本发明专利技术公开了一种微小RNA用于调控CD86的基因表达，所述微小RNA为包含以下序列的核酸或者功能片段或变体:5’-aggcaagaugcuggcauagcu-3’，所述微小RNA能与CD86基因3’-UTR结合，抑制CD86基因表达。本发明专利技术人采用体外生物学功能实验证实，hsa-miR-31可与CD86基因3’-UTR结合，从而抑制CD86分子表达，可通过调控CD86信号通路和/或miR-31表达及功能以发挥抗肿瘤作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术和医学
，具体地说，本专利技术涉及基因表达调控
，特别涉及一种微小RNA用于调控⑶86基因表达。
技术介绍
肿瘤一直严重威胁着人类的健康和生命，传统的治疗方法不尽如人意。免疫治疗通过提高肿瘤的免疫原性，诱导机体产生特异性的抗肿瘤免疫反应，达到治疗肿瘤的目的，是一种变被动为主动的生物治疗方法。由T细胞介导的细胞免疫是抗肿瘤免疫的主要形式，机体通过对肿瘤抗原的特异性识别，激活T细胞，产生相应的免疫杀伤作用。细胞的有效活化不仅需要T细胞与抗原肽-MHC复合物的特异性结合提供第I信号，还需要抗原提呈细胞(APC)表面的共刺激分子与其受体结合提供第2信号。最基本的 共刺激信号是由抗原递呈细胞表达的⑶80 (B7-1)、⑶86 (B7-2)分子与T细胞上表达的相应受体提供。CD86只有与静止型T细胞表面的CD28分子结合后，才能使T细胞活化，刺激T细胞的增殖和分化，诱导CTL反应，在机体抗肿瘤中起着关键作用(David MS, ClaireNM, Zheng Y. What’s the difference between CD80 and CD86. Trends in Immunology,2003，24 (6) :313-318)。如果缺乏这种共刺激信号，T细胞将失能，导致免疫无应答，使肿瘤细胞发生免疫逃逸。分子以单体形式表达于APC表面。未受抗原刺激的APC中几乎不表达⑶86分子，但经活化后其表达显著上调。激活的B细胞、单核细胞、树突状细胞、巨噬细胞和T细胞上均表达高水平⑶86。⑶86还可在静止的单核细胞和B细胞上呈低水平表达。B细胞在激活后24 h内，CD86分子表达至高峰，说明CD86可能在T细胞共刺激早期起关键作用，决定T细胞是激活还是无反应。树突状细胞是目前已知的机体内功能最强的抗原提呈细胞，具有独特的免疫学功能，能在体内外直接激活静息期T细胞，促进T辅助细胞和细胞毒性T细胞(CTL)的生成，在诱导抗肿瘤反应中起关键的调控作用(Jacques B, Ralph MS. Dendriticcells and the control of immunity. Nature, 1998, 392 (6673) : 245-252)。研究发现，结直肠癌组织及区域淋巴结内树突细胞上CD86的表达低于正常组织、癌周组织及炎性组织，正是由于肿瘤组织内CD86的表达下降，使树突细胞不能有效的诱导抗肿瘤免疫。因此，调控树突细胞上CD86表达将成为一种新的抗肿瘤治疗途径，具有潜在应用价值(Le TT, Gardner J, Hoang-Le D. Immunostimulatory cancer chemotherapyusing local ingenoI-3-angelate and synergy with immunotherapies. Vaccine2009，27(23):3053-62)。是近年来发现于真核细胞中的一类长约22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA，可通过与靶mRNA的3’ -UTR互补结合在转录后水平使其降解，或者与之不完全互补结合在翻译水平抑制蛋白合成，从而在基因表达中发挥重要的调节作用。越来越多的研究证实，miRNA在肿瘤组织中表达异常，与肿瘤发生发展及患者治疗反应密切相关；如hsa-miR-21在结直肠癌组织中表达上调，与结直肠癌 M分期及患者预后密切相关(SchetterAJj Leung SYj Sohn JJj et al. MicroRNA expression profiles associated withprognosis and therapeutic outcome in colon adenocarcinoma. JAMA 2008， 299(4):425-36)。这种在肿瘤组织中表达异常的miRNA有的已被证实具有显著的抗肿瘤活性[Thorsen SB, et al. The Therapeutic Potential of MicroRNAs in Cancer. Cancer J2012，18(3) :275-84.，如miR-145和miR_33a能抑制HCT-116结直肠癌细胞移植瘤的生长Ibrahim AF, et al. MicroRNA replacement therapy for miR-145 and miR_33a isefficacious in a model of colon carcinoma. Cancer Res 2011,71:5214-5224.。另夕卜，miR-122由于能调控丙型肝炎病毒RNA的丰度，其互补序列用于治疗丙型肝炎病毒感染患者已经进入 II 期临床试验Janssen HL, ReesinkHW, Zeuzem S，et al. A randomized,double-blind, placebo (plb) controlled safety and anti-viral proof of conceptstudy of miravirsen (MIR), an oligonucleotide targeting miR-122, in treatmentnaBve patients with genotype I (gtl) chronic HCV infection. Hepatology.2011:1430A.，显示出miRNA作为一种极其重要的基因表达调控因子和作用靶标，具有潜 在的治疗作用和实际应用价值。虽然本领域中已知某些微小RNA与肿瘤具有一定的相关性，但本领域中已知的miRNA种类繁多，功能各异，要从中筛选出与肿瘤相关且可作为发病、治疗方案的选择及预后的特定miRNA存在较大难度。目前，本领域中尚无miR-31和⑶86基因相关性的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种微小RNA用于调控CD86基因表达。本专利技术的目的是通过以下方式实现的一种微小RNA用于调控⑶86的基因表达，其特征在于，所述的微小RNA为包含以下序列的核酸或者功能片段或变体5’ -aggcaagaugcuggcauagcu - 3’。优选地，所述微小RNA能与CD86基因3’ -UTR结合，抑制CD86基因表达。 优选地，所述微小RNA为miR-31。优选地，所述微小RNA通过化学合成得到。优选地，所述微小RNA来自生物体样本，包括组织、细胞和外周血。本专利技术微小RNA的获取来源可以是来自化学合成和存在该基因序列的细胞、组织，组织可以选自外周血、体液、腔道的脱落物、病变组织，以及用这些组织制成的石蜡块、石蜡切片。在本文中，术语“样本”指的是潜在可能含有微小RNAmiR-31的离体循环血样品，优选是来自人的样品。尽管用抽提出血总RNA的纯化样品也能够在本专利技术中使用，但是，本专利技术的样品优选是未经提纯的、含有血总RNA的裂解液体样品。本领域技术人员知晓将固体的有核血细胞裂解或抽提、纯化并保持其中miRNA成分不被降解的细胞分子生物学技术。本专利技术的样品可以是经过处理的样品，如稀释处理、血细胞裂解处理以及PCR扩增等，也可以是未经处理的样品。经过处理的样品可以进一步纯化，以富集miR本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种微小RNA用于调控CD86的基因表达，所述微小RNA为包含以下序列的核酸或者功能片段或变体:？5’？？aggcaagaugcuggcauagcu？？？3’。
【技术特征摘要】
1.一种微小RNA用于调控⑶86的基因表达,所述微小RNA为包含以下序列的核酸或者功能片段或变体5’ - aggcaagaugcuggcauagcu - 3’。2.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述微小RNA能与CD86基因3’-UTR结合，抑制⑶...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪维鹏，朱健洁，张学光，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：
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