将核酸进行测序之组合物与方法技术

实施例系关于将核酸进行测序的方法。实施例包括核苷酸类似物与包括校对活性之一核酸聚合酶酶或酶复合物的用途。核苷酸类似物可变成被并入一复制之股并且诱发聚合酶的校对活性，因此延长了与核苷酸并入相关之讯号的持续期间，产生更显著的测序结果并增加核酸测序的正确性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术系关于测定一核酸之序列的方法。此外，本专利技术关于核苷酸类似物与其在一核酸测序中的用途。
技术介绍
已发展出各种技术与程序来获得基因信息，包括在基因密码(genetic codes)中之分离标志的广泛的基因剖析研究或鉴定形态(broad genetic profiling oridentifying pattern)与整个基因体的核苷酸程度之测序。对于在多种应用领域，例如生物技术、鉴识生物学(forensic biology)、诊断(diagnostic)、系统生物学(systematicbiology)、合成生物学(synthetic biology)与个人健康照顾(personal healthcare)中的基础生物学研究而言，DNA序列的知识已变成不可缺少。DNA测序的出现已显著地增进了生物学研究与发现。尽管技术已发展至在核苷酸程度读取一基因序列，但此类方法可为费 时且极度昂贵的。藉由从电泳基础方法转移至芯片基础测序，新世代测序(Next GenerationSequencing)之最新的技术(于 Metzker, M. L.，NATUREREVIEWS GENET本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.02 US 61/350,693;2011.05.27 US 13/117,5651.一种测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，包括步骤 (a)提供一反应复合物，包括，ー模板核酸，其包括一目标核酸序列、一引物核酸，其包括与该模板核酸之一区域互补的ー序列，与一聚合酶酶或ー酶复合物，其包括5’至3’聚合活性与3’至5’外核酸酶活性； (b)使该反应复合物与复数个核苷酸类似物接触，其中该复数个之ー个别的核苷酸类似物包括至少ー碱基配对部分与至少ー标记部分，该标记部分包括一光可侦测标记，其为指出该碱基配对部分的身份； (c)藉由该酶或酶复合物之5’至3’聚合活性，使该酶或酶复合物得以将ー核苷酸类似物以ー模板依赖方式并入一新生股，藉此将该标记部分结合至该新生股； (d)侦测该经并入之核苷酸类似物的该光可侦测标记； (e)藉由该酶或酶复合物之3’至5’外核酸酶活性，使该酶或酶复合物得以从该新生股移除该经并入之核苷酸类似物的该标记部分；以及 (f)重复步骤(c)-(e)以测定该目标核酸序列的序列。2.根据权利要求I所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该光可侦测标记为一突光团。3.根据权利要求2所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该核苷酸类似物还包括至少ー荧光淬熄部分，且其中在该核苷酸类似物藉由该酶或酶复合物之5’至3’聚合活性并入该新生股之时该荧光淬熄部分从该核苷酸类似物被移除。4.根据权利要求I所述的測定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该至少ー碱基配对部分，具有一 5’端与一 3’端,包括一或多个核苷酸残基其各包括ー碱基,该碱基具有在该反应复合物之一反应位置中与该目标核酸序列之一对应碱基碱基配对的能力。5.根据权利要求4所述的測定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该碱基配对部分之3’端为藉由一磷酸连接连结至该标记部分。6.根据权利要求5所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该标记部分包括一光可侦测标记与一可选的连接物其连结该光可侦测标记至该磷酸连接。7.根据权利要求I所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法,其中该标记部分还包括 (a)—或多个非互补核苷酸残基；以及 (b)一可选的连接物连结该光可侦测标记至该一或多个非互补核苷酸残基。8.根据权利要求7所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法,其中该ー或多个非互补核苷酸残基为独立地择自ー无碱基核苷酸残基与包括一碱基之一核苷酸残基，而该碱基实质上缺乏与腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶或尿嘧啶之任一个碱基配对的能力。9.根据权利要求3所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该荧光淬熄部分为附着至一核苷酸类似物的5’端。10.根据权利要求9所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该荧光淬熄部分为藉由一连接物附着至一核苷酸类似物的5’端。11.根据权利要求9所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该核苷酸类似物为ー核苷酸三磷酸盐类似物，其具有一 a磷酸盐、一 3磷酸盐与一 Y磷酸盐，且其中该荧光淬熄部分为附着至在该核苷酸类似物之5’端之三磷酸盐基团的该3或Y磷酸盐。12.根据权利要求4所述的測定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该至少一碱基配对部分包括至少三个磷酸盐基团于其5’端，其中最接近该碱基配对部分(a磷酸盐)的磷酸盐基团为ー硫代磷酸盐。13.根据权利要求4所述的測定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该至少一碱基配对部分包括至少三个磷酸盐基团于其5’端，其中最接近该碱基配对部分(a磷酸盐)的磷酸盐基团为一甲基磷酸盐。14.根据权利要求4所述的測定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该至少一碱基配对部分包括至少三个磷酸盐基团于其5’端，其中最接近该碱基配对部分(a磷酸盐)的磷酸盐基团为ー硼烷磷酸盐。15.根据权利要求I所述的測定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，介于在该反应复合物之活性位置之该核苷酸类似物的结合与从该新生股之标记部分的移除之间的时间长度为从50至250毫秒。16.根据权利要求I所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该方法被执行于，藉由介于两个连续之侦测步骤(d)之间的时间长度为从约0.2秒至I秒的条件下。17.根据权利要求I所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该方法被执行于，藉由介于两个连续之侦测步骤(d)之间的时间长度为从0.2秒至0.6秒的条件下。18.根据权利要求I所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中该方法被执行于，藉由介于两个连续之侦测步骤(d)之间的时间长度为自0.3秒至0.5秒的条件下。19.根据权利要求I所述的測定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法，其中在步骤(f)中重复步骤(c)-(e)以测定该目标核酸的序列包括持续监测与记录在要被依序并入该引物股之核苷酸类似物之该标记部分中的各光可侦测标记的依序并入。20.根据权利要求I所述的测定一目标核酸序列之核苷酸序列的方法,其中各核苷酸类似物包括 (a)于该核苷酸类似物的5’端,ー碱基配对部分包括一或多个核苷酸残基,其各包括ー碱基，该碱基为具有在该反应复合物之一活性位置中与目标核酸序列之一对应碱基碱基配对的能力，以及 (b)于该核苷酸类似物的3’端，ー标记部分视需要而定包括一或多个非互补核苷酸残基，其之各个实质上缺乏与该目标核酸序列之一对应的碱基碱基配对的能力。21.ー种化合物，其具有式(I)O /0 \ O (* ^i I * 1 O 4XR2 /n Y1 A式⑴n > r 或一其药学上可接受之盐类或水合物，其中n 为 1、2、3、4、5、6、7、8 或 9 ；R1与各个R2为择自0_与！~L「Q，其中 (...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱创汎，潘诏智，范振业，张上嘉，傅祖儒，
申请(专利权)人：财团法人工业技术研究院，
类型：发明
国别省市：