本发明专利技术涉及生物工程技术领域，公开了一种癌胚抗原的单克隆抗体及包含该抗体的芯片。本发明专利技术所述单克隆抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。本发明专利技术所述单克隆抗体的均一性和生物活性单一性使抗原抗体反应结果便于质量控制，利于标准化和规范化。包含此抗体芯片可直接应用于医疗及科研机构对多种肿瘤进行疾病的诊断和预防，解决了传统技术存在的费时、费力、结果重复性差等技术问题，在临床诊断领域中具有极高的应用价值，具有广泛的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程
，特别涉及一种癌胚抗原单抗及包含该抗体的芯片以及应用。
技术介绍
癌胚抗原(CEA)是一种酸性蛋白，最初发现于结肠癌和胎儿肠组织中，故名癌胚抗原。癌旁正常粘膜CEA含量很少或为阴性。胃癌的CEA阳性率85. 58%。其中粘液腺癌及印戒细胞癌(粘液细胞癌)为100%。电镜下见CEA同时分布于癌细胞膜，及癌细胞内胞质内的蛋白合成及转运的细胞器(如核膜、内质网、高尔基器及其分泌小泡)中。CEA升高常见于大肠癌、胰腺癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。但吸烟、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特异性结肠炎等疾病，15% 53%的病人血清CEA也会升高，所以CEA不是恶性 肿瘤的特异性标志，在诊断上只有辅助价值。此外，血清CEA水平与大肠癌的分期有明确关系，越晚期的病变，CEA浓度越高。除原发性结肠癌以外，腺胰癌、胆管癌、胃癌。食道癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系统的肿瘤阳性率也很高，一般在50 - 70%。良性肿瘤、炎症和退行性疾病，如结肠息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎和酒精性肝硬化变病人CEA也有部分升高，但远远低于恶性肿瘤，一般小于20 μ g/L，CEA超过20ng/ml时往往提示有消化道肿瘤。所以测定CEA可以作为良性与恶性肿瘤的鉴别诊断依据。本项目主要应用与在食管癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胃转移癌等恶性肿瘤相关蛋白领域创立抗体芯片检测技术平台，自主研发48种恶性肿瘤标志物抗体芯片检测试剂盒(抗体芯片)完全是由中国人自主开发，应用这一芯片，可通过多种方式、多种渠道、多层面检测恶性肿瘤标志物的效价和含量，将检测灵敏度由Ug提高到ng级，从而达到更准确、更全面的效果，其检测结果可指导临床治疗。48种恶性肿瘤标志物抗体芯片检测试剂盒(抗体芯片)对促进我国生物高技术前沿领域的发展具有重大鼓舞作用，对提升我国生物芯片技术、产品和市场的国际竞争力具有重大意义，此方法完全符合分子免疫学原理。目前国外几乎所有的主要制药公司都不同程度地采用了生物芯片技术来寻找药物靶标，查检药物的毒性或副作用及进行药物产品的定量和定性。用芯片技术进行大规模的药物筛选可以省略大量的动物试验，缩短药物筛选所用时间，从而带动创新药物的研究和开发。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种癌胚抗原单抗及包含该抗体的芯片以及应用。本专利技术的整体技术构思是利用自主设计合成的癌胚抗原(CEA)多肽(序列为TQQAT PGPAYSGREI)经免疫动物、细胞融合、亚克隆及酶联免疫吸附实验进行特异性筛选技术，获得高效价、高特异性抗人癌胚抗原单克隆抗体，由于此单抗效价高、特异性好，与另外47种与肿瘤相关的单克隆抗体点制的抗体芯片，结合CY3标记的补体C3抗体与被检产品建立了完整的检测系统，用于检测48种恶性肿瘤标志物蛋白质含量。此抗体芯片具有灵敏度高，特异性好、操作简单、高通量等优点，可用于临床和体检血清的监测和质控。一种癌胚抗原的单克隆抗体，其重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO. I所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示；或其重链可变区由SEQ ID NO. I所示的氨基酸序列经过取代、缺失、或添加一个或几个氨基酸衍生的与SEQ ID NO. I的氨基酸序列至少有95%的一致性，轻链可变区由SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列经过取代、缺失、或添加一个或几个氨基酸衍生的与SEQ ID NO. 2的氨基酸序列至少有95%的一致性且所述单克隆抗体具有特异性结合癌胚抗原的特性。作为优选，所述单克隆抗体包括单链抗体、双链抗体、嵌合抗体、人源化抗体、以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。本专利技术所述“抗体”应该解释为涵盖具有所需特异性的结合结构域的任意特异性结合因子。因而，这个术语涵盖了与之同源的抗体片段、衍生物、人源化抗体以及抗体的功能等同物和同源物，也包括含有抗原结合结构域的任何多肽，无论是天然的还是合成产生的。抗体的实例是免疫球蛋白亚型(如IgG，IgE, IgM, IgD和IgA)及其亚型亚类；也可以 是包含抗原结合结构域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd ;和双链抗体(diabodies)。