本发明专利技术公开了一种制备美那诺坦的方法，包括以下步骤：1)由Fmoc-L-Val-OH和氨基树脂出发，得到Fmoc-L-Val-氨基树脂；2)将Fmoc-L-Val-氨基树脂采用固相合成方法按美那诺坦的多肽序列顺序逐一偶联得到N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂；3)乙酰化反应生成含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂；4）采用裂解试剂裂解含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂，冰乙醚沉淀得到粗肽；粗肽经过纯化、冻干得到美那诺坦。本发明专利技术采用的制备美那诺坦的工艺方法具有广泛的应用前景和可观的经济实用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于制药
,尤其是涉及一种制备美那诺坦(Afamelanotide)的方法。
技术介绍
研究证实，皮肤被晒黑或皮肤沉积色素可以保护光敏性皮肤病的人群免受日光和紫外线的伤害。黑色素细胞刺激激素(Melanocortin peptide hormone alpha-melanocytestimulating hormone, a-MSH)能够使皮肤的黑素细胞产生黑色素,在光照诱导的晒黑反应过程中起重要作用。 1995年，美国专利US4457864公开了一系列包括美那诺坦在内的-MSH类似物。美 那诺坦分子结构式为乙酰基-L-丝氨酰-L-酪氨酰-L-丝氨酰-L-正亮氨酰-L-谷氨酰-L-组氨酰-D-苯丙氨酰-L精氨酰-L-色氨酰-甘氨酰-L-赖氨酰-L-脯氨酰-缬氨酰胺。美那诺坦是一种人工合成的-MSH类似物,最初由Arizona University研发，已证实可激活皮肤色素沉着，促使皮肤变黑，可缓解各种光线性皮肤病症状。美那诺坦具有较强的日光防护作用，作用强度比天然a-MSH高近1000倍。2010年5月，意大利药物管理局批准美那诺坦用于治疗红细胞生成性原卟啉征导致的光敏性疾病。目前国内还没有关于美那诺坦合成工艺方法的报道；国外关于美那诺坦合成工艺的报道，如PNAS77 (10) : 5754-5758，采用Boc固相合成工艺，操作复杂，收率仅为25%，在合成过程中使用了大量腐蚀性强的三氟乙酸和氢氟酸，不利于工业生产、应用价值不高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一条较适当的固相合成法合成美那诺坦路线，有利于产业化生产，成本低、操作方便、对环境影响小、收率高。为实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案 ，其特征在于，包括以下步骤 1)由Fmoc-L-Val-OH和氨基树脂为起始原料，氨基树脂经脱保护后与Fmoc-L-Val-OH偶联得到Fmoc-L-Val-氨基树脂； 2)将Fmoc-L-Val-氨基树脂采用固相合成方法按美那诺坦的多肽序列逐一偶联得到N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂； 3)N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂经与乙酸酐/吡啶反应生成含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂； 4)裂解含侧链保护基团的美那诺坦氨基树脂，纯化、冻干得到美那诺坦。其中所述氨基树脂选自Sieber树脂、Rink Amide树脂、Rink Amide-MBHA树脂、Rink Amide-BHA树脂和Rink Amide-AM树脂中的任一种，优选为Rink Amide树脂。所述氨基树脂取代度为0. I mmol/g-1. 6 mmol/g，优选氨基树脂取代度为0. 3mmol/g-0. 8 mmol/g。其中，所述的步骤I为Fmoc-L-Val_0H和氨基树脂在偶联剂和有机碱的作用下，在反应溶剂中生成Fmoc-L-Val-氨基树脂；所述的偶联剂包括DIC/HOBt、PyBOP/HOBt、HBTU/HOBt、HATU/HOAt 或 TBTU/HOBt，优选偶联剂为 HBTU/HOBt 或 HATU/HOAt ;所述的有机碱包括TMP、NMM或DIPEA ;所述的反应溶剂包括NMP和/或DMF。其中〃/〃表示〃和〃的含义。实验发现，本专利技术的偶联剂能够明显提高反应速率，同时HBTU/HOBt偶联体系显著的降低生产成本并提高收率。所述步骤3中反应采用等摩尔数的乙酸酐和吡啶作为反应物，乙酸酐和吡啶的摩尔总用量为树脂取代摩尔数的I. 5-100倍，优选为10-30倍。 本专利技术要求保护的方法，所述步骤4中，裂解含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂采用的裂解试剂为TFA/H20、TFA/H20/TIS、TFA/thioanisole/anisole/EDT 或 TFA/thioanisole/H20/phenol/EDT ;优选体积比为 95/5 的 TFA/H20,体积比为 95/2. 