本发明专利技术公开了一种胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料的制备方法，包括以下步骤：将胰凝乳蛋白酶溶液滴加到氯金酸溶液中，搅拌均匀；在避光条件下，调节混合溶液的pH值为碱性，并于20～37℃水浴条件下反应1～48h后，分离纯化制得所述的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料。本发明专利技术操作步骤简便，反应条件温和，所用试剂环境友好，生成的金纳米团簇不易团聚；本发明专利技术制备的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料具有高产量的荧光量子，还具有良好的生物相容性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种金纳米团簇，尤其涉及。
技术介绍
迄今为止，研究者已经专利技术了多种荧光纳米材料，如半导体量子点、涂料掺杂纳米粒子、掺镧系元素纳米粒子和碳纳米点等。与小分子染料和荧光蛋白相比，上述荧光纳米材料具有高的光物理性、大的比表面积、易于进行表面修饰以及颜色可调等特点。因此，它们有可能补足小分子染料的不足甚至替代传统荧光探针，在生物传感、小分子成像、光电子学和纳米医学上有巨大的应用前景。 金属纳米团簇是一个备受关注的新型纳米荧光材料，它由几个到几百个原子组成，通常直径小于2nm，性质介于单原子和纳米粒子或者大体积的贵金属之间。金属纳米团簇的尺寸接近电子的费米波长，连续的能态分裂为离散的能态，与纳米粒子不同的光学、电学和化学性质。其最突出的特征是光致发光的性质，以及具有较大的斯托克斯位移和高发射率。金属纳米团簇荧光材料主要应用于生物标记和光电发射。最近科研人员致力于研究水溶性荧光金纳米团簇的合成途径。由于纳米团簇很容易团聚，所以还原溶液中的金属离子很容易得到大分子纳米粒子而不是小分子的纳米团簇。此外，包裹在粒子表面的配体对它的发射性质有很大的影响。所以，选择合适的试剂用于稳定超小纳米粒子簇不仅可以防止其团聚还可以提高荧光量子产量。蛋白质作为生物大分子可以用作合成强荧光的金属纳米团簇模板。蛋白质结构中含有大量结合点，这些结合点可以稳定甚至还原金属离子，从而建立合成小分子金属纳米团簇的支架。2009年，以牛血清白蛋白(BSA)作为还原剂和保护剂，合成了第一个以蛋白质作为稳定剂的金纳米团簇荧光材料(Au NCs)。值得注意的是，该金纳米团簇荧光材料在BSA和氯金酸溶液中原位合成。因此，BSA不仅仅是氯金酸的还原剂，还是金纳米团簇的保护剂。受这个发现的鼓舞，研究者们开始报道比如溶菌酶和铁蛋白等作为生物支架去合成荧光Au NCs0酶是催化特殊化学反应的蛋白质，目前，已有文献报道辣根过氧化物酶(HRP)作为还原剂和保护剂，用于合成荧光Au NCs0
技术实现思路
本专利技术提供了，该方法可以阻止金纳米粒子的生成，防止金纳米团簇的团聚，并且制得的材料具有较好的生物相容性。—种胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料的制备方法，包括以下步骤将胰凝乳蛋白酶溶液滴加到氯金酸溶液中，搅拌均匀；在避光条件下，调节混合溶液的PH值为碱性，并于20 37°C水浴条件下反应I 48h后，分离纯化制得所述的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料。胰凝乳蛋白酶为蛋白质分子，在本专利技术中用作合成强荧光的金属纳米团簇模板，它分子中含有大量含巯基、二硫键、氨基的氨基酸结合位点，这些位点在制备过程中通过金-硫键或静电作用与氯金酸结合，形成胰凝乳蛋白酶-氯金酸复合物，将溶液PH调至碱性时，胰凝乳蛋白酶中的酪氨酸及含有伯氨基的赖氨酸、精氨酸在碱性条件下可原位还原氯金酸，得到胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇。如图I所示本专利技术方法的原理图，一方面，胰凝乳蛋白酶使氯金酸定位，可以降低溶液中氯金酸的含量，阻止比金纳米团簇粒径大的金纳米粒子的生成，另一方面，胰凝乳蛋白酶可以防止金纳米团簇团聚。与现有的包裹在金纳米团簇表面的材料相比较，胰凝乳蛋白酶对金纳米团簇的发射性质影响较小，可以提高荧光量子的产量；而且胰凝乳蛋白酶为绿色生物制剂，表面富含氨基，生成的荧光材料具有良好的生物相容性。所述的胰凝乳蛋白酶可以是来源于动物的胰凝乳蛋白酶，如猪胰凝乳蛋白酶、牛胰凝乳蛋白酶等，优选为牛胰凝乳蛋白酶。在氯金酸浓度一定的条件下，胰凝乳蛋白酶溶液浓度影响单个酶分子结合氯金酸的量，进而影响生成金纳米团簇的量和荧光材料的发光强度，所述胰凝乳蛋白酶溶液浓度优选为15 90mg/mL,更优选为40 60mg/mL,最优选为50mg/mL。氯金酸溶液浓度太高，以导致金纳米团簇的团聚以及金粒子的生成，所述氯金酸溶液的浓度优选为O. I % 2%，更优选为O. 5% 1%，最优选为1%。单个胰凝乳蛋白酶分子结合位点是有限的，因此胰凝乳蛋白酶与氯金酸之间的摩尔比会最终影响荧光材料的性能，如发光量、粒径等等，胰凝乳蛋白酶与氯金酸之间摩尔比优选为O. 068 I O. 410 1，更优选为O. I O. 3 I。在碱性条件，有利于提高酪氨酸及含有伯氨基的赖氨酸、精氨酸的还原性，所述混合溶液的PH值为10 12，最优选为12。所述分离纯化的方法为透析，该方法操作简单，条件温和，对产品影响较小。所述反应时间优选为4h。本专利技术提供的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料由于其良好的生物相容性和无毒副作用，因此在细胞成像、蛋白及细菌的检测、免疫分析、生物传感器等方面具广泛应用前景。