本发明专利技术属于癌症治疗及诊断领域，涉及肿瘤抗原及其应用，特别涉及IGF2BP3、IQGAP3、KRT23和CLCA2基因或其蛋白以及VGLL1和SNX31基因或其蛋白在制备用于肿瘤诊断的试剂盒中的应用。本发明专利技术还涉及建立新的血清抗体筛选方法PARSE以筛选肿瘤抗原抗体，该方法与ELISA相比具有更高的信噪比。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及癌症治疗及诊断领域，特别涉及KRT81、VGLL1、SLC6A3、SNX31、REG1B、Cllorf63、IGF2BP3、IQGAP3、KRT23、CLCA2、REG3A在制备用于肿瘤诊断和/或治疗的试剂盒中的应用。
技术介绍
恶性肿瘤现已成为威胁人类健康的第一大杀手。近年来，在恶性肿瘤的治疗方面，手术治疗、化疗和放疗都取得了很大的进步，病人的5年生存率也不断提高。但总体而言，目前恶性肿瘤的治疗效果和预后仍然较差。因此，寻找更加有效的治疗途径极为必要。免疫治疗，作为一种新的生物治疗方法，越来越受到人们的关注和重视。现有的免疫治疗方案大致可以分为过继免疫治疗(如细胞过继转移)和主动免疫治疗(即治疗性肿瘤疫苗)两大类。要进行有效的免疫治疗，寻找免疫原性强的肿瘤抗原是关键。传统的鉴定肿瘤抗原的方法有T细胞克隆筛选(见参考文献I) ,SEREx(Seix)IogicalIdentification of antigens by Recombinant cDNA expressing cloning,重组 cDNA 表达文库的血清学分析)(见参考文献2)和抑制性删减杂交(见参考文献3)等，但这些方法普遍存在实验周期长、花费高等缺点。近年来用生物信息学策略筛选肿瘤相关抗原取得进展，缩短了研究的周期。
技术实现思路
本专利技术的目的在于运用生物信息学策略高通量地开发出新的肿瘤相关抗原。为实现本专利技术的目的，本专利技术提供了 IGF2BP3、IQGAP3、KRT23和CLCA2基因作为联合诊断标志物在制备用于肺癌诊断试剂盒中的应用。本专利技术还提供了 IGF2BP3、IQGAP3、KRT23和CLCA2基因编码的蛋白作为联合诊断标志物在制备用于肺癌诊断试剂盒中的应用。本专利技术还提供了一种用于肺癌诊断和/或预后的试剂盒，所述试剂盒含有用于在PCR中合成IGF2BP3、IQGAP3、KRT23和CLCA2基因DNA链和/或其cDNA链的PCR引物。本专利技术还提供了一种用于肺癌诊断和/或预后的试剂盒，所述试剂盒含有IGF2BP3、IQGAP3、KRT23 和 CLCA2 蛋白。本专利技术还提供了 VGLLl和SNX31基因作为联合诊断标志物在制备用于膀胱癌诊断试剂盒中的应用。本专利技术还提供了 VGLLl和SNX31基因编码的蛋白作为联合诊断标志物在制备用于膀胱癌诊断试剂盒中的应用。本专利技术还提供了一种用于膀胱癌诊断和/或预后的试剂盒，所述试剂盒含有用于在PCR中合成VGLLl和SNX31基因DNA链和/或其cDNA链的PCR引物。本专利技术还提供了一种用于膀胱癌诊断和/或预后的试剂盒，所述试剂盒含有VGLLl 和 SNX31 蛋白。本专利技术还提供了一种筛选肿瘤抗原抗体的方法，该方法是PARSE方法和免疫沉淀法的结合。附图说明图Ia显示肿瘤基因在正常组织中限制性表达。图Ib显示肿瘤基因在配对的癌组织中表达上调。图2显示肿瘤基因在25种肿瘤细胞系中的表达情况。图3显示PARSE和IP肿瘤筛选新策略与传统ELISA和蛋白质印记策略对比。图4a显示肿瘤基因在癌症病人血清中能产生自发抗体(PARSE法)，其中阳性血清判断标准>正常人血清CPM值均值+3倍标准差。右下角显示的数值为标准差的倍数< 3为白色，> 3颜色随倍数的增加而变深。 图4b显示肿瘤基因在癌症病人血清中能产生自发抗体(IP法)。图5显示IGF2BP3、IQGAP3、KRT23、CLCA2可作为肺癌的联合诊断标记物。图中文字的描述图Ib =TCC =膀胱移行细胞癌；NSCLC =非小细胞肺癌；GA =胃腺癌；RCC =肾细胞癌'Ck =结肠腺癌。T =肿瘤组织；N =相应的配对正常组织。图4a Anti-His =抗 his ；cancer patent’s sera =癌症患者血清；Normal sera=正常血清。