本发明专利技术涉及医药技术领域，具体涉及一种hrEGF修饰的载顺铂高分子纳米粒、制备及其应用。系以聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚赖氨酸（mPEG-PLGA-PLL）为载体，通过超声乳化/溶剂挥发法制得载顺铂纳米粒，然后利用端氨基与重组人表皮生长因子hrEGF连接，得到hrEGF修饰的包载顺铂的mPEG-PLGA-PLL纳米粒。该纳米粒可与肿瘤细胞表面的表皮生长因子受体（EGFR）特异性结合并发生细胞内吞，从而降低顺铂的毒副作用，达到减毒增效的目的。可用于抗肿瘤药物的制备，尤其在卵巢癌的治疗研究中证明，该纳米粒靶向性好，杀伤作用强，在卵巢癌的化疗中具有很好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药技术和纳米医药领域的药品及其制备方法，具体是一种主动靶向性hrEGF修饰的载顺钼高分子纳米粒、制备及其应用。
技术介绍
卵巢癌是妇科肿瘤中恶性程度最高的疾病，居妇科恶性肿瘤死亡率首位，严重威胁着女性的生殖健康。卵巢癌发病隐匿，极易发生侵袭和远处转移，约70% 80%的卵巢癌患者诊断时即属于III/IV期，其五年生存率仅为30%左右。卵巢癌的治疗以彻底的肿瘤减灭术为主，但由于其转移方式多表现为腹腔内散在的广泛种植，故依靠手术彻底切除肿瘤尚不可能，残存的散在肿瘤结节，必须依靠手术后的化疗。最常用的是以钼类为主的一线联合化疗方案。但因化疗药物缺乏选择性且具有毒 性反应，它在杀死肿瘤细胞的同时往往也杀死了正常的细胞，导致患者出现骨髓抑制、肾功能不全、消化道反应、心脏传导障碍等情况，生活质量严重下降，一些患者甚至因化疗引起的感染及出血等并发症而死亡。致使药物利用度有限，使用剂量受限。此外，还有一些年老体弱或有心、肝、肾功能不全的患者无法耐受化疗的毒性反应而不能进行化疗，导致卵巢癌迅速进展而死亡。因此，需要一种有效的靶向给药系统使药物到达肿瘤区。这种系统不仅可以提高药物在肿瘤区的浓度，更有效地杀伤肿瘤细胞，而且可以减小对正常细胞、组织的损害。纳米粒作为靶向性制剂载体已成为国内外研究的热点，通过载药纳米粒载体将治疗药物靶向地导向病灶部位，可以达到精密化给药的目的，而又对非靶组织、器官、细胞的影响很少。近年来的研究发现，将纳米粒与具有特异肿瘤靶向的活性分子或特殊基团相连，可使之具备肿瘤特异靶向功能，从而在很大程度上提高了肿瘤细胞内的药物浓度。已知肿瘤的发生、发展是由细胞信号网络调控的多基因参与的极其复杂的过程，表皮生长因子受体(EGFR)信号通路在正常组织中多呈关闭状态，而在肿瘤组织中被激活开放，而且其活跃程度与肿瘤病情进展呈正相关。段友容等人报道了聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚赖氨酸(简称mPEG-PLGA-PLL)纳米递送系统、制备方法及其应用(CN 200910247576. 7，Liu P. F，Biomaterials, 2012, 33 :4403-4412)为包载活性药物提供了可能。本专利技术人和国内外的许多研究均提示人卵巢癌组织和细胞株中高表达EGFR。本专利技术人利用EGFR的配体EGF修饰载药的纳米粒载体，无疑将使细胞膜表面高表达EGFR的卵巢癌细胞的药物摄取量增加，从而使药物特异性作用于卵巢癌细胞，发挥药效，实现靶向治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有临床中的问题，提供一种hrEGF修饰的载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒，是具有特异性靶向和主动靶向性、EGFR高表达的卵巢癌肿瘤细胞的载顺钼高分子纳米粒，使包裹的顺钼在血液中能长效循环、对卵巢癌组织具有双重靶向性、释药速率可调，以期最大限度的提高疗效、降低其毒副作用。所述的所述的高分子载体是即聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸-聚赖氨酸，简称mPEG-PLGA-PLL ;所述的hrEGF表示人重组表皮生长因子。本专利技术的目的还提供一种上述hrEGF修饰的载顺钼mPEG-PLGA_PLL纳米粒的制备方法。本专利技术的另一目的是提供一种上述hrEGF修饰的载顺钼mPEG-PLGA_PLL纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用，尤其在制备抗卵巢癌药物中的应用。为了达到以上目的，本专利技术的hrEGF修饰的载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒是hrEGF与mPEG-PLGA-PLL纳米粒表面的氨基进行连接，在纳米粒中包裹顺钼药物。所述的高分子载体是 mPEG-PLGA-PLL。本专利技术选择的高分子材料mPEG-PLGA-PLL，具有良好的生物相容性及降解性，安全无毒。本专利技术提供的hrEGF修饰的载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒，粒径在25_500nm ;优选100 200nm之间；所述的纳米粒粒径为多数分散指数HH在0. 