血细胞计数用试剂及血液分析方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种可使从生物体采集的毛细血管血中的血小板凝集块解离，从而能高精度地对白细胞等血细胞进行计数的新型血细胞计数用试剂以及血液分析方法。所述血细胞计数用试剂在使用粒子分析仪对从生物体采集的毛细血管血中含有的血细胞进行计数时，用于稀释所采集的毛细血管血以制成血液样品，其特征在于，所述血细胞计数用试剂是含有氯喹盐的水溶液。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种与从生物体采集的毛细血管血混合的血细胞计数用试剂，以及使用粒子分析仪对从生物体采集的毛细血管血中含有的血细胞进行计数的血液分析方法。
技术介绍
通常，作为对血液中的成分进行计数的方法，使用了被称为“流式细胞术”的分析手段的粒子分析仪。 在对血液中的红细胞进行计数时，将采集的血液在生理盐水中稀释制成血液样品，将该血液样品供给粒子分析仪，对具有特定范围的粒子体积(例如，36 360fL (飞升I(T15L)左右)的粒子逐个计数。这时，与红细胞几乎相等体积的白细胞也会同时被计数，通常血液中的白细胞浓度相对于红细胞浓度为0. ro. 2%左右，因此，可忽略由于多余计数的白细胞所产生的误差。相比之下，在对血液中的白细胞进行计数时，将采集的血液在溶血试剂中稀释制成血液样品，将该血液样品供给粒子分析仪后，对具有特定范围的粒子体积(例如，25 450fL左右)的粒子逐个计数。溶血试剂中含有破坏血细胞的细胞膜的成分，由于红细胞没有细胞核，当细胞膜被破坏则血红蛋白流出，红细胞失去了作为细胞的形状和体积而解体。另一方面，由于白细胞具有细胞核，可变成裸核状态的粒子分散于血液样品中。因此，将红细胞已解体的血液样品供给粒子分析仪，对具有特定范围的粒子体积的粒子进行计数，可对白细胞进行计数。血液分析时，作为从生物体采集血液的方法，包括以下两种方法从皮下静脉采集静脉血的方法；以及从指尖或耳垂采集毛细血管血的方法。将静脉血用溶血试剂稀释得到的血液样品在粒子分析仪中进行分析的情况下，如图11的白细胞体积直方图所示，由于血小板或红细胞的解体残渣等引起的噪音(假峰G)和白细胞引起的峰(白细胞峰W)可被清楚地分开，因此，可较高精度地对白细胞进行计数。采集静脉血是将注射针插入皮下静脉，由于是从血管内直接采集血液，因此刚采血后几乎不认为有血小板的凝集。此外，对于静脉血，采集后，通过用配合有作为抗凝剂(抗血小板凝固剂)的乙二胺四乙酸盐的溶血试剂进行稀释，可建立抑制血液样品中血小板凝集的手段(例如，参照下述专利文献I)。专利文献专利文献I特开平3-144364号公报
技术实现思路
然而，在用溶血试剂稀释毛细血管血得到的血液样品经粒子分析仪进行分析的情况下，如图12的白细胞体积直方图所示，假峰G的拖尾部T和白细胞峰W的前伸部R有较大范围的重叠，因此不能高精度地对白细胞进行计数。其原因是，从假峰G的拖尾部T到白细胞峰W的前伸部R的范围内，血小板凝集生成的血小板凝集块被误数(miscount)。毛细血管血的采集如下进行用刺血针浅浅地刺进指尖或耳垂等位置，采集极少量血液，该方法在简单且快速采集血液方面很出色，但由于采集时易混入组织液，因此采集后血小板会迅速凝集。 乙二胺四乙酸盐虽具有抑制血小板凝集的作用，但没有使已凝集的血小板凝集块解离的作用。因此，即使用添加了乙二胺四乙酸盐的溶血试剂稀释采集后血小板快速凝集的毛细血管血，也不能使已凝集的血小板凝集块解离。本专利技术为解决上述技术课题而开发，其目的是提供使从生物体采集的毛细血管血中的血小板凝集块解离，可高精度地对白细胞等血细胞进行计数的新型血细胞计数用试剂以及血液分析方法。本专利技术的血细胞计数用试剂是在使用粒子分析仪对从生物体采集的毛细血管血中含有的血细胞进行计数时，用于稀释所采集的毛细血管血以制成血液样品的血细胞计数用试剂，其特征在于，所述血细胞计数用试剂是含有氯喹盐(chloroquine salt)的水溶液。本专利技术的血细胞计数用试剂是在通过“粒子分析仪”对从生物体采集的“毛细血管血”中含有的白细胞等血细胞进行计数时，将采集的毛细血管血稀释，制成血液样品的试齐U。本文中，“毛细血管血”是指用刺血针刺进指尖或耳垂等位置得到的血液(指尖血或耳垂血)。此外，“粒子分析仪”是指利用使细小的粒子在流体中分散，使该流体薄薄地流动，对各种粒子进行计数的、被称为“流式细胞术”的分析方法的粒子分析仪(流式细胞仪或库尔特计数器)。该粒子分析仪大体分为可通过检测光散射或荧光等的光学检测方法的仪器以及可利用检测粒子通过小孔时阻抗变化的电阻检测方法的仪器，而电阻检测方法具有简便的优点。本专利技术的血细胞计数用试剂中含有的“氯喹盐”是指可使毛细血管血中的血小板凝集块解离，具有喹啉骨架、引入氯原子基团的化合物。特别是，优选在喹啉骨架的7位引入氯原子基团，且在喹啉骨架的4位引入氨基的氯喹啉衍生物的盐。作为该氯喹盐的具体例子，可列举氯喹二磷酸盐(7-氯-4-[4-( 二乙氨基)-1-甲基丁基氨基]喹啉二磷酸盐)或羟氯喹硫酸盐(7-氯-4-[4-N-乙基-N-(2-羟乙基)氨基]-I-甲基丁基氨基喹啉硫酸盐)等。