本发明专利技术公开了一种转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的侧翼序列及其鉴定方法。本发明专利技术所提供的鉴定方法包括如下步骤：以待测水稻的基因组DNA为模板，利用特异性的引物对进行PCR检测，确定所述待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2；所述引物对的按照如下（1）或（2）的方法设计得到的：（1）分别依据序列1的第1-379位，以及第380-525位设计所述引物对中的正向引物和反向引物；（2）分别依据序列2的第1-533位，以及第534-785位设计所述引物对中的正向引物和反向引物。实验证明，本发明专利技术所提供的鉴定待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的方法准确率高、特异性强、灵敏度高、耗时短，这为转基因安全提供了保证。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种转hsa基因表达人血清蛋白水稻品系114-7-2的侧翼序列及其鉴定方法，具体涉及用于鉴定或辅助鉴定待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的引物对的设计方法，转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的鉴定方法，以及转人血清白蛋白水稻品系114-7-2外源插入片段的侧翼序列。
技术介绍
水稻是我国乃至全世界最重要的粮食作物之一，是世界上食用人口最多、历史最 悠久的农作物。随着生物技术的发展，转基因技术正广泛地应用于农作物改性，其中2009年我国已批准了转基因水稻Bt63的安全证书。目前，还有多个转基因品系已进入环境释放和生产性试验阶段。转人血清白蛋白水稻品系114-7-2是由武汉大学杨代常教授利用水稻胚乳细胞的蛋白体，采用水稻胚乳特异性表达的启动子和信号肽，介导重组人血清白蛋白进入水稻胚乳细胞的内膜系统，并储存到水稻胚乳的蛋白体中，从而使重组人血清白蛋白能在水稻种子内大量积累的转基因水稻品系，所导入外源基因是人血清白蛋白(HSA)。转人血清白蛋白水稻品系114-7-2作为一个高效蛋白质表达技术平台，可以用于表达包括医药、食品添加剂、美容、营养和工业用等各种用途的蛋白质或多肽，使传统的蛋白药物的工业发酵生产方式变为农业生产方式生产，具有极高地推广价值和应用前景，可以产生巨大的经济和社会效应。在转基因生物安全受到越来越广泛关注的当今社会，以生物技术为基础的转基因检测方法成了监管转基因植物及食品的有效手段。实时荧光PCR (Real time PCR)就是其中一个最常用最有效的方法。实时荧光PCR是在常规PCR基础上加入荧光标记探针，通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测实现对起始模板定量及定性的分析，具有高特异性和高灵敏度的优点。目前已经有部分专利和文献报道了转基因植物外源插入载体旁侧序列，例如彭于发等人于2007年利用基因步移和LD-PCR方法分析了水稻品系科丰6号的外源插入片段的旁侧序列，建立了转基因水稻科丰6号的品系特异性检测方法。然而，在对现有的专利和文献的分析中发现，还没有任何关于转hsa基因表达人血清蛋白水稻品系114-7-2的外源插入片段的旁侧序列的文章和专利报道。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的PCR引物对的设计方法。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的PCR引物对的设计方法，为如下(I)或(2)(I)依据序列表中序列2的第1-379位设计所述引物对中的正向引物，依据序列表中序列2的第380-525位设计所述引物对中的反向引物；(2)依据序列表中序列I的第1-533位设计所述引物对中的正向引物，依据序列表中序列I的第534-785位设计所述引物对中的反向引物。其中，序列I和序列2分别为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的两个侧翼序列。序列I为位于水稻基因组第5染色体上的5’端侧翼序列，全长785bp，前533bp为水稻基因组序列片段(GenBank NC008398的第2496104-2496636位)，后252bp为转化载体上T-DNARBS序列片段。序列2为位于水稻基因组第4染色体上的5’端侧翼序列，全长525bp，前 379bp 为水稻基因组序列片段(GenBank NC008397 的第 30911165-30911543 位)，后146bp为转化载体上T-DNARBS序列片段。 本专利技术的另一个目的是提供一种检测或辅助检测待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的方法。该方法包括如下步骤以所述待测水稻的基因组DNA为模板，利用根据上述方法(即鉴定或辅助鉴定待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的PCR引物对的设计方法)设计得到的引物对进行PCR检测，从而确定所述待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2。在本专利技术的一个实施例中，所述引物对具体由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA分子组成。 其中，序列3由17个核苷酸组成；序列4由20个核苷酸组成。为了增加鉴定结果的准确度、灵敏度等，所述PCR可为实时荧光PCR。所述实时荧光PCR所采用的探针可为TaqMan荧光探针，在本专利技术中，所述探针的核苷酸序列具体如序列表中序列5所示。其中，序列5由21个核苷酸组成。TaqMan突光探针是一种寡核苷酸探针，报告突光基团连接在探针的5’末端,淬灭荧光基团连接在探针的3’末端。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’_3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。所述报告荧光基团可为Fam (FAM)、Hex (HEX)、Tet (TET)、Joe (JOE)、Vic (VIC)、Fite(FITE)、Cy3 (CY3)或 Cy5 (CY5)。所述淬灭荧光基团可为 Tamra (TAMRA)、Rox (ROX)、Dabcy (DABCY) ,Bhql (BHQl)或Bhq2 (BHQ2)。在本专利技术中，所述探针5’端标记的报告荧光基团具体为FAM荧光基团，3’端标记的淬灭荧光基团具体为TAMRA荧光基团。所述实时荧光PCR的PCR体系中，所述引物对中的两条引物以及所述探针的摩尔比可为2:2:1。在本专利技术的一个实施例中，反应起始时，所述引物对中的两条引物的浓度均为O. 2 μ mol/L,所述探针的浓度为O. I μ mol/L。所述实时荧光PCR的退火温度可为60°C。在本专利技术的一个实施例中，所述实时突光PCR的反应参数具体如下50°C 2min ；95°C IOmin ；95°C 5s,60°C lmin，共 40 个循环。本专利技术的再一个目的是提供转人血清白蛋白水稻品系114-7-2外源插入片段的侧翼序列。本专利技术所提供的转人血清白蛋白水稻品系114-7-2外源插入片段的侧翼序列的核苷酸序列具体为序列表中的序列I或序列2。其中，序列I和序列2分别为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的两个侧翼序列。序列I为位于水稻基因组第5染色体上的5’端侧翼序列，全长785bp，前533bp为水稻基因组序列片段(GenBank NC008398的第2496104-2496636位)，后252bp为转化载体上T-DNARBS序列片段。序列2为位于水稻基因组第4染色体上的5’端侧翼序列，全长525bp，前 379bp 为水稻基因组序列片段(GenBank NC008397 的第 30911165-30911543 位)，后146bp为转化载体上T-DNARBS序列片段。 利用上述方法(鉴定或辅助鉴定待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的PCR引物对的设计方法)设计得到的鉴定或辅助鉴定待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114-7-2的PCR引物对法也属于本专利技术的保护范围。实验证明，本专利技术通过实时荧光PCR的方法，利用根据转hsa基因表达人血清蛋白水稻品系114-7-2的本文档来自技高网...
【技术保护点】
鉴定或辅助鉴定待测水稻是否为转人血清白蛋白水稻品系114？7？2的PCR引物对的设计方法，为如下（1）或（2）：（1）依据序列表中序列2的第1？379位设计所述引物对中的正向引物，依据序列表中序列2的第380？525位设计所述引物对中的反向引物；（2）依据序列表中序列1的第1？533位设计所述引物对中的正向引物，依据序列表中序列1的第534？785位设计所述引物对中的反向引物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张丽丽，黄新，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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