一种基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物拆分方法技术

本发明专利技术提供一种基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物拆分方法，包括以下步骤：（1）将巯基修饰的核酸适体修饰在纳米金粒子表面；（2）加入待分离的手性化合物，室温孵育后离心，所得上清液即为其中一种构型的手性化合物；（3）将离心管底部的纳米金用二次水重新分散，在95℃下使适体变性并离心，所得上清液为另一种构型的手性化合物。本发明专利技术以核酸适体修饰的纳米金为手性选择试剂，利用适体高选择性和高亲和性的特点，以及在高温下变性，在缓慢恢复到室温又恢复其三级结构的特性，来进行手性化合物的手性拆分；只需简单的离心机，就可以达到分离的目的。此外，由于适体的目标物很广泛，该方法具有很强的通用性，可操作性，实用价值高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物化学领域，更具体涉及ー种基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物拆分方法。
技术介绍
手性对映体的存在是自然界的ー种普遍现象，作为生命活动重要基础的生物大分子，如蛋白质、多糖、核酸和酶等，几乎全是手性的，这些小分子在体内往往具有重要生理功能。手性对映体在吸收、分布、代谢与排泄过程中，通过与体内大分子的不同立体結合，产生不同的药理作用和反应(J. Ruta, C. Ravelet, I. Baussanne, J. L. Decout andE. Peyrin, Analytical Chemistry, 2007， 79， 4716-4719 ；C. Han and H. Li， Small,2008，4，1344-1350.)。因此，手性对映体的分离、分析，对研究生命科学、药物化学以及人类健康都具有十分重要的意义。在药物化学领域尤为突出。在临床治疗方面，服用对映体纯的手性药物不仅可以排除由于无效(不良)对映体所引起的毒副作用，还能减少药剂量 和人体对无效对映体的代谢负担，对药物动力学及剂量有更好的控制，提高药物的专ー性。因而具有十分广阔的市场前景和巨大的经济价值。目前世界上使用的药物总数约为1900种手性药物占50%以上，在临床常用的200种药物中，手性药物多达114种。核酸适体(aptamer)指的是经体外筛选技术SELEX (指数富集配体系统进化)筛选出的能特异结合蛋白质或其他小分子物质的寡聚核苷酸片段。适配体具有目标物范围广，高亲和力，与目标物的结合具有很高的特异性，稳定性高等特点，成为最近出现在手性分离领域的新星，如其做为手性添加剂在毛细管电泳中分离精氨酸(Ruta，J.，et al. Anal.Chem. . , 2006, 78，3032)，以及作为手性固定相在高效液相色谱中分离组氨酸(Ruta,J. , et al. Journal of Chromatography B, 2007, 845, 186)等，但上述方法一般需要复杂的分离仪器和繁琐复杂的制柱技木，而且无法做到较大量的分离。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，本专利技术以核酸适体修饰的纳米金为手性选择试剂，利用适体高选择性和高亲和性的特点，以及在高温下变性，在缓慢恢复到室温又恢复其三级结构的特性，来进行手性化合物的手性拆分；只需简单的离心机，就可以达到分离的目的。此外，由于适体的目标物很广泛，该方法具有很强的通用性，可操作性，实用价值高。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案 包括以下步骤 (1)将巯基修饰的核酸适体修饰在纳米金粒子表面； (2)向步骤(I)的纳米金溶液中加入待分离的手性化合物，室温孵育后离心，所得上清液即为其中一种构型的手性化合物； (3)将离心管底部的纳米金用二次水重新分散，在95°C下使适体变性并离心，所得上清液为另一种构型的手性化合物。所述步骤(I)中的核酸适体为能够特异识别目标化合物中一种异构体的功能核酸。所述步骤(I)中的纳米金的粒径为10-100 nm。所述步骤(2)中的离心速度为3000-10000rpm，离心时间为5-30分钟。本专利技术的有益效果本专利技术利用了适体在高温下变性，在常温下复性的优点，设 计了ー种可以循环利用的手性选择试剂。