柠条锦鸡儿提取物制备治疗和预防皮肤癣病药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种柠条锦鸡儿提取物制备治疗和预防皮肤癣病药物中的应用,其特征在于：该柠条锦鸡儿提取物是指从豆科蝶形花亚科锦鸡儿属柠条锦鸡儿种的植物种籽中采用常规超临界流体萃取法获得的提取物，其在治疗和预防皮肤癣病药物的各种剂型中至少包含有该柠条锦鸡儿提取物。本发明专利技术中的柠条锦鸡儿提取物是可显著抑制犬小孢子菌、须癣毛癣菌、红色毛癣菌三种常见的皮肤癣菌的活性成分。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及柠条锦鸡儿提取物制备治疗和预防皮肤癣病药物中的应用。
技术介绍
皮肤癣病是指由皮肤癣菌引起的表皮、毛发、甲板等组织的浅表性真菌感染，包括手足癣、体股癣、头癣、甲癣等。皮肤癣病是ー种常见的传染性皮肤疾病，如果不及时治疗，一般会在病损部位扩大，传染给身体的其它部位，甚至传染给其他人。全世界约有1/4的人ロ正遭受此病侵扰。目前市场上治疗皮肤癣病的产品主要有盐酸特比萘芬、酮康唑、硝酸 咪康唑、硝酸益康唑等，多为化学合成类药物、刺激性较大，或毒副作用较大、且易产生耐药性。因此，研制天然的、无毒无刺激的治疗皮肤癣病的药物将具有重要的现实意义及开发潜力。朽1条锦鸡儿 iCaragana Korshinskii Kom.)是豆科(Iegumiimsae')蝶形花亚科(Tabaceae)锦鸡儿属ifaragana)的ー种多年生落叶灌木。由于朽1条锦鸡儿的根系强大、入土深、固沙能力強、抗盐碱、抗旱，因此是青海、甘肃、内蒙等西北地区用于防风固沙、拦泥蓄水、保持水土的优势造林树种。柠条锦鸡儿不仅是ー种被广泛用于水土保持的生态植物资源，而且是一种常见的饲料及药用植物资源。中国专利CN101347180A公开了ー种用柠条生产生物饲料的方法，用该方法生产的柠条饲料具有牛羊增产和改善肉奶品质的功效。公开号CN101810701A的中国专利专利技术了一种以柠条的花和桃花、白果叶等植物配伍的具有滋阴养血、活血降压、消除头痛功效的药茶。又如公开号CN1382463A的中国专利专利技术了ー种以柠条的根和何首乌、罗布麻等植物配伍的用于治疗心脑血管疾病的中药囊剂。然而，将从柠条锦鸡儿的种籽中通过超临界流体萃取法制取得到柠条锦鸡儿提取物作为制备用于预防和治疗皮肤癣病药物中的用途，迄今尚未见有公开报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种柠条锦鸡儿提取物制备治疗和预防皮肤癣病药物中的应用。为解决上述问题，本专利技术所述的柠条锦鸡儿提取物制备治疗和预防皮肤癣病药物中的应用，其特征在于该柠条锦鸡儿提取物是指从豆科蝶形花亚科锦鸡儿属柠条锦鸡儿种的植物种籽中采用常规超临界流体萃取法获得的提取物，其在治疗和预防皮肤癣病药物的各种剂型中至少包含有该柠条锦鸡儿提取物。所述皮肤癣病是指由犬小孢子菌、须癣毛癣菌、红色毛癣菌三种常见的皮肤癣菌中的至少ー种感染而引起的病症。本专利技术与现有技术相比具有以下优点I、本专利技术所述柠条锦鸡儿提取物是ー种纯天然的、植物源的、无毒无刺激的可显著抑制皮肤癣菌的活性成分。2、本专利技术研究发现，本专利技术所述柠条锦鸡儿提取物对由犬小孢子菌、须癣毛癣菌、红色毛癣菌三种常见的皮肤癣菌的抑菌活性比柠条锦鸡儿籽冷榨油的抑菌活性平均高出3倍。3、麦角留醇是真菌细胞膜的重要结构组成成分，一旦麦角留醇缺乏，必将引起真菌细胞膜功能异常，导致真菌细胞破裂。本专利技术研究发现，用本专利技术所述柠条锦鸡儿提取物干预的各种皮肤癣菌(真菌)的细胞膜中，麦角留醇的含量与其生长对照菌相比明显降低，且具有剂量依赖性，由此可知，柠条锦鸡儿提取物是通过影响麦角留醇的生物合成从而达到抑制皮肤癣菌生长的作用。因此，本专利技术所述柠条锦鸡儿提取物作为抗皮肤癣病的活性成分，具有良好的抑制皮肤癣菌的作用，并且其功效显著、作用机理清楚、靶点明确，符合药物制剂开发的要求。下述⑴ ⑶中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述⑴ ⑶中所用材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述⑴ ⑶中所用的本专利技术所述柠条锦鸡儿提取物的具体制取方法为将干燥后的柠条锦鸡儿种籽粉碎称重，然后装料于超临界萃取装置(江苏南通华安超临界萃取有限公司，HA221-50-06型)的萃取釜中，设定超临界的萃取温度为45°C，萃取压カ为25MPa，ニ氧化碳流量为40 kg/h,萃取时间为60min。