一种通用多重PCR方法技术

本发明专利技术涉及一种通用多重PCR方法，是通过增加通用接头序列，使引物间退火温度的差异变小，且增加接头后的引物的退火温度(70℃左右)与延伸温度相近，可以合并退火和延伸阶段，缩短PCR时间；并根据引物退火温度从高到低的逐一退火循环，利用两段循环模式提高PCR产物的特异性和产量。本发明专利技术能显著提高多重PCR的通用性，可应用于多个领域，如：种子纯度鉴定、品种真实性鉴定、多态性分析、突变分析、定量分析和物种鉴定等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ー种通用多重PCR方法，具体涉及ー种多重PCR技术的引物设计方法和相应的PCR扩增 程序的建立，尤其是能提高多重PCR的通用性。ニ
技术介绍
多重PCR(Multiplex PCR)是在普通PCR的基础上加以改进的，在ー个PCR反应体系中加入多对特异性引物，针对多个DNA模板或同一个模板的不同区域扩增多个目的片段的PCR技术，这ー概念由Chambercian J. S.等(1988)率先提出。多重PCR具有节省时间、降低成本、提高效率等优点，被提出以后便迅速发展，现已应用于生命科学的多个领域(如多态性分析、突变分析、定量分析和物种鉴定等。)，成为ー项重要的应用技木。传统的多重PCR也具有诸多不足，如复杂的扩增体系、扩增效率低、不同的模板扩增效率不一致、通用性差等。由于在多重PCR反应体系中加入了多对引物，因此增加了引物设计的难度，而且使不同引物的最佳退火温度、延伸时间和循环次数等诸多因素的协调变得困难。传统的多重PCR极易导致非特异性扩增反应的发生，从而导致多重PCR的通用性受到影响。多重PCR的引物设计是ー个关键环节，如果能在引物设计这一关键环节降低非特异性扩增反应本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通用多重PCR方法，其特征在于：先在每对特异性上游引物和下游引物的5’端都分别加上通用PCR接头Universal？adapter？F：5’？CTCGTAGACTGCGTACCA？3’和universal？adapter？R：5’？TACTCAGGACTCATCGTC？3’；再采用两段循环模式PCR扩增程序进行PCR扩增，PCR扩增程序为：①预变性94℃，5min；②第一段循环为“逐一退火循环”，循环数3：变性：94℃，40s；按照未加通用接头前的多对引物的退火温度从高到低的顺序逐一分别退火，每个退火温度的退火时间为20s；延伸：72℃，30s；③第二段循环：循环数：28？32；变性：94...

【技术特征摘要】
1.ー种通用多重PCR方法，其特征在于先在每对特异性上游引物和下游引物的5’端都分别加上通用 PCR接头 Universal adapter-F :5’-CTCGTAGACTGCGTACCA-3’和 universaladapter-R :5’ -TACTCAGGACTCATCGTC-3’ ；再采用两段循环模式PCR扩增程序进行PCR扩増，PCR...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春庆，温大兴，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：