QC-PCR检测禽坦布苏病毒竞争模板的扩增引物、制备方法和禽坦布苏病毒检测试剂盒技术

本发明专利技术涉及病毒检测技术领域，特别涉及QC-PCR检测禽坦布苏病毒的竞争模板的引物，核苷酸序列见序列表中序列1和序列2。竞争模板的制备方法：提取病毒RNA，反转录得到禽坦布苏病毒的cDNA一链；进行PCR扩增，扩增体系中含有步骤（1）得到的cDNA一链、引物1和引物2，得到QC-PCR检测禽坦布苏病毒的竞争模板。禽坦布苏病毒检测试剂盒由PCR扩增体系组成。本发明专利技术的禽坦布苏病毒检测试剂盒，可在5小时内完成病毒的快速定量检测，最低检测限为4×102个目标基因；比传统的测定病毒含量的方法节省了4-5天时间，还克服了荧光定量方法仪器要求高、易污染、成本高的缺点，可满足禽坦布苏病毒及时准确定量的需要。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及病毒检测
，特别涉及QC-PCR检测禽坦布苏病毒的竞争模板的引物，还涉及此竞争模板的制备方法，还涉及禽坦布苏病毒检测试剂盒。
技术介绍
2010年4月以来，在我国山东、江苏、浙江、广西等养禽集中区域爆发了ー种疾病，以种禽产蛋严重下降、肉禽出现神经症状为特点，后证实是由坦布苏病毒(Tembusu virus)所引起，目前研究人员已先后在鸭、鹅、鸡、麻雀等体内分离到该病毒，同时也已证实该病毒在养禽区域定植。禽坦布苏病毒属于黄病毒科黄病毒属蚊媒病毒类恩塔亚病毒群，是ー种新发黄病毒，给中国的养禽业带来了极大的经济损失。 禽坦布苏病毒病毒活力较低，滴度下降快，造成病毒滴度不稳定，所以给病毒的定量带来了一定的困难。目前对禽类病毒定量的方法主要是荧光定量PCR和半数鸡胚感染量(EID5tl)的測定，但前者存在仪器昂贵、使用成本高和易污染等方面的缺点；而后者则需要将病毒接种SPF鸡胚或者鸭胚，统计不同病毒稀释度对胚体的感染量，一般需要5-6天时间，耗时长、工作量大，加之禽坦布苏病毒活力低，所以更不适合使用EID5tl进行含量的測定。此夕卜，一般的PCR检测方法只能进行定性的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种QC？PCR检测禽坦布苏病毒的竞争模板的扩增引物，其特征是核苷酸序列如下：引物1：5’？ATGACTGACACNACTCCNTTTG？3’，引物2：5’？CCNARCCACATRWACCATTYTCHCTYTTBCCCATCATGTT？3’。

【技术特征摘要】
1.一种QC-PCR检测禽坦布苏病毒的竞争模板的扩增引物，其特征是核苷酸序列如下 引物 I :5，-ATGACTGACACNACTCCNTTTG-3，，引物 2 :5，-CCNARCCACATRWACCATTYTCHCTYTTBCCCATCATGTT-3，。2.—种QC-PCR检测禽坦布苏病毒的竞争模板的制备方法，其特征是包括以下步骤 (I)提取禽坦布苏病毒RNA，进行反转录得到禽坦布苏病毒的cDNA —链； (2 )进行PCR扩增，扩增体系中含有步骤(I)得到的cDNA —链、引物I和引物2，胶回收得到QC-PCR检测禽坦布苏病毒的竞争模板； 引物 I 核苷酸序列5’ -ATGACTGACACNACTCCNTTTG-3’， 引物 2 核苷酸序列5’ -CCNARCCACATRWACCATTYTCHCTYTTBCCCATCATGTT-3’。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述PCR扩增体系组成10X Ex Taqbuffer 2· 5μ L，2. 5mM 的 dNTP2y L，引物 I 和引物 2 各 O. 5μ L，Ex Taq 酶 0.5yL，cDNA —链 O. 5 μ L, ddH20 补足 25 μ L ; 引物I和引物2的浓度各为IOOpmol/μ L ； cDNA 一链浓度为 2. 5ng/ μ L ； Taq酶浓度为5U/yL。4.根据权利要求2或3所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琳，袁朋，张秀美，胡北侠，许传田，杨少华，徐敏丽，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：