本发明专利技术涉及作为免疫刺激剂的寡核苷酸在免疫治疗应用中的治疗用途。更特别的，本发明专利技术提供一种免疫刺激性寡核苷酸，所述寡核苷酸在用于产生免疫应答或者用于治疗需要免疫刺激的患者的方法中使用。本发明专利技术的免疫刺激性寡核苷酸优选的包括新嘌呤。本发明专利技术的免疫刺激性寡核苷酸还包括至少两个寡核苷酸，所述至少两个寡核苷酸在其3'端、核苷间联结或者官能化的核碱基或者糖处与非核苷酸接头连接，其中至少一个寡核苷酸是免疫刺激性寡核苷酸并具有易接近的5'端。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及利用寡核苷酸作为免疫刺激剂的免疫学和免疫治疗应用。相关领域的概述在现代分子生物学中寡核苷酸已经成为不可或缺的工具，应用于各种技术，包括 从诊断探针方法到PCR到基因表达的反义抑制和免疫治疗应用。寡核苷酸的这种广泛使用导致对快速、廉价和高效合成寡核苷酸方法的需求不断増加。用于反义和诊断应用的寡核苷酸的合成现在可以常规地实现。參见，例如，Methods in Molecular Biology, Vo丄 20:Protocols for Oligonucleotides andAnalogs pp. 165-189 (S.Agrawal, ed. , Humana Press, 1993) ;01igonucleotides andAnalogues, A Practical Approach, pp. 87-108(F. Eckstein, ed. , 1991);和 Uhlmann andPeyman, supra;Agrawal and Iyer, Curr. Op. in Biotech.6:12(1995);和 AntisenseResearch and Applications(Crooke and Lebleu, eds. , CRC Press, Boca Raton, 1993)。早期的合成方法包括磷酸ニ酯和磷酸三酯化学法。例如，Khorana等人，J. Molec.Biol. 72:209 (1972)公开了用于寡核苷酸合成的磷酸ニ酯化学法。Reese, TetrahedronLett. 34:3143-3179(1978),公开了用于寡核苷酸和多核苷酸合成的磷酸三酯化学法。这些早期方法大部分已经被更有效的亚磷酰胺和H-膦酸酯(H-phosphonate)合成途径所取代。例如，Beaucage 和 Caruthers, Tetrahedron Lett. 22:1859-1862 (1981)，公开了脱氧核糖核苷亚磷酰胺在多核苷酸合成中的用途。Agrawal和Zamecnik,美国专利5，149，798 (1992)，公开了通过H-膦酸酯化合物方法的寡核苷酸优化合成。这两种现代方法已经用于合成具有各种修饰的核苷酸间联结的寡核苷酸。Agrawal和Goodchild, Tetrahedron Lett. 28:3539-3542 (1987),教导了利用亚憐酸胺化学法的寡核苷酸甲基膦酸酯合成。Connolly等人，Biochem. 23:3443(1984)，公开了利用亚磷酰胺化学法的寡核苷酸硫代磷酸酯合成。Jager等人，Biochem. 27:7237 (1988)，公开了利用亚磷酰胺化学法的寡核苷酸氨基磷酸酯合成。Agrawal等人，Proc. Natl. Acad. Sci.(USA) 85:7079-7083 (1988)，公开了利用H-膦酸酯化合物化学法的寡核苷酸氨基磷酸酯和硫代磷酸酯的合成。最近，若干研究人员已经证明寡核苷酸在免疫治疗应用中用作免疫刺激剂的有效性。磷酸ニ酯和硫代磷酸酯寡核苷酸能够诱导免疫刺激的观察结果引起了人们将这种副作用发展成为治疗手段的兴趣。这些努力聚焦于包含二核苷酸——天然CpG的硫代磷酸酯寡核苷酸。Kuramoto 等人，Jpn. J. Cancer Res. 83:1128-1131 (1992)教导了包含含有CpG 二核苷酸的回文结构的磷酸二酯寡核苷酸能够诱导干扰素-alpha和ga_a的合成并增强天然杀伤活性。Krieg等人，Nature 371:546-549(1995)公开了包含硫代磷酸酯CpG的寡核苷酸具有免疫刺激活性。Liang等人，J. Clin. Invest. 