纳米金粒子大的比表面积保证了最大数量的结合位点，而适体上修饰的巯基可以很容易地与纳米金粒子相结合，在适合的缓冲液中形成三级结构，与目标物作用，通过简单的离心分离，与适体相互作用的一种构型的异构体就会与纳米金粒子一起沉淀，而另ー种构型的纳米粒子还在上清液中。由于适体在高温下变性，与适体相互作用的那种构型的手性目标物就会释放出来，从而达到了手性分离的目的。由于适体在缓慢恢复到室温的时候又恢复了和目标物相互作用的能力，使得此手性选择试剂可以循环利用。该方法改变了原先分离大部分都是用色谱法分离的现状，实现了对目标手性化合物的简单分离，从而简化了分离步骤，扩大了分离范围。同吋，由于该方法可实现在最佳的条件下手性选择试剂的重复利用，因此该方法具有很高的经济价值。附图说明图I是本专利技术的分离过程示意图。具体实施例方式以下实施例结合附图来叙述本专利技术的具体工作原理 本专利技术所述的新型基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物拆分方法原理如图I所示，首先将被分离手性化合物的适配体修饰在纳米金粒子上，之后加入待分离的目标物，在合适的缓冲液中，孵育一定的时间，之后以一定的转速离心，与适配体相互作用的一种构型的目标物随着纳米金粒子一起沉淀，取出上层液体，(此液体为另ー种构型的目标物)，在沉淀中加入二次水，在95°C水中放置5 min,使适配体失活，释放出与适配体相互作用的构型的目标物，此时离心，上层液体即为该构型目标物的水溶液。实施例I 以下以适配体修饰的纳米金粒子分离DL-色氨酸(DL-Trp)为例，来阐述应用本专利技术进行实际样品分离的过程。步骤ー纳米金粒子的修饰 往已活化的修饰了巯基的适配体溶液中加入配制好的粒径为50±8 nm的纳米金胶体溶液，盖上盖子轻轻摇晃，在抽屉中存放16 h以上。随后逐滴加入10 ii I的500 mmol/LTris醋酸盐(pH 8. 2)，再加入100 yl的I mol/L的NaCl并轻轻的用手摇。再放入抽屉中至少I天。将经过上述处理的纳米金进行离心，(5000 r/min, 15 min)。并用I mL的pH为8. 2的Tris醋酸盐缓冲液清洗两次,并离心,转数为5000 r/min,离心时间为15 min。步骤ニ 往修饰好的纳米金中加入50 的由缓冲液配成的DL-色氨酸(I mmol/L)，再加入50U I的水，反应0. 5 h后5000 r/min离心15 min ;取出尽可能多的上清液，此溶液中仅含有不能与核酸适体结合的ー种对映异构体。接下来往离心所得到的纳米金中加入100 u I二次水，然后在95°C的水浴中加热5 min,加热完后进行离心(5000 r/min,离心15 min)。离心后，取出上清液，此溶液中仅含有与核酸适体结合的ー种对映异构体。 以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，凡依本专利技术申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本专利技术的涵盖范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物拆分方法，其特征在于：所述的拆分方法包括以下步骤：（1）将巯基修饰的核酸适体修饰在纳米金粒子表面；（2）向步骤（1）的纳米金溶液中加入待分离的手性化合物，室温孵育后离心，所得上清液即为其中一种构型的手性化合物；（3）将离心管底部的纳米金用二次水重新分散，在95℃下使适体变性并离心，所得上清液为另一种构型的手性化合物。

【技术特征摘要】
1.一种基于核酸适体修饰纳米金的手性化合物拆分方法，其特征在于所述的拆分方法包括以下步骤 (1)将巯基修饰的核酸适体修饰在纳米金粒子表面； (2)向步骤(I)的纳米金溶液中加入待分离的手性化合物，室温孵育后离心，所得上清液即为其中一种构型的手性化合物； (3)将离心管底部的纳米金用二次水重新分散，在95°C下使适体变性并离心，所得上清液为另一种构型的手性化合物。2.根据权利要求I所述的基于核酸适...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国南，黄蓉，郭隆华，邱彬，林振宇，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：