狗肿瘤坏死因子14基因和蛋白质制备及应用制造技术

狗肿瘤坏死因子14（TNFSF14/LIGHT）基因和蛋白质制备及应用,涉及生物基因工程领域。狗肿瘤坏死因子14具有SEQIDNO.1所示的序列。其克隆方法如下：TRIzol法提取狗脾脏总RNA并进行逆转录；根据狗基因组序列设计嵌套引物进行两次PCR扩增，获得723bp的扩增片段，经测序为狗肿瘤坏死因子LIGHT的全长序列。将胞外可溶段连接到pET43.1a原核质粒中并转到大肠杆菌BL21(DE3)中表达，Ni+-NTA柱纯化后得到的重组蛋白His6-dsLIGHT。所述的狗肿瘤坏死因子14（LIGHT）的cDNA可通过现有基因工程的方法，生产重组dLIGHT，用于进一步的研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物基因工程领域，具体涉及肿瘤坏死因子14 (TNFSF14或LIGHT)cDNA的克隆、表达及蛋白纯化技术。
技术介绍
鉴于肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)成员具有促进细胞生长、分化或死亡的功能，在淋巴器官的形成，免疫细胞的激活及维持机体的稳态等方面都发挥重要的生物学作用，所以近年来，越来越多的TNFSF家族成员被发现。LIGHT是1997年发现的肿瘤坏死因子超家族第14号成员，又名TNFSF-14或HVEM-L，240aa的分子量约为29kD的II型跨膜蛋白，拥有典型的TNF同源结构域。它的受体主要有三个TR2 / HVEM、LTBR、及TR6，通过不同的受体来介导不同的生物学效应，参与免疫系统的发育、通过CD28非依赖的途径刺激T细胞的活化并促进其生长分化和细胞因子的分泌以及肿瘤细胞的凋亡诱导过程，在肿瘤免疫、 自身免疫病、移植物抗宿主病(GVHD)和抗病毒感染中都发挥重要的作用。另外，LIGHT还具有活化和诱导DC细胞成熟的功能。LIGHT作为在人体免疫系统中起重要调控作用的一种特异的细胞因子，其与受体的相互作用涉及很多疾病，如类风湿性关节炎、炎症性肠炎、胰岛本文档来自技高网...

【技术保护点】
狗肿瘤坏死因子14cDNA，其特征在于它的序列如SEQ？ID？NO.1所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张双全，刘霞，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：