本发明专利技术涉及基因C9ORF135的应用，具体讲涉及基因C9ORF135、其编码的蛋白以及该蛋白的抗体的应用及其试剂盒。本发明专利技术提出基因C9ORF135、其编码的蛋白以及该蛋白的抗体在诊断、检测或治疗精子畸形中的应用，在作为男性避孕药的潜在靶点中的应用、在诊断、检测或治疗衰老引起的精子活力下降及精子畸形中的应用，以及在检测胚胎干细胞分化中的应用，本发明专利技术还提出用于检测精子畸形的试剂盒、用于筛选男性避孕药物的试剂盒、用于检测胚胎干细胞分化的试剂盒及其使用方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因C90RF135的应用，具体讲，涉及基因C90RF135、其编码的蛋白以及该蛋白的抗体的应用及其试剂盒。
技术介绍
新基因C90RF135位于人类第13号染色体，编码蛋白区(OTS)长度690个核苷核，编码229个氨基酸，经过SWISSP0RT工具分析氨基酸残基的序列，发现有一个单跨膜结构域，将该蛋白分为胞外区、跨膜区和胞内区，并且有I个潜在的N-糖基化位点(表I)，其中文献 Liu T, Qian ff. -J. , Gritsenko M. A. , et al. Human plasma N-glycoproteomeanalysis by immunoaffinity subtraction，hydrazide chemistry, and massspectrometry. J. Proteome Res. 4 :2070-2080 (2005)提不该蛋白为糖基化蛋白。该蛋白的 结构域的预测如下表所示。 表I C9orfl35编码蛋白质(NP—001010940)的可能结构域权利要求1.基因C90RF135、其编码的蛋白以及该蛋白的抗体在诊断或检测精子畸形中的应用。2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于，所述的检测方法包括定量PCR检测法、ELISA免疫检测法、免疫印迹法；优选ELISA免疫检测法。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，采用定量PCR法检测基因C90RF135的表达，用定量PCR仪检测，当待测组的基因C90RF135水平低于正常参比组基因C90RF135水平1/3时，判定为精子畸形； 采用ELISA免疫检测法检测C90RF135编码的蛋白时，当待测组的基因C90RF135编码的蛋白质水平低于正常参比组基因C90RF135水平的一半时，判定为精子畸形。4.一种用于诊断或检测精子畸形的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为定量PCR的试剂盒，包括提取精子RNA的试剂盒、正常参比组的RNA、逆转录试剂、C90RF135基因的引物、内参的引物，SYBR荧光试剂盒，所述内参采用鱼精蛋白I。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的C90RF135基因前引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示，C90RF135基因后引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 2所示；鱼精蛋白I如引物的核昔酸序列如SEQ ID NO :3所不,鱼精蛋白I后引物的核昔酸序列如SEQID NO 4 所示。6.一种用于诊断或检测精子畸形的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用免疫检测法，包括提取精子蛋白质的试剂盒、C90RF135抗体包被的孔板、C90RF135的单克隆或多克隆抗体、作为浓度参比标准的C90RF135纯化蛋白、第二抗体、ELISA显色试剂，用于检测的酶标仪，其中，C90RF135抗体为单抗或多抗。7.一种用于诊断或检测衰老引起的精子活力下降及精子畸形的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用免疫检测法，包括提取精子蛋白质的试剂盒、C90RF135抗体包被的孔板、C90RF135的单克隆或多克隆抗体、作为浓度参比标准的C90RF135纯化蛋白、第二抗体、ELISA显色试剂，用于检测的酶标仪，其中，C90RF135抗体为单抗或多抗。8.根据权利要求6或7任一权利要求所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中的C90RF135的单克隆或多克隆抗体为兔源，所述的第二抗体选自辣根过氧化物酶羊抗兔IgG09.根据权利要求6或7任一权利要求所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法为将C90RF135抗体包被的96孔板，加入提取的精子蛋白质，再加入C90RF135抗体混合，温育，洗去非特异性吸附的蛋白，加入二抗和显色剂；用原核表达的C90RF135蛋白作为参考的标准品，按浓度从高到低倍比稀释，绘制标准曲线；通过测定待测精子蛋白质的吸光度，计算其含量；其中，C90RF135抗体为单抗或多抗。10.基因C90RF135、其编码的蛋白以及该蛋白的抗体在作为男性避孕药的潜在靶点中的应用。11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，通过比较待测化合物对正常精子的C90RF135表达水平有无抑制作用，从而判定待测化合物是否有药效。12.基因C90RF135、其编码的蛋白以及该蛋白的抗体在检测胚胎干细胞分化中的应用。13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述的检测方法包括定量PCR检测法、ELISA免疫检测法。14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，当采用定量PCR检测法时，当待测组的基因C90RF135的水平不低于胚胎干细胞组50%时，判定为未分化；当采用免疫检测法时，当待测组的基因C90RF135编码的蛋白质的水平不低于胚胎干细胞组50%时，判定为未分化。15.一种用于检测胚胎干细胞分化的试剂盒，所述试剂盒包括RNA提取试剂盒、正常参比组的RNA、逆转录试剂、C90RF135基因的引物、内参的引物、SYBR荧光试剂盒，所述内参采用GAPDH。16.根据权利要求15所述的试剂盒，其特征在于，所述的C90RF135基因前引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示，C90RF135基因后引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 2所示；内参GAPDH前引物的核苷酸序列如SEQ ID NO :5所示，后引物的核苷酸序列如SEQ IDNO :6所/Jn ο17.一种用于检测胚胎干细胞分化的试剂盒，所述试剂盒包括蛋白质提取试剂盒、 C90RF135抗体包被的96孔板、C90RF135的单克隆或多克隆抗体、作为浓度参比标准的C90RF135纯化蛋白、第二抗体、ELISA显色试剂，用于检测的酶标仪，其中，C90RF135抗体为单抗或多抗。全文摘要本专利技术涉及基因C9ORF135的应用，具体讲涉及基因C9ORF135、其编码的蛋白以及该蛋白的抗体的应用及其试剂盒。本专利技术提出基因C9ORF135、其编码的蛋白以及该蛋白的抗体在诊断、检测或治疗精子畸形中的应用，在作为男性避孕药的潜在靶点中的应用、在诊断、检测或治疗衰老引起的精子活力下降及精子畸形中的应用，以及在检测胚胎干细胞分化中的应用，本专利技术还提出用于检测精子畸形的试剂盒、用于筛选男性避孕药物的试剂盒、用于检测胚胎干细胞分化的试剂盒及其使用方法。文档编号C12Q1/68GK102827921SQ20111015947公开日2012年12月19日 申请日期2011年6月14日 优先权日2011年6月14日专利技术者李凌松, 周士新, 文锦华 申请人:李凌松, 周士新, 文锦华本文档来自技高网...
【技术保护点】
基因C9ORF135、其编码的蛋白以及该蛋白的抗体在诊断或检测精子畸形中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李凌松，周士新，文锦华，
申请(专利权)人：李凌松，周士新，文锦华，
类型：发明
国别省市：
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