2-2. 3 μ m ;革兰氏染色阳性，在NYDA培养基上24h内形成圆形、光滑、平坦、乳白色、中间细颗粒状菌落；菌氧化葡萄糖产酸，过氧化氢酶、V. P.反应、硝酸盐还原阳性，能液化明胶，能利用柠檬酸盐，能利用L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露醇，能在含10%NaCI的培养基中生长，生长温度10-50度。具体实施例方式本专利技术所提供的香蕉冠腐病生防菌剂其活性成分为枯草芽孢杆菌B28 (Bacillussubtilis)活菌。生防菌剂中枯草芽孢杆菌B28 (Bacillus subtilis)含量为109-10ncfu/ml，优选为 1010cfu/ml ο生防菌剂是将枯草芽孢杆菌B28 (Bacillus subtilis)培养后离心浓缩，低温干燥后加蒸馏水制得，最终活性菌的浓度为109-10ncfu/ml。这里B28 (Bacillus subtilis)培养基优选为牛肉膏l_3g、蛋白胨8_10g、酵母膏O. 8-lg、NaCl I 3g、蒸馏水1000毫升，初始pH值7. 2-7. 4，30°C，160转每分钟振荡培养48小时。培养后离心的温度O 4°C，离心转速为4000 6000rpm，离心时间为15 40mino 本生防菌剂存放期7个月，枯草芽孢杆菌B28 (Bacillus subtilis)芽孢存活率为 92. 84%ο使用方法用冷水稀释10倍，浸泡香蕉。浸泡采后的香蕉果实，对香蕉冠腐病的防效可达67. 5%。采用对峙培养，在PDA平板上，中间接O. 5cm大小的香蕉冠腐病菌半裸镰刀菌菌块，在其四周同时点接枯草芽孢杆菌B28，30度下恒温培养时，枯草芽孢杆菌B28对香蕉冠腐病菌半裸镰刀菌(Fusarium semitectum)的抑菌作用明显，抑菌带宽O. 75cm,病菌被限制在Icm的范围内不能再扩张，而点蒸馏水的空白平板上香蕉冠腐病菌半裸镰刀菌已长满整个平板；由B28制成的水剂，稀释10倍后，浸泡香蕉10分钟，香蕉常温(30°C)下放置10天，香蕉果柄未腐烂，香蕉果实完好，对香蕉冠腐病的防效达67. 5%，而未经B28处理的香蕉100%发病，从果柄开始，整个果实腐烂。本专利技术通过对峙培养、复筛、杀菌活性物质分析、紫外线照射、剂型研制、防腐试验、定植试验、存活试验、防腐安全性评价等步骤筛选出专门杀死引起香蕉果实腐烂的真菌的芽孢杆菌B28 (Bacillus subtilis)，该菌适应性强，耐干旱，耐高温和低温，能分泌强烈杀真菌多肽物质，能与其它杀真菌的化学杀菌剂和生理保鲜剂混用，能在香蕉果实上定植下来并持续分泌杀菌物质，能在香蕉果实采后防腐中广泛应用。优越件本专利技术提供的牛防菌剂比目前常用、而目.认为是较好的化学农药施保功的防效高，对香蕉冠腐病的防治效果达67. 5%，而施保功的防效只有53% ;采用本防治方法处理的香蕉不仅烂果率低，而且吃起来口感更好，没有异味，而化学防腐剂处理的香蕉，口感较差；本生物防腐剂中所有成分(主要成分和辅助成分)均是自然物质，对人和环境非常安全。平板对峙培养实验结果对3种香蕉冠腐病菌的抑菌带宽度见表权利要求1.一种防治香蕉冠腐病的芽孢杆菌，其特征在于该芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌B28，于2011年2月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为 CGMCC No. 4623。2.如权利要求I所述的防治香蕉冠腐病的芽孢杆菌，其特征在于该枯草芽孢杆菌B28培养基为牛肉膏I 3g、蛋白胨8 10g、酵母膏O. 8 lg、NaCl I 3g、蒸懼水1000毫升，初始pH值7. 2 7. 4，300C，160转每分钟振荡培养48小吋，培养后离心的温度O 4°C，离心转速为4000 6000rpm,离心时间为15 40min。3.如权利要求I所述的防治香蕉冠腐病的芽孢杆菌，其特征在于该枯草芽孢杆菌B28制备的生防菌剂用于防治香蕉冠腐病，该生防菌剂中枯草芽孢杆菌B28含量为109-10ncfu/ml。4.如权利要求3所述的防治香蕉冠腐病的芽孢杆菌，其特征在干该生防菌剂是将枯草芽孢杆菌B28培养后离心浓缩，低温干燥后加蒸馏水制得，最終活性菌的浓度为109-10ncfu/ml。全文摘要本专利技术公开了防治香蕉冠腐病的芽孢杆菌及其应用，该芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌B28, 于2011年2月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.4623。该枯草芽孢杆菌B28制备的生防菌剂用于防治香蕉冠腐病，该生防菌剂中枯草芽孢杆菌B28含本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种防治香蕉冠腐病的芽孢杆菌，其特征在于：该芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌B28,？于2011年2月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC？No.4623。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张荣意，谭志琼，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：
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