本发明专利技术公开了使用丝胶蛋白作为促进植物愈伤组织形成的调节剂的新用途，丝胶能够促进植物愈伤组织形成，提高愈伤组织质量。本发明专利技术还公开了一种植物培养基，包括基础培养基和营养添加剂，其中所述的营养添加剂是0.1～10g/L丝胶蛋白。传统植物组培培养基中，除了盐分、糖、激素外，一般都需要附加天然成分如水解酪素、椰子汁、马铃薯、豆汁等，由于这些天然混合物成分未知，含糖分过高，容易携带植物内共生菌、容易发霉而且批次之间稳定性很差，有重大风险。本发明专利技术使用丝胶替代水解酪素、椰子汁、马铃薯、豆汁等天然混合物，极大地降低了成本，提高了细胞培养体系的稳定性，避免了污染，具有重要的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物培养基领域，特别涉及一种丝胶蛋白替代植物培养中的天然成分的培养基。
技术介绍
培养基是人工配制的，满足不同材料生长，繁殖或积累代谢产物的营养物质。在离体培养条件下，不同种类植物对营养的要求不同，甚至同一种植物不同部位的组织以及不同培养阶段对营养要求也不相同。筛选合适的培养基是植物组织培养极其重要的内容，是 决定成败的关键因素之一。大多数植物培养基的主要成分是无机营养物质(大量营养兀素和微量营养兀素)、碳源、有机添加物、植物生长调节剂和凝胶剂。一些植物组织可以生长在简单的培养基上，这些培养基只含无机盐和可利用的碳源(蔗糖)，但大多数植物组织必须在培养基中添加维生素、氨基酸和生长物质，而且经常还将一些复合的营养物质加入到培养基中，这种由“化学定义”的化合物组成的培养基称为“合成”培养基。合成植物培养基大致由7种成分组成(1)糖类，(2)多种无机盐类，(3)微量元素，(4)氨基酸、酰胺、嘌呤，(5)维生素，(6)生长素，(7)养基还可添加天然的汁液，如椰子汁、酵母提取液、水解酪蛋白、麦芽浸出液等，由于天然有机物质成分复杂，常因品种、产地和成熟等因素而变化，实验的重复性比较差。另外，有些天然有机物质还会因高压灭菌而变性，从而失去效果，这时应该采取过滤的方法进行灭菌。培养基中如加入O. 5 1%的琼脂即为静止培养的固体培养基，否则为悬浮培养的液体培养基。不同植物材料常需要改变配方，如维持生长和诱导细胞分裂和分化的培养基配方就不同，因此配方的种类很多，目前以MS (Murashige and Skoog)培养基配方为最常用的一种基本培养基,它利于一般植物组织和细胞的快速生长。丝胶(sericin)是构成蚕丝纤维外层组织的蛋白质。丝胶对包裹在其内部的丝素起着保护和粘接的作用。丝胶具有水溶性，易溶于热水、酸、碱溶液中。组成丝胶的多数氨基酸含有羟基、羧基、氨基等极性较强的侧基，总量占整体的三分之二，其中丝氨酸和天冬氨酸就分别占33%和17%。鱗翅目香蛾科的家香Bombyx mori成苗的丝和大香蛾科Saturniidae某些属的野生大蚕蛾成的茧可以用来制备丝胶。除家蚕外，本专利技术涉及的可以制备丝胶的资源主要有天香(Antheraea yamamai ；giant silkworm ；Japanese oak silkmoth);中国作香(Antheraea pernyi ；tussah ；Chinese oak silkmoth);玻拍香(Antheraea assama ；mugasilkworm)；印度作香(Antheraea proylei )；山香(Antheraea roylei );塔色香(Antheraeamylitta ；Tasar silkworm)；蓖麻香(Samia Cynthia ；eri-silkworm),柳香(Ctiasselene),乌桕大蚕蛾(Attacus atlas),黄目天蚕属(Caligula),透目天蚕属(Rhodinia)等一些吐丝能力较强的絹丝昆虫。
技术实现思路