5/2. 5的 TFA/H20/TIS,体积比为 90/5/3/2 的 TFA/thioanisole/anisole/EDT,或体积比为 82. 5/5/5/5/2. 5 的 TFA/thioanisole/H20/phenol/EDT。 更具体的，本专利技术所述的制备方法优选包括如下步骤 所述的步骤I为将氨基树脂置于反应器中，经NMP洗涤溶胀后；将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至溶胀的氨基树脂中脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；加入相当于氨基树脂用量I. 5-10倍量的Fmoc-L-Val-0H、l. 5-10倍量的H0Bt、l. 5-10倍量的HBTU，加入体积为足以溶解上述溶质的NMP溶解，完全溶解后加入相当于氨基树脂用量3-20倍量的DIPEA至反应器中反应l_20h，反应结束后量取相当于氨基树脂用量5-100倍量的乙酸酐、相当于氨基树脂用量5-100倍量的吡啶混合于NMP中，加入反应器中反应l-10h，洗涤得Fmoc-Val-氨基树脂。所述的步骤2为将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至Fmoc-L-Val-氨基树脂中进行脱保护反应；加入相当于氨基树脂用量I. 5-10倍量的Fmoc-L-Pro-OHU. 5-10倍量的HOBtU. 5-10倍量的HBTU，加入体积为足以溶解上述溶质的NMP溶解，完全溶解后加入相当于氨基树脂用量3-20倍量的DIPEA混合均匀后加入反应器中反应l_20h ;反应结束后洗涤产物，再按美那诺坦的多肽序列逐个偶联氨基酸，各氨基酸及偶联试剂的用量同上，依次完成 Fmoc-L-Lys (Boc) _0H、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-L-Trp (Boc) -0H> Fmoc-L-Arg (Pbf) -0H>Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-0H> Fmoc-L-Glu(OtBu)-0H> Fmoc-L-Nle_0H、Fmoc-L-Ser (tBu) -0H、Fmoc_L-Tyr (tBu) -0H>Fmoc-L-Ser (tBu) -OH 的偶联,得到 N 端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂。所述的步骤3为将N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂经洗涤后投入反应器，相当于氨基树脂用量5-100倍量的乙酸酐、相当于氨基树脂用量5-100倍量的吡啶混合于等体积的NMP中，加入反应器中反应l-10h，得到含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂。所述的步骤4为向含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂中加入体积比为82. 5/5/5/5/2. 5 的 TFA/thioanisole/H20/phenol/EDT 的裂解试剂，冰浴反应 0. I-Ih 后，室温下继续搅拌反应l-10h，然后抽滤。抽滤后将裂解试剂滤液利用旋转蒸发和/或N2气吹至无TFA溢出，加入3-100倍量的沉淀试剂静置；离心分离沉淀的粗肽，粗肽经纯化、冻干得美那诺坦。该步骤中，对含侧链保护基团的美那诺坦-氨基树脂进行裂解、沉淀得到的粗肽，其沉淀试剂包括乙醚、环己烷、石油醚、乙醚/石油醚(体积比为1:10-10:1)、乙醚/环己烷(体积比为1:10-10:1)，优选乙醚或体积比为1:1的乙醚/石油醚，更优选冰乙醚。本专利技术中本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备美那诺坦的方法，包括以下步骤:1)？由Fmoc？L？Val？OH和氨基树脂为起始原料，氨基树脂经脱保护后与Fmoc？L？Val？OH偶联得到Fmoc？L？Val？氨基树脂；2)？将Fmoc？L？Val？氨基树脂采用固相合成方法按美那诺坦的多肽序列逐一偶联得到N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦？氨基树脂；3)？N端为游离氨基的含侧链保护基团的美那诺坦？氨基树脂经乙酰化反应生成含侧链保护基团的美那诺坦？氨基树脂；4)？裂解含侧链保护基团的美那诺坦？氨基树脂，纯化、冻干得到美那诺坦。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱颐申，周云隆，韦萍，欧阳平凯，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：
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