如本专利技术提供的一种胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料，由于胰凝乳蛋白酶的存在而具有丰富的羧基，可通过催化形成酰胺键而进一步固定含有氨基的叶酸，得到具有特异性选择功能的复合荧光纳米探针，通过叶酸与癌细胞表面叶酸受体的特异性识另IJ，可进行细胞的荧光标记成像。与现有技术相比较，本专利技术有益效果为(I)本专利技术引入了胰凝乳蛋白酶作为还原剂和保护剂，胰凝乳蛋白酶上的还原性功能基团在碱性条件下还原性强，有利于金纳米团簇的合成；(2)本专利技术操作步骤简便，反应条件温和，所用试剂环境友好，生成的金纳米团簇不易团聚；(3)本专利技术制备的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料具有高产量的荧光量子，还具有良好的生物相容性。附图说明图I本专利技术胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇的制备示意图。图2本专利技术实施例I的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇的高分辨透射电镜图。图3紫外光(365nm，紫色背景)照射下本专利技术实施例I的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇(左，红色荧光)和胰凝乳蛋白酶(右，无荧光)溶液的照片。图4本专利技术实施例I的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇㈧和胰凝乳蛋白酶⑶的荧光发射光谱图，激发波长为475nm。图5本专利技术实施例I的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇的荧光激发光谱和发射光谱图。图6本专利技术实施例I的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇的可见光谱图。图7本专利技术实施例I的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇的X射线光电子能谱 (Au4f) ο图8本专利技术实施例I的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇的能量色散光谱。具体实施例方式实施例Ia)将氯金酸溶于超纯水中制得浓度为I %的氯金酸溶液，在磁力搅拌下将50mg/mL的牛胰凝乳蛋白酶溶液逐滴加入到氯金酸溶液中，胰凝乳蛋白酶/氯金酸摩尔比为O. 212 I，磁力搅拌 IOmin;b)在避光条件下，向a)中所得溶液中加入lmol/L氢氧化钠溶液，调节溶液pH至12，在37°C的水浴中搅拌反应4h后，将所得溶液装入透析袋中用蒸馏水透析至透析液电导率不变为止，将透析袋内溶液冷冻干燥得到胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料。随后，对经步骤(a) (b)制备的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇进行荧光光谱分析、透射电镜扫描等操作，得到的测试分析结果如图2 8所示。图2所示高分辨透射电镜图中，只观测到粒径在2nm以下粒子，证明所得材料为纳米团簇。图3中紫外光(365nm，紫色背景)照射下胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇显示红色荧光(左)和而纯胰凝乳蛋白酶溶液(右)则无荧光。图4所示荧光发射光谱图中，用475nm的光激发时，胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇具有的荧光发射峰，而胰凝乳蛋白酶无荧光峰，图五胰凝乳蛋白酶本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料的制备方法，包括以下步骤：将胰凝乳蛋白酶溶液滴加到氯金酸溶液中，搅拌均匀；在避光条件下，调节混合溶液的pH值为碱性，并于20～37℃水浴条件下反应1～48h后，分离纯化制得所述的胰凝乳蛋白酶保护金纳米团簇荧光材料。
【技术特征摘要】
1.ー种胰凝乳蛋白酶保护金納米团簇荧光材料的制备方法，包括以下步骤 将胰凝乳蛋白酶溶液滴加到氯金酸溶液中，搅拌均匀；在避光条件下，调节混合溶液的PH值为碱性，并于20 37°C水浴条件下反应I 48h后，分离纯化制得所述的胰凝乳蛋白酶保护金納米团簇荧光材料。2.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述的胰凝乳蛋白酶为牛胰凝乳蛋白酶。3.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述胰凝乳蛋白酶溶液的浓度为15 90mg/mLo4.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述氯金酸溶液的浓度为O.1% 2%。5.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：奚凤娜，晏菲，涂陈弟，王心怡，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：
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