筛选细胞周期素依赖性激酶5抑制剂的方法技术

筛选细胞周期素依赖性激酶5抑制剂的方法，解决了现有筛选细胞周期素依赖性激酶5抑制剂技术中，荧光法易受干扰，放射法对人体有害、污染环境、成本高的的技术问题，本发明专利技术以十肽Pro-Lys-Thr?-Pro-Lys-Lys-Ala-Lys-Lys-Leu为底物，细胞周期素依赖性激酶5在30-37℃催化底物生成产物磷酸化十肽Pro-Lys-Thr(磷酸化)-Pro-Lys-Lys-Ala-Lys-Lys-Leu，用超高效液相色谱和质谱对产物定量，进一步计算出待测物的抑制率，本发明专利技术的方法准确、快速，可用于评价细胞周期素依赖性激酶5的催化活性及细胞周期素依赖性激酶5抑制剂的筛选。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种筛选细胞周期素依赖性激酶5(cdk5/p25)抑制剂的方法。
技术介绍
阿尔兹海默病(alzheimer’ s disease, AD)是一种进行性神经系统退行性疾病，其主要病理改变为老年斑(senile plaque, SP)和神经元纤维缠结(neurofibrillarytangle, NFT)。后者为高度磷酸化的Tau蛋白聚集而成。细胞周期素依赖性激酶5 (Cyclin-dependent kinase 5, cdk5)与其调节蛋白p25结合后具有生物活性在神经系统中表达丰富，在AD病人Tau的过度磷酸化中发挥重要作用。所以筛选细胞周期素依赖性激酶5的抑制剂对开发新药有着非常重要的意义。 目前用于主要有化学萤光法(chemiluminescent assay)和放身寸法等(Lee V. ; Trojanowski J. Curr. Biol. 1992,2，653-656 ；Evans, D. B. ; Rank Κ. B. ; Sharma S. K. J. Biochem. Biophys. Methods2002，50，151-1本文档来自技高网...

【技术保护点】
筛选细胞周期素依赖性激酶5抑制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)酶促反应缓冲液的配制缓冲液由三氢甲基氨基甲烷盐酸、二硫苏糖醇和氯化镁制成，或由醋酸铵、二硫苏糖醇和氯化镁制成，pH值为6？8；(2)标准品的配制将磷酸化十肽Pro？Lys？Thr(磷酸化)？Pro？Lys？Ala？Lys？Lys？Leu分别配成浓度为156纳摩尔/升、312纳摩尔/升、625纳摩尔/升、1.25微摩尔/升、2.5微摩尔/升、5微摩尔/升、10微摩尔/升、20微摩尔/升的标准品溶液，且每个浓度的标准品溶液均含1微摩尔/升的磷酸化十肽Pro？Lys？Thr(磷酸化)？Pro？Lys？Ala？Lys？Lys？Va...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘淑莹，陈宁，牛俊，杨洪梅，宋凤瑞，刘志强，
申请(专利权)人：中国科学院长春应用化学研究所，
类型：发明
国别省市：