用于体内扩增调节性T细胞的方法技术

对TNF-受体超家族成员25(TNFRSF25，DR3)特异性的组合物通过调节调节性T细胞来调整免疫应答。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于体内扩增调节性T细胞的方法关于联邦资助研究的声明本专利技术是在美国政府支持下进行的，以由美国国家癌症研究院(NationalCancerInstitute)所授予的基金号5PO1CA109094-03和由美国国家过敏症和传染病研究所(NationalInstituteofAllergyandInfectiousDiseases)所授予的基金号5RO1AI061807-05。美国政府在本专利技术中享有某些权利。相关申请的交叉引用本专利技术要求2009年8月3号提交的美国临时申请第61/273,299号的优先权，该申请通过引用的方式整体并入本文。专利
本专利技术的实施方案涉及用于体内调节T细胞的组合物和方法。具体地，组合物和方法调节人CD4+FoxP3+细胞。背景肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)由至少19种配体和30种受体(TNFRSF)组成，它们被淋巴细胞和非淋巴细胞差异性地且时间地(temporally)表达。在CD3+T细胞中，TNFSF信号以抗原特异性和非特异性方式起到支持包括极化、扩增(expansion)、效应物功能、收缩、记忆和死亡的免疫应答的各个阶段的作用。TNFSF15(TL1A)是TNFRSF25(DR3，在下文中称作TNFR25)的配体，且通过经由包含死亡域的TNFR25的胞质尾区引发TRADD或FADD信号级联，可正性地或负性地调整表达TNFR25的T细胞和NKT细胞。在包括哮喘、炎性肠病(IBD)、实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)和类风湿性关节炎(RA)的一系列自身炎症性病症中所观察到的病理学中，TNFR25信号转导是主要原因。TL1A的抗体阻断可阻止小鼠的急性哮喘且TNFR25的遗传敲除显著使EAE或RA的实验性模型中的病理学事件迟钝。通过增强NKT细胞、Th2细胞和Th17细胞的极化、分化和效应物功能，TL1A有助于这些疾病的发展。概述提供本概述以呈现本专利技术的概述，以简要地显示本专利技术的性质和主旨。概述的提交应理解为将不用于解释或限制权利要求书的范围或含义。通过CD4+T细胞上组成型表达的TNF-受体超家族成员25(TNFRSF25，DR3)的信号转导增强TH2和TH17细胞因子生成且有助于哮喘、炎性肠病、多发性硬化(MS)、实验性自身免疫性脑脊髓炎和类风湿性关节炎的疾病模型中的病理学炎症。在优选的实施方案中，调整TNFRSF25信号转导的剂调整免疫细胞应答。这些剂为疾病和其病症提供了新的治疗方法。例如，在施用的四天内，TNFRSF25的激动剂引起CD4+FoxP3+细胞快速且广泛地体内扩增至所有CD4+细胞的30-35％。CD4+FoxP3+细胞增加是因为表达高水平的GITR和CD103的CD4+FoxP3+CD25+细胞增殖的增加。TNFRSF25激动剂扩增的CD4+FoxP3+细胞保持依赖于TGF-β的活体外的阻遏活性，然而其易受到连续的TNFRSF25信号转导的消除。除了调整效应细胞应答外，通过控制调节性T细胞的扩增和活性，TNFRSF25信号转导在炎症应答的诱导和消退中发挥着重要的作用。本专利技术的其它方面在下文中描述。附图简述图1A-图1C：显示TNFR25在体内刺激CD4+FoxP3+细胞的快速增殖。图1A：TNFR25、GITR、OX40和4-1BB在常规T细胞和调节性T细胞上的差异表达。通过流式细胞术，确定TNFRSF在来自收获自未处理的FIR小鼠的脾细胞的高度纯化的CD4+FoxP3-(Tconv)和CD4+FoxP3+Treg上的表达。图1B：在注射4C12后，外周血中的CD4+FoxP3+Treg细胞的动力学和剂量依赖性扩增。将纯化的4C12的指示量腹腔内注射(i.p.)给FoxP3-RFP报告子(FIR)小鼠。小鼠每天放血且通过流式细胞术分析外周血细胞中的FoxP3-RFP表达。