98:1119-1129 (1996)公开了这类寡核苷酸活化人B细胞。Moldoveanu等人，Vaccine 16:1216-124 (1998)教导了包含CpG的硫代磷酸酯寡核苷酸增强抗流感病毒的免疫应答。McCluskie和Davis，J.Immunol. 161:4463-4466(1998)教导了包含CpG的寡核苷酸作为强力的佐剂，增强抗乙型肝炎表面抗原的免疫应答。Hartman等人，J. Immunol 164:1617-1624(2000)教导了免疫刺激序列是种属特异的，在小鼠和灵长类动物之间是不同的。对含CpG的硫代磷酸酯寡核苷酸的其他修饰还可能影响它们作为免疫应答调节剂的能力。参见，例如，Zhao 等人，Biochem. Pharmacol. (1996) 51:173-182; Zhao 等人，Biochem Pharmacol. (1996) 52:1537-1544; Zhao 等人，Antisense Nucleic Acid DrugDev. (1997)7:495-502;Zhao 等人,Bioorg. Med. Chem. Lett. (1999) 9:3453-3458;Zhao 等人，Bioorg. Med. Chem. Lett. (2000) 10:1051-1054; Yu 等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.(2000) 10:2585-2588;Yu 等人，Bioorg. Med. Chem.Lett. (2001) 11:2263-2267;和 Kandimalla 等人,Bioorg. Med. Chem. (2001) 9:807-813。这些报道清楚表明仍然存在一种需要，以便能够调节免疫刺激性寡核苷酸造成的免疫应答并克服免疫刺激性序列的种属特异性。专利技术简述本专利技术提供用于调节寡核苷酸化合物造成的免疫应答的方法。本专利技术的方法能够用来改变免疫刺激性寡核苷酸产生的细胞因子分布谱(profile)，用于免疫治疗应用。本专利技术人出人意料地发现免疫刺激二核苷酸的修饰使产生的免疫应答性质可以具有灵活性，而且某些修饰克服了迄今为止观察到的免疫刺激序列的种属特异性。在第一个方面中，本专利技术提供具有来自下列组的结构的免疫刺激性寡核苷酸5’ -Tcg1Aacg1Ttcg1-X-G1Cttg1Caag1Ct-S ’ ；5，-TCAGTCG2TTAG-X-GATTG2CTGACT-5’ ;5，-TCG2TCG2TTAGA-X-AGATTG2CTG2CT-5’ ;5，-CAGTCG2TTCAG-X-GACTTG2CTGAC-5，;5，-TCAGTCGiTTAG-X-GATTGfTGACT-5’ ;5，-TCGJCGJTAGA-X-AGATTGfTGfT-5，和5，-CAGTCGJTCAG-X-GACTTGiCTGAC-5J ;其中Gi=〗’-脱氧-7-脱氮鸟苷；G2=阿糖鸟苷(arabinoguanosine);和X=甘油接头。在第二个方面中，本专利技术提供药物组合物。这些组合物包括本专利技术第一个方面公开的任意一种组合物和药学上可接受的载体。在第三个方面中，本专利技术提供一种在脊椎动物中产生免疫应答的方法，该方法包括对脊椎动物施用具有来自下列组的结构的免疫刺激性寡核苷酸5’ -Tcg1Aacg1Ttcg1-X-G1Cttg1Caag1Ct-S ’ ；5，-TCAGTCG2TTAG-X-GATTG2CTGACT-本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种免疫刺激性寡核苷酸，由下述结构组成：5’？CAGTC？Gx？TTCAG？3’？X？3’？GACTT？Gx？CTGAC？5’其中Gx是2’？脱氧？7？脱氮鸟苷或阿糖鸟苷，且X为甘油接头。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：萨德希尔阿格雷沃尔，郁东，埃坎巴R坎迪马拉，
申请(专利权)人：艾德拉药物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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