融合至另一多肽的、包含抗原结合结构域的嵌合体分子或者等同物也包括在其中。嵌合抗体的克隆与表达在EP. A-0120694和EP. A. 0125023中描述。本专利技术所述单克隆抗体可以是，例如，单价的或是单链抗体、双链抗体、嵌合抗体、人源化抗体、以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。抗体可以通过许多方式修饰，可用DNA重组技术来产生保留原来抗体特异性的其它抗体或嵌合分子。这种技术可以包括将编码抗体的免疫球蛋白可变区或互补性决定区(⑶Rs)的DNA引入不同免疫球蛋白的恒定区或恒定区加框架区。参见，EP. A. 184187,GB2188638A或.EP. A. 239400。还可以对杂交瘤细胞或产生抗体的其它细胞进行遗传突变或其它改变，这可以改变或者不改变所产生抗体的结合特异性。用于本专利技术的单克隆抗体也可用杂交瘤方法制得，因为编码本专利技术人源化抗体的DNA序列可用本领域技术人员熟知的常规手段，如根据本专利技术公开的氨基酸序列人工合成或用PCR法扩增得到，因而也可用重组DNA方法，可用本领域熟知的各种方法将该序列连入合适的表达载体中。最后，在适合本专利技术抗体表达的条件下，培养转化所得的宿主细胞，然后本领域技术人员应用熟知的常规分离纯化手段纯化得到本专利技术的单克隆抗体。如上所述，本专利技术还提供了用于实施本专利技术抗体的试剂、试剂盒或芯片。试剂、试剂盒或芯片至少包括如下一种或多种根据以上方法制成的抗体，编码该抗体的核苷酸，或包含该抗体的真核细胞、原核细胞和病毒以及任选的缓冲溶液。作为优选，本专利技术所述的抗体芯片，还包含特异性结合以下抗原的抗体CK18、CK19、Cyclin-DU CD34、ER、PR、P53、Calcitonin、PSA、P63、CEA, S-100、Vimentin、AR、C-erbB-2、PCNA、Ki-67、HSP70、ΑΕΙ、AE3、P504S、CK34BE、CA 153、CA 125、CA 199、ECG2、IMPU Ras, CSK, Erbb2、p90、pl6、Calnuc、CyclinE、CDK2、CIAP、RalA、p62、CyclinBl、Koc、CK20、EMAλ CA72-4、E-Cadherin、C-KIT、Cathepsin、MDM2、Hepatocyte。本专利技术还提供包含所述抗体芯片的试剂盒，还包含信标分子标记的C3补体抗体，所述信标分子优选为CY3。在具体实施方式中，本专利技术还提供癌胚抗原抗体的制备方法，包括如下工艺步骤(I)细胞融合将自主设计合成的癌胚抗原多肽(序列为TQQAT PGPAYSGREI)免疫动物取其致敏的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞悬液按10-100 1比例混合，加入聚乙二醇(美国Sigma公司出品)使细胞彼此融合，在两种细胞的混合细胞悬液中滴加培养液，以HAT选择性培养基(美国海克隆公司出品)进行细胞培养；(2)筛选杂交瘤细胞待融合的细胞培养至第5-10天时，吸本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种癌胚抗原的单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区氨基酸序列如SEQ？ID？NO.1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQ？ID？NO.2所示；或其重链可变区由SEQ？ID？NO.1所示的氨基酸序列经过取代、缺失、或添加一个或几个氨基酸衍生的与SEQ？ID？NO.1的氨基酸序列至少有95%的一致性，轻链可变区由SEQ？ID？NO.2所示的氨基酸序列经过取代、缺失、或添加一个或几个氨基酸衍生的与SEQ？ID？NO.2的氨基酸序列至少有95%的一致性且所述单克隆抗体具有特异性结合癌胚抗原的特性。
【技术特征摘要】
1.一种癌胚抗原的单克隆抗体，其特征在于，其重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO. I所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示；或其重链可变区由SEQ ID NO. I所示的氨基酸序列经过取代、缺失、或添加一个或几个氨基酸衍生的与SEQ ID NO. I的氨基酸序列至少有95%的一致性，轻链可变区由SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列经过取代、缺失、或添加一个或几个氨基酸衍生的与SEQ ID NO. 2的氨基酸序列至少有95%的一致性且所述单克隆抗体具有特异性结合癌胚抗原的特性。2.根据权利要求I所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括单链抗体、双链抗体、嵌合抗体、人源化抗体、以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。3.权利要求I至2任一项所述的单克隆抗体在制备癌胚抗原的检测试剂中的用途。4.一种试剂，包含权利要求I至2任一项所述的单克隆抗体。5.一种试剂盒，包含...
【专利技术属性】
技术研发人员：李彬，
申请(专利权)人：李彬，
类型：发明
国别省市：
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