下述⑴ ⑶中所用的柠条锦鸡儿籽冷搾油的具体制取方法为将干燥后的柠条锦鸡儿种籽粉碎称重，然后装料于全自动螺旋搾油机(河南新象机械有限公司，6YL-90型)，设定榨螺转速为45 r/min，将初榨后的毛油过滤。⑴对犬小孢子菌的抑制活性及作用机制的研究与实验結果。最低抑菌浓度MIC值的測定分别准确称取柠条锦鸡儿提取物和柠条锦鸡儿籽冷榨油，分别用ニ甲基亚砜将其溶解制成储备液。取无菌试管，将储备液用RPMI-1640培养基(Gibco公司)连续倍比稀释至2倍终浓度(4yg/mL)。根据美国临床和实验室标准协会CLSI推荐的《M38-A实验方案，将犬小孢子菌iMicrosporum can is, M. cards, 00287,由北京大学第一附属医》院皮肤科真菌室提供)接种于马铃薯培养基(北京奥博星生物技术有限责任公司)上，于28°C恒温培养(DHP-9162型电热恒温培养箱，上海ー恒科学仪器有限公司)14天后，用无菌盐水制备含有犬小孢子菌的菌丝及孢子的菌悬液。分别取100 μ L终浓度的柠条锦鸡儿提取物和柠条锦鸡儿籽冷榨油的稀释液，由高浓度到低浓度分别加入到无菌96孔细胞培养板的第I孔至第10孔中，并分别加入100 μ L犬小孢子菌悬液，使每ー浓度的受试样稀释液和犬小孢子菌悬液分别被1:1稀释到终浓度。第11孔作为生长对照孔仅加犬小孢子菌悬液100 μ L和培养基100 μし第12孔作为空白对照孔仅加培养基200 μし将接种后的细胞培养板置于28°C恒温培养(ZHWY-100B恒温振荡培养箱，上海智城分析仪器制造有限公司)，培养14天后，根据MIC值的判定标准(O :肉眼清晰；1 :略模糊，80%受抑制；2 :浊度显著降低，50%受抑制；3 :浊度轻度降低；4 :浊度未降低)五个判定点中的I或2作为判定終点，在不搅动的情况下与对照孔对比，可发现柠条锦鸡儿提取物对犬小孢子菌的最低抑菌浓度MIC的范围值为64飞12 μ g/mL ;柠条锦鸡儿籽冷榨油对犬小孢子菌的最低抑菌浓度MIC的范围值为128 1024 μ g/mL。真菌细胞显微形态观察在光学显微镜(XDS3C电脑型倒置生物显微镜，上海万衡精密仪器有限公司)下观察犬小孢子菌干预前后其细胞和菌丝的形态变化，可发现柠条锦鸡儿提取物干预后犬小孢子菌80%受抑制(參见图广2);柠条锦鸡儿籽冷搾油干预后犬小孢子菌50%受抑制(參见图3)。留醇成分变化的检测及活性作用机制研究挑取细胞培养板孔中犬小孢子菌的菌丝，用PBS缓冲液洗涤后精密称取湿菌O. Ig,加入O. I g/mL KOH的甲醇溶液15mL后于80°C水浴皂化90min，再加石油醚15mL进行提取，提取3次后合并提取液，再加入纯水15mL萃取分层，取醚层于60°C水浴挥干，得未皂化酷。将未皂化酯用甲醇溶解定容至10ιΛ，0.45μπι滤膜过滤后采用高效液相色谱法(安捷伦1100型，色谱柱4. 6mmX 150mm, 5 μ m ;柱温30°C ；流动相为色谱甲醇；检测波长为282nm ;流速为I. OmL/min ;进样量为10 μ L)检测犬小孢子菌被干预前后细胞滤液中麦角留醇含量的变化，其结果为犬小孢子菌被干预前细胞中的麦角留醇含量为O. 025μ g/10mL (检测结果见图4);柠条锦鸡儿提取物干预后犬小孢子菌细胞中的麦角甾醇含量为O. 011 μ g/10mL (检测结果见图5);柠条锦本文档来自技高网...

【技术保护点】
柠条锦鸡儿提取物制备治疗和预防皮肤癣病药物中的应用,其特征在于：该柠条锦鸡儿提取物是指从豆科蝶形花亚科锦鸡儿属柠条锦鸡儿种的植物种籽中采用常规超临界流体萃取法获得的提取物，其在治疗和预防皮肤癣病药物的各种剂型中至少包含有该柠条锦鸡儿提取物。

【技术特征摘要】
1.柠条锦鸡儿提取物制备治疗和预防皮肤癣病药物中的应用，其特征在干该柠条锦鸡儿提取物是指从豆科蝶形花亚科锦鸡儿属柠条锦鸡儿种的植物种籽中采用常规超临界流体萃取法获得的提取物，其在治疗和预防皮肤癣病药物的各种剂型中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小艳，索有瑞，王洪伦，强伟，周昌范，尤进茂，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：