本领域已有检测简单肽的方法。然而，检测定向序列聚合物(DSP)有效血浆浓度的方法是复杂的，因为与具有明确氨基酸序列的各别肽相反，DSP是肽的复杂混合物。本申请提供检测和评估DSP组合物的改进方法，检测和定量测定DSP组合物的方法，根据肽亚组与某些捕获多肽的相互作用确定和富集DSP组合物中肽亚组的方法，和对需要的对象给予DSP组合物的方法，其中，剂量方案和用量可根据上述检测和定量方法加以确定和评估。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过对定向序列聚合物的组合物进行基于血清蛋白的检测，改进含定向序列聚合物的组合物的设计、生物利用度和效能的方法 相关申请本申请要求2009年11月17日递交的美国临时申请No. 61/281，470和2010年9月27日递交的美国临时申请No. 61/386,909的优先权益。
技术介绍
复杂的肽混合物是肽治疗剂的一个新兴的类型，其中考帕松(醋酸格拉默)是一个领先的例子。复杂的肽混合物包括有一个或几个共享特征(如氨基酸组成和/或序列 相似)的多样性肽，并包括改变了的肽配体(APL)、肽库、肽文库、含随机序列聚合物(RSP)的组合物(如醋酸格拉默，及W003/029276、WO 05/112972和WO 05/085323中公开的组合物)及含定向序列多肽(DSP)的组合物(见例如WO 2007/120834、WO 2009/051797和WO2009/128948)。DSP和RSP组合物在如下方面是相似的二者都包含大量不同的肽，它们的序列在某些确定的公共参数上是随机变化的。在RSP组合物中，序列的相似性起源于肽的氨基酸含量有限，因为所有肽由相同的为数不多的氨基酸以随机顺序排列而组成。在DSP组合物中，序列的相似性则起源于共享的基础肽序列，其中某些氨基酸位置被有限的氨基酸标记以有限的频率随机地取代。现有技术中已有检测简单多肽的方法，但是只有较少方法适合于检测和测定复杂的肽混合物。检测定向序列聚合物(DSP)有效血浆浓度的方法是复杂的，因为与具有明确氨基酸序列的各别肽相比，DSP是肽的复杂混合物。需要对多种制造方法制备的DSP组合物的均一性和组成进行评估的改进方法。确定DSP组合物在体内的状态具有重要的免疫学意义，因为取决于给药途径和/或给药频率及血清蛋白与DSP的结合，这种肽混合物可能激发初级炎症反应(THl型)或初级调控反应(TH2型)，导致其在受试对象中的药代动力学和药效学改变。更加严谨的设计和坚持给予DSP组合物可能提高治疗效果或者减少潜在的不良炎症应答反应。因此，为了治疗目的，需要定量分析DSP组合物的方法，例如促进这种肽混合物在体内状况的评估和确定合适的剂量及给药方式。 专利技术概述本申请提供检测和评价DSP组合物的改进的方法。本专利技术提供检测和定量分析DSP组合物的方法。本专利技术提供基于肽亚组与特定捕获多肽相互作用的测定，和富集DSP组合物中多肽亚组亚组的方法。本专利技术进一步提供对需要接受治疗的患者给予DSP组合物的方法，其中可根据上述检测和定量方法来确定或评估给药方案和剂量。本申请还提供检测DSP组合物的方法，包括以下步骤(a)将所述DSP组合物附着于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物与含蛋白质生物液体接触；(c)鉴定特异性结合于(a)所述固相支持物的(b)所述的蛋白质；(d)获得基本纯的(C)所述结合蛋白产物；(e)将(c)所述蛋白质附着于定量检测所述DSP组合物用的工具上；和(f)测定所述DSP组合物与(e)所述蛋白每一种的结合。本说明书也提供一种改进DSP组合物设计的方法，包括以下步骤(a)将所述DSP组合物附着于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物与含蛋白的生物液体接触；(c)鉴定特异性结合于(a)所述固相支持物的(b)所述的蛋白质；(d)获得基本纯的(C)所述的结合蛋白产物；(e)使(C)所述蛋白质附着于定量检测DSP组合物用的工具上；(f)测定所述DSP组合物与(e)所述蛋白质结合的每一种肽；(g)调整所述DSP组合物的设计以增加或减少与(e)所述一种或多种蛋白质的结合；(h)重复步骤(f) ；(i)任选地重复步骤(f_h)，其中调整所述DSP组合物的设计可导致一种或多种效果提高生物利用度、减少毒性和提高效能。