用于果汁中耐热菌双抗体夹心ELISA检测试剂盒的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种用于果汁中耐热菌双抗体夹心ELISA检测试剂盒的制备方法及应用，其是预先将兔源多克隆抗体包被在酶标板上再加入封闭液封闭后用铝箔袋真空包装，制备成一个标准试剂盒，能够实现ELISA快速检测方法的标准化，检测时将该试剂盒中加入样品中捕集的耐热菌抗原，再加入耐热菌鼠源多克隆抗体，形成抗体-抗原-抗体的双抗体复合物，与酶标抗体、底物工作液，使双抗体复合物上的酶催化底物，再通过酶标仪测定其分光光度值与阴性对照样品的cut?off值比较，从而判定其为阴性或阳性，进而实现一种耐热菌双抗体夹心ELISA检测方法，检测时间短，检测结果稳定，大大提高了检测效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品微生物检测领域，具体涉及到果汁中耐热菌双抗体夹心ELISA快速检测所用的试剂盒的制备方法或应用。
技术介绍
耐热菌(Alicyclobacillus acidoterrestris)在高温或不利环境中可以形成芽孢，具有很强的耐热性，能够耐受果汁加工中的巴氏杀菌过程以芽孢的形式存在于果汁中，是引起浓缩苹果汁变质的主要微生物之一，耐热菌超标也是苹果汁生产企业最急需解决的问题。·目前，生产企业多采用传统平板培养计数法检测耐热菌，平板培养计数法主要包括美国KFL方法(美国库克实验室法)和澳大利亚Berri公司方法。KFL方法主要是采用滤膜过滤，将耐热菌截留在滤膜上，再将滤膜置于培养基上培养计数，此法检测周期一般为4 5天，在实际生产中无法满足耐热菌的实时检测。也有用PCR法，即聚合酶链式反应法检测耐热菌，其具有快速、特异的优点，但该方法对设备、实验室条件及环境要求高，实验操作步骤较繁锁，且假阳性较难控制，限制了 PCR检测法的推广应用。为此专利技术人所在的课题组曾提出了耐热菌的ELISA快速检测方法，已申请了中国专利，专利申请号分别为200910022897. 7和201本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于果汁中耐热菌双抗体夹心ELISA检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）耐热菌兔源多克隆抗体包被酶标板用浓度为0.05mol／L、pH值为9.6的碳酸缓冲液将耐热菌兔源多克隆抗体溶液稀释至浓度为4.8～5.2μg／mL，加入酶标板孔内，每孔加100μL，置于恒温培养箱37℃孵育1.9～2.1小时，将吐温？20与浓度为0.01mol／L、pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液按照体积比为1：1900～2200混合配制成洗液，用洗液冲洗酶标板2～3分钟，重复冲洗3～5次，拍干酶标板；（2）封闭酶标板向步骤（1）拍干的酶标板的每个孔内加入100μL的封闭液，置于恒温箱中37℃保温封闭90...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李建科，夏凯，黄瑞蕊，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：