图1C：在以其它的TNFR激动性抗体处理后，比较Treg扩增。在第0天，将指示的抗体(100μg)腹腔内注射给小鼠。如在图1B中，小鼠每天放血，持续6天，显示在第4天外周血Treg占总CD4+T细胞的百分比。这些数据在8次独立实验中得到了重现。误差条表示平均值±SEM。通过studentt-检验(图1B)或带有Tukey后检验(Tukeyposttest)的单向ANOVA(图1C)确定显著性。*表示p＜0.05，**表示p＜0.01，***表示p＜0.001。图2A-图2F显示TNFR25诱导的Treg扩增需要TCR和IL-2信号转导。通过FACS分选从FIR小鼠高度纯化CD4+细胞且过继性地转移至MHCII-/-或CD4-/-小鼠中。过继转移后，用4C12或同种型对照抗体处理接受体小鼠，且在抗体处理4天后，分析FoxP3-RFP阳性细胞的百分比(图2A)和绝对数目(图2B)。如方法中所描述的，从第-1天至第-4天，通过腹腔内注射，用环孢霉素-A(图2C)或FK506(图2D)或媒介物对照处理FIR小鼠。用4C12抗体或IgG对照抗体处理小鼠且在第4天分析外周血中FoxP3-RFP阳性细胞相对于总CD4+细胞的比例。在用4C12或同种型对照抗体处理4天后，分析IL-2受体β缺陷型小鼠(图2E)或CD80/86-/-小鼠(图2F)的CD4+FoxP3+细胞占总CD4+脾细胞的比例，相比于C57BL/6对照小鼠。这些数据以每次实验每组具有≥3只小鼠的至少2次独立实验的平均值±S.EM.来表示。**表示p＜0.01，***表示p＜0.001。图3A-图3E显示TNFR25扩增的Treg对IL-2高度响应性且需要Akt活化。图3A：在用对照IgG抗体或4C12抗体处理后第4天，从FIR小鼠纯化CD4+FoxP3+细胞且与指示量的IL-2一起体外培养。通过氘化胸苷的掺入，在培养第3天测量CD4+FoxP3+细胞增殖。图3B：如图3A纯化CD4+FoxP3+细胞且通过流式细胞术确定IL-2Rγ(CD132)或IL-2Rβ(CD122)的表面表达。图3C：在用10ng/ml的IL-2体外处理15分钟后，分析纯化自用IgG或4C12抗体处理4天后的FIR小鼠的CD4+FoxP3+细胞的pSTAT5的表达。如方法中所描述的，从第-1天至第-4天，通过腹腔内注射，用雷帕霉素(图3D)每天一次处理FIR小鼠或用Akt抑制剂V(图3E)或媒介物对照每天两次处理FIR小鼠。在第0天，用4C12抗体或对照IgG抗体处理小鼠，且在第-4天分析外周血中FoxP3-RFP阳性细胞相对于总CD4+细胞的比例。这些数据以每次实验每组具有≥2只小鼠的至少2次独立实验的平均值±S.E.M来表示。ns表示没有显著性，***表示p＜0.001。图4A-图4E显示Treg被TNFR25的体内扩增抑制变应性哮喘中的炎症。如在材料和方法中所描述的，通过用卵白蛋白/明矾免疫，接着通过用卵白蛋白/PBS气溶胶攻击(challenge)诱导变应性哮喘。图4A：用4C12或同种型对照抗体处理后，对比于未免疫的小鼠，从卵白蛋白/明矾免疫的小鼠中收集外周血且分析CD4+FoxP3+细胞占总CD4+T细胞的比例。数据表示为平均值±SEM。图4B：收获总的肺细胞且通过流式细胞术分析。显示每个指示的细胞群的总数目。数据表示为平均值±SEM。图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.08.03 US 61/273,2991.TNFR25激动剂在制备用于延迟受治疗者中的移植的同种异体器官的急性排斥的药物中的用途，其中所述药物在所述受治疗者接受所述移植的同种异体器官之前被施用给所述受治疗者以延迟所述移植的同种异体器官的排斥，并且其中所述TNFR25激动剂增加所述受治疗者中的胸腺来源的天然调节性T细胞(nTreg)的频率，并且其中所述TNFR25激动剂是由以专利保藏名称：PTA-10000保藏的杂交瘤产生的抗体4C12。2.如权利要求1所述的用途，其中所述施用是通过注...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃克哈德·R·波达克，泰勒·施赖伯，迪特琳德玛丽亚·沃尔夫，
申请(专利权)人：迈阿密大学，
类型：发明
国别省市：