一种添加扩增内标的食品中猪肉或鸡肉成分Taqman探针荧光定量PCR快速检测方法技术

技术编号:8188205 阅读:291 留言:0更新日期:2013-01-09 23:53
本发明专利技术公开了一种添加扩增内标的食品中猪肉或鸡肉成分Taqman探针荧光定量PCR快速检测方法。具体方法为:分别基于动物细胞核基因设计引物和探针;人工合成一段竞争型扩增内标及相应的探针,建立内标荧光定量PCR体系,应用ABI?7500?Software?SDS?1.4对实验结果进行分析处理,以Ct值小于36的扩增作为检测的阳性结果。本发明专利技术检测方法具有良好的针对目标物种的特异性的同时通过实时监控PCR反应以避免假阴性检测结果的产生,为食品中动物源性成分鉴定探索了新的途径,具有准确稳定、操作方便等有益效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品安全检测领域,涉及的是食品中动物源性成分的快速检测,具体涉及一种添加扩增内标的食品中猪肉、鸡肉成分Taqman探针荧光定量PCR快速检测方法。
技术介绍
肉制品掺假是公众关注的焦点问题之一。目前,肉类掺假主要表现在不法企业使用相对廉价的猪肉、鸡肉等肉类,通过多种形式的深加工,冒充牛肉制品进行销售,以谋取不当利益。掺假行为不仅侵犯了消费者的合法权益,而且极大打击了公众对于我国食品质量安全状况的信心。因此,对于掺假牛肉制品中较常出现的猪肉和鸡肉,建立科学、准确快速的检测方法已十分必要。以聚合酶链反应(PCR)为基础的技术已逐步成为了食品中肉类种属鉴定的核心方 法。许多学者根据不同物种基因序列的差异位点设计特异性引物,利用PCR反应实现食品中特征基因片段的指数级扩增,继而通过电泳检测鉴别食品中可能的物种来源。近年来,实时荧光PCR技术的飞速发展大大提高了食品中物种鉴别的效率和灵敏度,并使得肉类含量的定量溯源成为可能。在目标基因选择方面,动物细胞核基因组DNA序列具有高度的物种特异性,能够保证检测过程中不会出现物种间非特异性扩增而导致的交叉干扰;此外,目前对食品中动物源性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种添加扩增内标的食品中猪肉或鸡肉成分Taqman探针荧光定量PCR快速检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)应用根据猪的beta?actin基因或鸡的transforming?growth?factor基因设计扩增引物和Taqman探针,分别使用荧光基团FAM、HEX作为探针的发光基团;(2)设计构建含有阳性扩增内标DNA的重组质粒并设计相应探针;(3)以含有待检DNA模板,含有阳性扩增内标DNA的重组质粒,阳性扩增内标DNA的Taqman探针,以及设计合成的猪beta?actin基因扩增引物和Taqman探针,或鸡transforming?growth?factor基因扩增引物和Taq...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:黄明何玮玲杨静徐幸莲周光宏
申请(专利权)人:南京农业大学
类型:发明
国别省市:

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