膜蛋白分析鉴定用样品的处理方法技术

技术编号:8160567 阅读:214 留言:0更新日期:2013-01-07 19:01
本发明专利技术涉及膜蛋白质组学研究领域,具体涉及一种膜蛋白分析鉴定用样品的处理方法。本发明专利技术提供的膜蛋白分析鉴定用样品的处理方法,用SL为去垢剂,用于膜蛋白的分析鉴定。由于SL分子既具有与SDS分子相似的线性疏水性碳氢链尾部,又具有与SDC分子相似的羧基头部,经实验表明,与ALS和SDC相比,SL在膜蛋白尤其是具有高疏水性和/或多跨膜区的整合膜蛋白的鉴定中具有明显的优势。本发明专利技术的方法步骤简单、分析鉴定效果更好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及膜蛋白质组学研究領域,具体涉及ー种。
技术介绍
膜蛋白质组学研究中,大多数膜蛋白尤其是整合膜蛋白由于疏水性强,妨碍了它们的有效提取、溶解和酶解,从而影响了它们的分析鉴定。为了增加膜蛋白的溶解性,对膜蛋白分析鉴定用样品的处理通常采用往缓冲液中添加促溶剂(如去垢剂、有机溶剂和变性剂等)的方法。与其他种类的促溶剂相比,去垢剂由于促溶能力较强而应用较多。用去垢剂提取膜蛋白时,去垢剂的使用浓度一般为1_2%。其中,十二烷基硫酸钠(SDS)能有效裂解生物膜、提取膜蛋白,被认为是目前已知的提取膜蛋白能力最強的去垢剂。采用SDS处理膜蛋白分析鉴定用样品时,一般是将已经过富集纯化的膜片溶于含2%左右SDS的水溶液,离 心后取上清液作为样品,再将样品中SDS的浓度稀释至不高于0. 1%后进行液相酶解,酶解肽段用于液相色谱-质谱联用分析;或将含SDS的样品包埋入凝胶,然后反复洗涤胶块以去除其中的SDS,使SDS浓度降低至不高于0. 1%,然后进行胶内酶解,酶解肽段采用液相色谱-质谱联用分析;或用离子交換的方法使SDS浓度降低至不高于0. 1%,再进行酶解及液相色谱-质谱联用分析。此方法可用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种膜蛋白分析鉴定用样品的处理方法,依次包含以下步骤:(1)用质量百分含量为1.0%的月桂酸钠溶液裂解经富集纯化的生物膜,提取膜蛋白,离心取上清液,得到蛋白质样品;(2)将步骤(1)得到的蛋白质样品用缓冲液稀释至月桂酸钠的质量百分含量为0.1%后,经酶解、酸化,萃取去除酸化后析出的月桂酸,再经冷冻真空干燥,得分析用样品,分析用样品用于液相色谱?串联质谱联用分析鉴定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:王贤纯梁宋平林勇
申请(专利权)人:湖南师范大学
类型:发明
国别省市:

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