微小RNA用于调控PTEN基因表达制造技术

本发明专利技术公开了一种微小RNA用于调控PTEN基因表达，所述的微小RNA为包含以下序列的核酸或者功能片段或变体:5’-cagugcaaugaugaaagggcau-3’。所述微小RNA为miR-130b。本发明专利技术人采用体外生物学功能实验证实，hsa-miR-130b可与PTEN基因3’-UTR结合，从而抑制PTEN分子表达；可通过调控PTEN信号通路和/或miR-130b表达及功能以发挥抗肿瘤作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和医学
，具体地说，本专利技术涉及基因表达调控
，特别涉及微小RNA用于调控PTEN基因表达。
技术介绍
基因于1997年被发现，是一种具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因(Li J, YenC， Liaw Dj et al. PTENj a putative protein tyrosine phosphatase gene mutatedin human brain, breast, and prostate cancer. Science 1997，275 (5308):1943-7)，通过负性调控PI3K/Akt通路，调节细胞生长和增殖(Wu H，Goel V，Haluska FG. PTENsignaling pathways in melanoma. Oncogene 2003，22 (20) :3113-22)。研究发现，在多种肿瘤中PTEN基因有不同程度的突变或丢失，如结直肠癌、前列腺癌、子宫内膜癌、甲状腺癌及黑色素瘤等。PTEN分子表达缺失与结直肠癌的肝转移以及患者的生存率显著相关 (Sawai H， Yasuda A, Ochi N， et al. Loss of PTEN expression is associated withcolorectal cancer liver metastasis and poor patient survival. BMC Gastroenterol2008,8:56)。因此，调控PI3K/PTEN/AKT信号通路将成为一种潜在的抗肿瘤治疗途径(Zhang Jj Roberts TM， Shivdasani RA. Targeting PI3K signaling as a therapeuticapproach for colorectal cancer. Gastroenterology 2011，141(I) :50_61)o是近年来发现于真核细胞中的一类长约22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA，可通过与靶mRNA的3’ -UTR互补结合在转录后水平使其降解，或者与之不完全互补结合在翻译水平抑制蛋白合成，从而在基因表达中发挥重要的调节作用。越来越多的研究证实，miRNA在肿瘤组织中表达异常，与肿瘤发生发展及患者治疗反应密切相关；如hsa-miR-21在结直肠癌组织中表达上调，与结直肠癌 M分期及患者预后密切相关(SchetterAJj Leung SYj Sohn JJj et al. MicroRNA expression profiles associated withprognosis and therapeutic outcome in colon adenocarcinoma. JAMA 2008， 299(4):425-36)。近期研究还发现，hsa-miR-21能抑制PTEN基因在人肝癌组织中的表达(MengF， Henson Rj Wehbe-Janek H， et al. MicroRNA-21 regulates expression of thePTEN tumor suppressor gene in human hepatocellular cancer. Gastroenterology2007，133(2) :647-58)。这种在肿瘤组织中表达异常的miRNA有的已被证实具有显著的抗肿瘤活性(Thorsen SB，et al. The Therapeutic Potential of MicroRNAs inCancer. Cancer J 2012，18 (3) : 275-84)，如 miR-145 和 miR_33a 能抑制 HCT-116 结直肠癌细胞移植瘤的生长(Ibrahim AF，et al. MicroRNA replacement therapy formiR-145 and miR_33a is efficacious in a model of colon carcinoma. Cancer Res2011,71:5214-5224)。另外，miR-122由于能调控丙型肝炎病毒RNA的丰度，其互补序列用于治疗丙型肝炎病毒感染患者已经进入II期临床试验Janssen HLj ReesinkHWjZeuzem S， et al. A randomized, double-blind, placebo (plb) controlled safetyand anti-viral proof of concept study of miravirsen (MIR), an oligonucleotidetargeting miR-122, in treatment naBve patients with genotype I (gtl) chronicHCV infection. Hepatology. 2011:1430A.,显不出miRNA作为一种极其重要的基因表达调控因子和作用靶标，具有潜在的治疗作用和实际应用价值。虽然本领域中已知某些微小RNA与肿瘤具有一定的相关性，但本领域中已知的miRNA种类繁多，功能各异，要从中筛选出与肿瘤相关且可作为发病、治疗方案的选择及预后的特定miRNA存在较大难度。目前，本领域中尚无miR-130b和PTEN基因相关性的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种微小RNA对PTEN基因表达的调控，特别是miR-130b用于调控PTEN基因表达。本专利技术的目的是通过以下方式实现的一种微小RNA用于调控PTEN基因表达，其特征在于，所述的微小RNA为包含以下序列的核酸或者功能片段或变体 5’ -cagugcaaugaugaaagggcau-3 优选地，所述微小RNA能与PTEN基因3’ -UTR结合，抑制PTEN基因表达。优选地，所述微小RNA为miR_130b。优选地，所述微小RNA通过化学合成得到。优选地，所述微小RNA来自生物体样本，包括组织、细胞和外周血。本专利技术微小RNA的获取来源可以是来自化学合成和/或存在该基因序列的细胞、组织，组织可以选自外周血、体液、腔道的脱落物、病变组织，以及用这些组织制成的石蜡块、石蜡切片。在本文中，术语“样本”指的是潜在可能含有微小RNAmiR_130b的离体循环血样品，优选是来自人的样品。尽管用抽提出血总RNA的纯化样品也能够在本专利技术中使用，但是，本专利技术的样品优选是未经提纯的、含有血总RNA的裂解液体样品。本领域技术人员知晓将固体的有核血细胞裂解或抽提、纯化并保持其中miRNA成分不被降解的细胞分子生物学技术。本专利技术的样品可以是经过处理的样品，如稀释处理、血细胞裂解处理以及PCR扩增等，也可以是未经处理的样品。经过处理的样品可以进一步纯化，以富集miRNA。在本文中，术语“miR_130b”指的是指的是包含序列“cagugcaaugaugaaagggcau”或其同源序列的微小RNA。本领域中已知各种来源的miR-130b，例如人、黑猩猩、马、鸡等，这些同源序列均包含在本专利技术的术语“miR-130b”中。本专利技术的术语中还包含上述天然存在的miR-130b序列中经过取代、缺本文档来自技高网...

【技术保护点】
微小RNA用于调控PTEN基因表达，其特征在于，所述的微小RNA为包含以下序列的核酸或者功能片段或变体:？5’？cagugcaaugaugaaagggcau？3’。

【技术特征摘要】
1.微小RNA用于调控PTEN基因表达，其特征在于，所述的微小RNA为包含以下序列的核酸或者功能片段或变体5’ -cagugcaaugaugaaagggcau-3’。2.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述微小RNA能与PTEN基因3’-UTR结合，抑制P...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪维鹏，陈兰心，朱健洁，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：