图 4b Non small cell lung carcinoma =非小细胞肺癌；Norma I =正常；Input=内参；Gastriccancer =胃癌；Renal cell carcinoma =肾细胞癌；Transitional cellcarcinoma =移行细胞癌。图5 AUC表示曲线下面积。具体实施例方式本专利技术运用生物信息学策略，根据已知抗原表达谱上的特点开发出一套利用微阵列(MiCToarray)数据库筛选肿瘤相关抗原的算法(见参考文献4)，这一算法是以microarray, EST和SAGE数据库为基础，对其中的基因根据其表达的组织限制性以及在癌和正常组织表达的差异性进行打分，确定其表达的肿瘤特异性。根据该算法，我们得到一批肿瘤相关抗原候选基因，随后在人正常组织库、肿瘤组织库和肿瘤细胞系中对这些基因进行RT-PCR验证，并将鉴定出的肿瘤相关基因的全长或者片段克隆到原核表达载体pET-28a上，表达蛋白，检测在肿瘤病人血清中自发产生抗体的水平，评价其诱导免疫应答的能力。肿瘤基因介绍KRT81 KRT81 (GenBank的登记号为NM_002281)基因编码的蛋白是角蛋白基因家族的成员。作为II型毛发角蛋白，KRT81能与I型角蛋白结合成异物二聚体以形成毛发和指甲。II型毛发角蛋白主要集中在12号染色体长臂2区3带。根据结构的不同又可以将其分成两个亚家族。其中KRTHBl (KRT81)、KRTHB3和KRTHB6属于一个亚家族，KRTHB2、KRTHB4和KRTHB5属于另一个亚家族。所有的毛发角蛋白均在毛发滤泡中表达。KTR81，以及KRTHB3和KRTHB6主要表达在毛发的皮质中。该基因的突变能导致毛发念珠状改变(见参考文献5，6)。VGLLl :在GenBank的登记号为NM_016267。与果蝇的vestigial基因有相似的结构域，能与含有TEA结构域的转录因子结合，作为TEFs的共激活分子发挥作用。在组织结构的发育、器官的发育以及形态形成等生物学过程中发挥功能(见参考文献7)。SLC6A3 SLC6A3 (GenBank的登记号为NM_001044)位于人类5号染色体，由15个外显子组成。其编码的蛋白又称多巴胺转运体。是位于突触的跨膜蛋白，能够将突触间隙的神经递质多巴胺泵入胞浆，从而使信号传递发生终止(见参考文献8)。SLC6A3蛋白参与一系列多巴胺相关疾病的发生，包括注意力不足过动症(见参考文献9)，双相情感障碍(见参考文献10),酒精中毒等(见参考文献11)。SPINK4 SPINK4 (GenBank的登记号为NM_014471)位于人类9号染色体短臂I区3号带中第3号亚带，由4个外显子组成。其编码的蛋白含有一个kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂kazal型家族的一个成员。该家族有4个成员组成，分别是SPINKl、SPINK2、SPINK4和SPINK5。均在上皮和粘膜组织的蛋白降解过程中起保护作用(见参考文献12)。 SNX31 SNX31 (GenBank的登记号为NM_152628)编码的蛋白属于分选微管连接蛋白(sorting nexin)家族。该家族成员众多，目前已发现有33个。这些成员的共同特征是含有PX结构域(与磷酸肌醇结合的结构域)。它们主要参与细胞内的运输(本文档来自技高网...
【技术保护点】
IGF2BP3、IQGAP3、KRT23和CLCA2基因作为联合诊断标志物在制备用于肺癌诊断试剂盒中的应用。
【技术特征摘要】
1.IGF2BP3、IQGAP3、KRT23和CLCA2基因作为联合诊断标志物在制备用于肺癌诊断试剂盒中的应用。2.IGF2BP3、IQGAP3、KRT23和CLCA2基因编码的蛋白作为联合诊断标志物在制备用于肺癌诊断试剂盒中的应用。3.一种用于肺癌诊断和/或预后的试剂盒，所述试剂盒含有用于在PCR中合成IGF2BP3、IQGAP3、KRT23 和 CLCA2 基因 DNA 链和 / 或其 cDNA 链的 PCR 引物。4.一种用于肺癌诊断和/或预后的试剂盒，所述试剂盒含有IGF2BP3、IQGAP3...
【专利技术属性】
技术研发人员：张毓，张君，徐清问，赵伟，王晓松，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：
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