本发明专利技术提供了以Rho激酶(ROCK)抑制剂为特征的新的化合物、发现它们的方法和它们的治疗、研究和诊断用途。尤其是，本发明专利技术提供了具有ROCK抑制活性的1，4-苯并二氮杂-2，5-二酮化合物和相关化合物、使用这种化合物作为治疗剂治疗许多与ROCK活性相关的病症的的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】,4-苯并二氮杂*-2,5-二酮和相关化合物的制作方法，4-苯并二氮杂草-2，5- 二酮和相关化合物相关申请的交叉引用本申请要求待定的美国临时专利申请61/262，010 (2009年11月17日申请)的优先权，本文以引证的方式结合其全部内容。关于联邦资助的研究或研发的陈述 没有。本专利技术的领域本专利技术提供了以选择性的Rho激酶(ROCK)抑制剂为特征的新的化合物、发现它们的方法和它们的治疗、研究和诊断用途。尤其是，本专利技术提供了具有选择性的ROCK抑制活性的I，4-苯并二氮杂罩-2，5-二酮化合物和相关化合物、这种化合物作为治疗许多与ROCK活性相关的病症的治疗剂的使用方法。在1981年发现Ras之后，已经确定了许多相关的小分子GTP结合蛋白(小分子GTP酶)，并且广泛地研究了它们的生理功能。这些小分子GTP酶(分子量20-30kDa)在非活性的GDP结合状态和活性GTP结合状态之间转换，这种过程主要通过鸟嘌呤转换因子(GEFs)和GTP酶激活蛋白(GAP)来高度调节(参见，例如，Hall, A.，Science (1990) 249 635-640 ；Bourne,H. R.等人，Nature (1991) 349 :117-127 ;本文以引证的方式结合每一个的全部内容)。迄今为止，已经从酵母至哺乳动物中确定了 50种以上的编码小分子GTP酶的基因，形成Ras超家族。按照原始氨基酸序列和功能相似性，这些小分子GTP酶主要分为Ras、Rho、Rab、Arf和Ran五个家族。这些当中，Rho (Ras同源物)编码与Ras具有大约35%同源性的多肽(参见，例如，Madaule, P.，Cell (1985)41 :31_40，本文以引证的方式结合其全部内容)。基于原始氨基酸序列、结构基元和生物功能，Rho家族本身可以被分成六个亚族，包括RhoA相关的亚族、Cdc42相关的亚族、Rac相关的亚族以及Rnd、RhoBTB和Miro亚族。已经利用一些方法研究了 Rho的细胞活性，包括Rho的活性GTP结合形式的超表达或显微注射(可以确定Rho活化的表型)。辅助的(second)称赞的方法是用肉毒素(botulinum)C3外酶处理细胞，其特异性地ADP-核糖基化，并且使内源性的Rho失活，由此确定Rho失活的表型(Narumiya, S. J Biochem(1996) 120 :215-228)。因此，已经将 Rho GTP 酶确定为肌动蛋白重构的关键调节剂，并且涉及细胞极性、迁移、细胞形状、粘附性、收缩以及胞吞作用和胞吐作用的调节(参见，例如 Ridley，A.J. ,Trends Cell Biol (2001) 11 :471-477)。涉及肌动蛋白细胞骨架重构的Rho GTP酶的下游靶向包括citron激酶、pl40mDia、蛋白激酶 N(PKN)、p21 激活的蛋白激酶(PAK)、rhophillen 和 rhotekin。Rho 相关的卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)(首先由T. Ishizaki和合作者在20世纪90年代中期分离)是RhoA的第一种和充分表征的效应子，并且最初是通过它们对肌球蛋白轻链的磷酸化的影响，就它们在介导RhoA诱导的紧张纤维和粘着斑的形成中的作用对它们进行表征(Matsui, T.，等人，EMBO J(1996) 15 :2208-2216 ；Leung, T.，等人，Mol. Cell Biol.(1996) 16 :5315-5327)。