此外，本申请提供一种检测DSP组合物中肽种类的方法，包括以下步骤(a)将所述DSP组合物附着于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物与含蛋白的生物液体接触；(C)鉴定特异性结合于(a)所述固相支持物的(b)所述的蛋白质；(d)获得基本纯的(C)所 述结合蛋白制品；(e)使(C)所述蛋白质附着于固相支持物上；(f)使(e)所述固相支持物与所述DSP组合物接触；(g)测定所述DSP组合物中每种肽与(f)所述固相支持物的结合。另外，本申请提供一种改进DSP组合物中肽种类设计的方法，包括以下步骤(a)使所述DSP组合物附着于固相支持物上；(b)使(a)所述固相支持物与含蛋白的生物液体接触；(C)鉴定特异性结合于(a)所述固相支持物的(b)所述蛋白质；(d)获得基本纯的(C)所述结合蛋白制品；(e)使(C)所述蛋白质附着于固相支持物上；(f)使(e)所述固相支持物与所述DSP组合物接触；(g)测定所述DSP组合物中与(f)所述固相支持物结合的每一种肽；(h)调整所述DSP组合物的设计以增加或减少与(f)所述一种或多种蛋白质的结合；(i)重复步骤(g) ；(j)任选地重复步骤(g_j)，其中调整所述DSP组合物肽种类的设计可导致一种或多种效果提高生物利用度、减少毒性，和提高效能。通过应用本申请所述方法，研究者不仅可以更可靠地检测DSP组合物中的低含量组分，而且可以特异性地检测DSP组合物中与生物活性如毒性或效力有关或对其有贡献的肽种类。本专利技术的基础是，发现YEAK或YFAK组合物中的一种肽或多种肽可与某些具有蛋白质性质的物质特异性结合。相反，具有蛋白质性质的物质在本说明书称为“捕获多肽”，这种物质较佳地也结合DSP组合物。相反，一旦“捕获多肽”被鉴定，便可利用一种或多种这类捕获多肽定量分析DSP组合物中所含的肽，并分离DSP组合物中功能更优良的肽亚组，或者根据结合特异性给DSP组合物中的各组分分类。为了实施本专利技术，鉴定到能与(DSP组合物所含)肽结合的捕获多肽后，即可将其制备成可用于实施本专利技术的形式，即对其进行分离和纯化，纯度达到足以结合(DSP组合物所含)肽而不受到存在的其他组分干扰。本专利技术的一个方面提供了一种评价或测定DSP组合物不同制造的制剂、用不同方法制造的、或不同的制造后加工的产品的差异的方法。本专利技术的具体方法是，比较不同的DSP组合物制品与捕获多肽的结合来确定各制品之间的相似性和/或差异。本专利技术的另一方面提供一种定量分析DSP组合物或含DSP组合物的样品中所含肽的方法。本专利技术的一些实施方式是检测给予DSP组合物后其在体内的生物可利用含量或浓度(如血浆浓度)的方法。本专利技术的方法是检测受试对象组织中存在的DSP组合物，所述受试对象先前曾接触过DSP组合物或用其治疗过，在这种接触后立即、或在接触后至少大约10、20、30、或45分钟，或者 1、2、4、6、12、24、36 或 48 小时，或 3、4、5、6、7 或 10 天，或 2、3、4、6、8 或 12 周进行一次或多次所述方法的检测。本专利技术的一种具体方法是检测哺乳动物血清或血浆中存在的DSP组合物的各组分，所述哺乳动物在进行所述方法前曾在上述期间内用所述DSP组合物治疗过。在某些具体实施方案中，所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，本专利技术方法包括通过使DSP与一种或多种预先确定的捕获多肽结合然后用例如免疫检测方法检测DSP组合物的存在，和任选地检测其含量。因此。本专利技术的一个方面包括选择或鉴定能与DSP本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：E·扎内利，J·克里格，J·康诺利，K·H·柯林斯，
申请(专利权)人：阿雷斯贸易股份有限公司，
类型：
国别省市：
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