本专利技术的血细胞计数用试剂中，氯喹盐为10g/L以上的方式成为优选的方式。通常的白细胞计数中，实施对从生物体采集的血液用试剂稀释10(T500倍左右的稀释步骤，发现当试剂中含有极少量的氯喹盐时，可以通过实施稀释步骤而使血小板凝集块获得解离。从血小板凝集块解离的观点出发，对氯喹盐配合比例的上限没有特别的限制。但是，氯喹盐的配合比例增高会使试剂的原料价格升高，因此，作为氯喹盐的配合比例，优选100g/L作为上限。本专利技术的血细胞计数用试剂进一步含有具有溶血作用的“表面活性剂”的方式成为优选的方式。作为表面活性剂，在与血液混合时，只要具有在破坏血细胞的细胞膜而使血液中的红细胞解体的同时，使白细胞成为裸核状态的作用，就没有特别的限制。此外，作为表面活性剂，离子表面活性剂和非离子表面活性剂都可以。作为离子表面活性剂，优选为阴离子表面活性剂；更进一步，作为阴离子表面活性剂，优选季铵盐。作为该季铵盐的具体例子，可列举十六烷基三甲基铵或十二烷基三甲基铵等的氯化物或溴化物。另一方面，作为非离子表面活性剂的具体例子，可列举皂苷。此外，本专利技术的血细胞计数用试剂不仅优选单纯地通过配合氯喹盐使血小板凝集块解离，还通过将表面活性剂的浓度限定在特定范围内，使在白细胞体积直方图上的白细胞峰明显。从上述观点出发，本专利技术的血细胞计数用试剂中，前述表面活性剂的含量为l(T50g/L的方式成为优选的方式。如果血细胞计数用试剂中表面活性剂的含量为10g/L以上，在实施所述的用该血细胞计数用试剂稀释步骤时，发现血细胞的细胞膜被破坏而使血液中的红细胞解体的同时，可使白细胞成为裸核状态。另一方面，如果血细胞计数用试剂中表面活性剂的含量超过 50g/L,会使血液样品中的白细胞体积变小。因此，本专利技术的血细胞计数用试剂中,表面活性剂的配合比例优选在l(T50g/L (进一步优选2(T40g/L)的范围内。此外，从同样的观点出发，本专利技术的血细胞计数用试剂中，通过进一步含有“电解质”而将渗透压调节为20(T6000Sm/kg的方式成为优选的方式。作为前述“电解质”，在水中溶解时，只要是具有可电离成阳离子(钠离子、钾离子、钙离子、镁离子等)和阴离子(氯化物离子、溴化物离子、磷酸离子等)的性质的物质，就没有特别的限制。作为电解质的具体例子，可列举氯化钠、溴化钠、氯化钾、溴化钾、氯化钙、溴化钙、氯化镁、溴化镁、磷酸钠、磷酸钾等。本文中，如果血细胞计数用试剂中含有的电解质过少，血细胞计数用试剂的渗透压不到2000sm/kg，会引起白细胞的膨胀、解体。另一方面，如果血细胞计数用试剂中含有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血细胞计数用试剂，所述血细胞计数用试剂在使用粒子分析仪对从生物体采集的毛细血管血中含有的血细胞进行计数时，用于稀释所采集的毛细血管血以制成血液样品，其特征在于，所述血细胞计数用试剂是含有氯喹盐的水溶液。

【技术特征摘要】
2011.05.10 JP 2011-1056111.一种血细胞计数用试剂，所述血细胞计数用试剂在使用粒子分析仪对从生物体采集的毛细血管血中含有的血细胞进行计数时，用于稀释所采集的毛细血管血以制成血液样品，其特征在于，所述血细胞计数用试剂是含有氯喹盐的水溶液。2.如权利要求I所述的血细胞计数用试剂，其中，所述氯喹盐的含量为10g/L以上。3.如权利要求I所述的血细胞计数用试剂，其中，所述血细胞计数用试剂进一步含有具有溶血作用的表面活性剂。4.如权利要求2所述的血细胞计数用试剂，其中，所述血细胞计数用试剂进一步含有具有溶血作用的表面活性剂。5.如权利要求3所述的血细胞计数用试剂，其中，所述表面活性剂为阴离子表面活性剂。6.如权利要求4所述的血细胞计数用试剂，其中，所述表面活性剂为阴离子表面活性剂。7.如权利要求3所述的血细胞计数用试剂，其中，所述表面活性剂的含量为l(T50g/L。8.如权利要求6所述的血细胞计数用试剂，其中，所述表面活性剂的含量为l(T50g/L。9.如权利要求I所述的血细胞计数用试剂，其中，所述血细胞计数用试剂通过进一步含有电解质将渗透压调节为20(T6000sm/kg。10.如权利要求8所述的血细胞计数用试剂，其中，所述血细胞计数用试剂通过进一步含有电解质将渗透压调节为20(T6000sm/kg。11.如权利要求I所述的血细胞计数用试剂，其中，所述血细胞计数用试剂是这样的试剂在将所述血液样品供给所述粒子分析仪时得到的白细胞体积直方图中，使假峰的拖尾部与白细胞峰的前伸部重叠分布的波谷的相对频率的最小值位于粒子体积35飞OfL的范围内。12.如权利要求10所述的血细胞计数用试剂，其中，所述血细胞计数用试剂是这样的试剂在将所述血液样品供给所述粒子分析仪时得到的白细胞体积直方图中，使假峰的拖...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫村和宏，
申请(专利权)人：株式会社堀场制作所，
类型：发明
国别省市：