随后证明了 ROCK在许多关键的细胞功能(例如，细胞运动，侵入，收缩，分化，迁移和存活)中起一定作用(Riento, K. , Ridley, A. , Nature Rev. Mol. CellBiol. (2003)4 :446-456)。ROCK是具有大约160kDa分子质量的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。已经确定了被两种不同基因编码的两种异构型R0CKI (亦称ROKP或pl60R0CK)和ROCKII (或ROK a )。该异构型在它们的激酶域中享有65 %的总体氨基酸序列同一性和92 %序列同一性。ROCK与AGC激酶的成员(例如，萎缩性肌强直激酶(DMPK)，DMPK相关的细胞分裂控制蛋白42(Cdc42)_结合激酶(MRCK)和citron激酶(CK))最具同源性。 通常，此激酶家族由下列组成氨基端激酶域，后面是卷曲螺旋形成域，然后是普列克底物蛋白-同源(PH)域，其具有在羧基端的内部半胱氨酸富集的重复部分。另外，ROCK在它们的卷曲螺旋域内还含有Rho结合域(RBD)。在非活性状态下，羧基端域与氨基端域结合，形成自动抑制环。激活的、GTP结合的Rho与ROCK的RBD结合，导致激酶的开放构象，由此释放催化活性。ROCK还可以被结合PH域的脂质(例如，花生四烯酸和神经鞘氨醇磷酸胆碱)激活。由于半胱天冬酶3可以使ROCKI的自动抑制环断裂，所以，还可以在细胞凋亡期间引发ROCK活性，而粒酶B和半胱天冬酶2以类似的方式断裂R0CKII，所以，这两者都可以导致结构性地活性R0CK。在对Rho的活化剂(例如，溶血磷脂酸(LPA)或鞘胺醇-I磷酸酯(S1P)，其刺激Rho GEF,并且导致活性GTP结合的Rho的形成)的响应过程中，通过各种细胞靶向的磷酸化，ROCK介导与肌动蛋白细胞骨架有关的大量细胞反应。例如，发动(motor)蛋白肌球蛋白II磷酸化在调节肌动球蛋白收缩性方面具有重要的作用。ROCK可以直接磷酸化肌球蛋白轻链(MLC)，这随后导致肌球蛋白-肌动蛋白相互作用，并且提高细胞收缩性。通过肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)的磷酸化(和失活)，ROCK还可以间接地调节MLC磷酸化水平。ROCK的另一个下游祀向是LIM激酶I和2,它的磷酸化可以抑制cofilin介导的肌动蛋白丝分解，并因此增加肌动蛋白丝的数量。ROCK的其它细胞靶向包括埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ERM)蛋白复合物，中间丝蛋白(例如波形蛋白)和丝状(F)肌动蛋白结合蛋白内收蛋白(Riento, K. , Ridley, A. , Nature Rev. Mol. Cell Biol. (2003)4:446-456)。虽然具有类似的激酶域，但R0CK1和R0CK2可以具有不同的细胞功能，并且可以具有不同的下游靶向。例如，已经证明，体外R0CK1可以磷酸化UM激酶I和2，而ROCK 2磷酸化MLC、内收蛋白、平滑肌特异性碱性调宁蛋白(calponin)和崩溃反应介质蛋白-2 (CRMP2)、涉及LPA引发的生长锥崩溃的神经元蛋白(Riento, K. , Ridley, A. , NatureRev. Mol. Cell Biol. (2003)4:446-456)。此外，siRNA 实验已经证明了 ROCKl 和 R0CK2 在大鼠胚胎成纤维细胞中的独特作用，在这种成纤维细胞中，R0CK1对于应力纤维形成和粘着斑部位的稳定性是重要的，而R0CK2活性与基质涂溃的微粒的吞噬作用有关(Yoneda，A.，等人，J. Cell Biol. (2005) 170 :443-453)。还在各种细胞类型中观察到了差异表达和调节。例如，只有R0CK1是在细胞凋亡期间本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·D·格利克，
申请(专利权)人：密执安大学评议会，
类型：发明
国别省市：
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