因此，本专利技术要解决的技术问题就是针对植物培养基中天然有机物质成分复杂，常因品种、产地和成熟等因素而变化，实验的重复性比较差，另外，有些天然有机物质还会因高压灭菌而变性，难于灭菌的问题，从而提供一种可以代替天然添加物的植物培养添加剂及含有该添加剂的植物培养基。经过广泛的研究和反复的试验，本专利技术人发现丝胶蛋白用于植物培养基中能够促进愈伤组织和体外胚生长，提高愈伤组织质量，代替植物培养中的天然添加物，从而完成了本专利技术。本专利技术的技术方案如下一种植物培养基，包括基础培养基和营养添加剂，其特征在于，所述的营养添加剂是O. l-10g/L丝胶蛋白。本专利技术中，所述的基础培养基是各种常规的用于植物组织细胞培养的合成培养 基，这些培养基加入植物生长调节剂、糖、天然营养物质后即可用于植物组织细胞培养。这些培养基都是本专利技术可以采用的基础培养基。较佳的为MS、N6、B5或者NB培养基。本专利技术所述的丝胶蛋白包括家蚕丝胶蛋白、柞蚕丝胶蛋白、蓖麻蚕丝胶蛋白、天蚕丝胶蛋白、琥珀蚕丝胶蛋白、柳蚕丝胶蛋白和乌桕大蚕蛾丝胶蛋白中的一种或多种。丝胶蛋白在培养基中的浓度是O. l-10g/L，优选O. 25-5g/L。本专利技术所述的植物培养基较佳的还包括凝固剂。所述的凝固剂为本领域常规，如琼脂，其浓度为本领域常规。本专利技术的一较佳实例是一种植物培养基，包括基础培养基和O. l-10g/L丝胶蛋白。其中，所述的基础培养基如上所述，较佳的为MS、N6、B5或者NB培养基，最优选N6培养基。本专利技术所述的植物培养基优选液体培养基和半固体培养基。本专利技术所述植物培养基的制备方法是常规方法，将各原料混合后，除菌即可。除菌方法是常规高温灭菌方法或者过滤除菌法。本专利技术还提供丝胶蛋白在制备促进植物愈伤组织形成调节剂中的应用。所述的促进植物愈伤组织形成调节剂优选用于植物培养基中。所述的植物培养基优选愈伤组织诱导培养基。所述的植物包括单子叶植物、双子叶植物中的任何一种，如小麦、水稻、拟南芥、烟草、棉花等，较佳的如水稻。本专利技术所述的培养基适合培养植物细胞、组织或器官，而非动物、非微生物。所述的组织或器官包括愈伤组织或体外胚。所述的细胞包括植物原生质体和体外悬浮培养细胞。本专利技术所用的原料或试剂除特别说明之外，均市售可得。相比于现有技术，本专利技术的有益效果如下本专利技术使用丝胶蛋白促进植物愈伤组织形成和提高愈伤组织质量。传统植物组培培养基中，除了盐分、糖、激素外，一般都需要附加天然成分如水解酪素、椰子汁、马铃薯、豆汁等，由于这些天然混合物成分未知，含糖分过高，容易携带植物内共生菌、容易发霉而且批次之间稳定性很差，有重大风险。本专利技术使用丝胶替代水解酪素、椰子汁、马铃薯、豆汁等天然混合物，极大地降低了成本，提高了细胞培养体系的稳定性，避免了污染，具有重要的应用价值。附图说明以下结合附图说明本专利技术的特征和有益效果。图I含有丝胶的培养基上的愈伤组织生长状况。其中，a、b、c、d采用的培养基分别是 A、B、C、D。具体实施例方式下面用实施例来进一步说明本专利技术，但本专利技术并不受其限制。下述实施例中未注明的具体技术或条件，均为常规技术或条件，或按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。所述的百分号若无特殊说明是指质量百分比。实施例I制备丝胶蛋白溶液 a.将纯度超过92%的丝胶蛋白溶解在水或者PBS缓冲液中，得浓度大于O. 5g/ml丝胶储存液；b.该储存液通过常规高温灭菌方法灭菌或者O. 2 μ m过滤器过滤灭菌后使用。实施例2愈伤组织的诱导实验条件使用水稻品种日本晴做为实验种，采用MS为基础培养基。MS培养基成分见表I :表I. MS培养基基本组成权利要求1.一种植物培养基，包括基础培养基和营养添加剂，其特征在于，所述的营养添加剂是O. I 10g/L丝胶蛋白。2.如权利要求I所述的植物培养基，其特征在于，所述的营养添加剂是O.5 5g/L丝月父蛋白。3.如权利要求I所述的植物培养基，其特征在于，所述的基础培养基是MS、N6、B5或者NB培养基。4.如权利要求I所述的植物培养基，其特征在于，所述的植物本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种植物培养基，包括基础培养基和营养添加剂，其特征在于，所述的营养添加剂是0.1～10g/L丝胶蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：董扬，王文，张叶胜，
申请(专利权)人：董扬，王文，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。