25 I之间；再加上EGFR靶向及mPEG化，可以有效减少网状内皮系统(RES)吞噬，延长循环时间，提高药物制剂的靶向性。所述的mPEG化表示连接单甲醚聚乙二醇。本专利技术提供的hrEGF修饰的载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒的制备方法，包括以下步骤(I)采用超声乳化和溶剂挥发法制备载顺钼高分子纳米粒将的mPEG-PLGA-PLL溶解在极性有机溶剂中构成有机相，取顺钼溶液作为水相，将顺钼溶液加入到有机相中，200 400w超声I 5min，乳化均匀形成初乳；将形成的初乳加到含有？ ？ ％重量的乳化剂的水溶液中，再次超声乳化均匀，继而在室温条件下真空旋转蒸发有机溶剂I 40min，使有机溶剂挥发完全，即得载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒的胶体溶液；其中，mPEG-PLGA-PLL、顺钼和乳化剂的体积比为I :0 0. 5 :6 12 ;所述的乳化剂为泊洛沙姆188 (F68)溶液或聚乙烯醇(PVA)。所述的mPEG-PLGA-PLL的浓度为10 25mg/ml ;所述的顺钼的浓度为5 15mg/ml ;所述的极性有机相和水相的体积比为6 12 :1。所述的极性有机溶剂推荐为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，它们的体积比依次为I 3 :1 ;所述的顺钼溶液为顺钼的水和二甲亚砜的溶液，水和二甲亚砜的体积比I 3 :1。所述的初乳和乳化剂水溶液的体积比为I :6 12。所述的乳化剂水溶液为0.5% 2%的泊洛沙姆188 (F68)溶液或0. 1% 3%的聚乙烯醇(PVA)。2) hrEGF修饰载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒的制备在超纯水中，hrEGF溶于500 的18M Q。取一定量的载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒溶液，加入一定量的碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，磁力搅拌下充分活化反应10 30min,,再加入一定量的lmg/ml的hrEGF水溶液,氮气保护下继续磁力搅拌2 4h。然后取以上反应液，加入到超滤管中(MWC03000)，4000 IOOOOrpm下离心5 15min，除去EDC/NHS以及未包裹游离的顺钼；所述的超纯水为10 20MQ的超纯水。 所述的hrEGF、载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒、碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为I :0. oro. 05 :0. 5 5。本专利技术提供的hrEGF修饰的载顺钼高分子纳米粒不仅制备工艺简单，稳定性好，而且可应用于制备抗肿瘤的药物，尤其是制备抗卵巢癌肿瘤的药物。预示着良好的应用前景。附图说明图I为hrEGF修饰的载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒的制备示意图。图2为载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒的粒径分布图。图3为载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒的Zeta电位分布图。图4为载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒透射电镜图。图5为hrEGF修饰的载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒透射电镜图。 图6为载顺钼mPEG-PLGA-PLL纳米粒的释药性能对比图。图7为非靶向(-EGF)和靶向(+EGF) mPEG-PLGA-PLL纳米粒的细胞摄取对比图。图8为不同形式的顺钼及DMSO对卵巢癌细胞SK0V3的细胞毒性研究图。符号说明附图2中 Size Distribution by intensity 表不强度分本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种hrEGF修饰的载顺铂高分子纳米粒，其特征在于所述的高分子载体是聚乙二醇？聚乳酸羟基乙酸？聚赖氨酸，简称mPEG？PLGA？PLL；所述的重组人表皮生长因子hrEGF对载顺铂高分子纳米粒的修饰，是通过与高分子载药纳米粒表面的氨基进行偶联，纳米粒中载有顺铂；所述的纳米粒中高分子载体、hrEGF和顺铂的摩尔比为1：0.01~0.05：0.5~5。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：狄文，段友容，王云飞，刘培峰，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：
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