一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的效力检验方法技术

本发明专利技术提供了鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的血清学效力检验方法，该方法使用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗免疫鸭，免疫2次，首免后2周进行二免，采集二免后3~5周的鸭血清进行ELISA抗体检测，非免疫组ELISA抗体阳性率为0%，免疫组ELISA抗体阳性率为不低于80%判为疫苗效力检验合格。本发明专利技术提供的鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的血清学效力检验方法操作方便，结果准确、可广泛应用于鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的效力评价。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种兽用灭活疫苗的效力检验方法，尤其涉及一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力的检验方法，属兽用生物制品检验

技术介绍
鸭出血性卵巢炎(Duck Hemorrhagic Ovaritis, DH0)是新近流行的、急性、高度接触性的一种新型鸭传染病，其病原为鸭出血性卵巢炎病毒 (Duck Hemorrhagic OvaritisVirus, DH0V),在病毒分类上属于黄病毒科的成员，感染不同日龄鸭，引起性成熟鸭卵巢出血、睾丸萎缩、产蛋量、受精率和孵化率下降，鸭死淘率增加。在病毒分类地位的研究中，通过对分离病毒株的F4代鸭胚传代病毒的基因组序列与已知的病毒进行序列同源性分析和进化分析，发现该病毒与黄病毒科黄病毒属的坦布苏病毒的遗传距离最近。在诊断方面，曹贞贞、万春和、苏敬良、滕巧泱等人报道可以采用临床症状、大体及组织病理变化、RT-PCR扩增和病毒分离等方法确诊该病。关于该病的防控，北京市农林科学院和瑞普(保定)生物药业有限公司、齐鲁动物保健品有限公司、福建省农业科学院畜牧兽医研究所和重庆市农科院畜牧兽医研究所报道了利用该病暴发期间所分离的毒株制备疫苗的方法。林健、刘月焕等报道了利用产蛋鸭成功建立了鸭出血性卵巢炎的人工感染模型，为疫苗的评价奠定了实验基础。尚未见有客观、可行、操作性强和科学的疫苗效力评价方法的详细报道。
技术实现思路
本专利技术目的之一是提供一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力评价鸭的日龄范围。本专利技术目的之二是提供鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力评价用疫苗免疫次数、采样时间、采集的组织样本。本专利技术目的之三是提供一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力评价方法。本专利技术所用病毒毒株命名为鸭出血性卵巢炎病毒HB株，保藏号为CCTCCV201122 ;所述鸭出血性卵巢炎病毒是ssRNA病毒，有囊膜，能够凝集鸽红细胞；病毒颗粒大体呈球状，直径40 60nm ;所述病毒对外界环境的抵抗力较强，在4°C中存放几周，在-20°C中存放几个月，其感染力均不受影响；所述病毒对乙醚、氯仿敏感；大多数去污剂能将它迅速灭活；在371条件下，用0. I %福尔马林熏蒸6h便可把它灭活。该病毒可在9 13日龄鸭胚尿囊腔、胚绒毛尿囊膜，9 10日龄鸡胚尿囊腔、胚绒毛尿囊膜，6日龄鸡胚卵黄囊，7 8日龄鸭胚卵黄囊中培养，也可在鸭胚成纤维细胞和BHK21细胞上培养。本专利技术所用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的制备方法已于2011年申报专利技术专利，申请号为 201110255115. I。本专利技术提供一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力检验方法，该方法使用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗免疫鸭，共免疫2次，首免后2周进行二免，采集二免后3飞周的鸭血清进行ELISA抗体检测，非免疫对照组鸭ELISA抗体阳性率为0%，ELISA抗体阳性率为不低于80%判为疫苗效力检验合格。进一步地，本专利技术方法根据易感性实验结果，确定鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力检验用鸭的日龄为42飞60日龄。进一步地，本专利技术方法中2次免疫的剂量为0. 5ml/只 2ml/只。进一步地，本专利技术提供的一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力检验方法是使用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗免疫42 560日龄鸭，首免后2周进行二免，采集二免后3飞周的鸭血清，使用ELISA抗体检测试剂盒检测免疫鸭血清，进行效力评价。进一步地，上述ELISA抗体检测是以纯化的黄病毒科病毒为包被抗原的ELISA检测试剂盒。进一步地，所述的鸭为肉用鸭、蛋用鸭或SPF鸭。 本专利技术提供的一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力检验方法，具体是使用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗免疫42 560日龄鸭，同时设一定数量的非免疫对照组鸭；首免后2周进行二免，两次免疫的剂量均为0. 5ml/只 2ml/只，采集二免后3飞周的鸭血清，使用ELISA抗体检测试剂盒检测免疫鸭血清，进行效力评价，非免疫对照组鸭ELISA抗体阳性率为0%，免疫组鸭ELISA抗体阳性率> 80%，判定疫苗效力检验合格。进一步地，上述ELISA抗体检测试剂盒是以纯化的黄病毒科病毒为包被抗原的ELISA检测试剂盒。进一步地，所述的鸭为肉用鸭、蛋用鸭或SPF鸭。本专利技术首次提出了用于鸭出血性卵巢炎灭活疫苗血清学效力检验使用鸭的日龄、 疫苗效力检验时疫苗的免疫次数、取材时间、采集的组织样本，提出了血清学ELISA疫苗效力检验方法、判定标准及疫苗质量合格的标准。解决了鸭出血性卵巢炎灭活疫苗血清学效力评价方法和判定标准的空白。本专利技术确定的方法客观、全面、操作性强，可用于鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的实验室和临床效力评价。具体实施例方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的生物、化学试剂均为常规市售，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例中所用的北京鸭购自鸭出血性卵巢炎抗体阴性鸭场(北京金星鸭业中心南口种鸭场)，麻鸭购自鸭出血性卵巢炎抗体阴性鸭场(北京延庆县四海镇珍珠泉下花楼村)，SPF鸭由购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心的SPF鸭蛋孵化，SPF鸡隔离器中饲养至试验所需日龄。易感鸭的检验标准5只来自未经鸭出血性卵巢炎灭活疫苗免疫或有鸭出血性卵巢炎流行史鸭群的鸭，每只鸭口服I. 0毫升无菌0. 5%水解乳蛋白Hank’ s液100倍稀释的检验用毒株。攻毒后4-5日，采血，分离血清进行病毒分离。病毒分离率应至少4/5阳性，判断检验用鸭为易感鸭。实施例I鸭出血性卵巢炎灭活疫苗(ELISA抗体测定法)效力检验用鸭的日龄、免疫剂量、采样时间(I)使用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗(批号201101，北京市农林科学院畜牧兽医研究所和瑞普(保定)生物药业有限公司研制)免疫560日龄且未感染DHOV的麻鸭10只，0. 5ml/只，胸部肌肉注射。首免后2周按照相同剂量和相同途径进行二免，采集二次免疫后4周鸭的血清，使用附注的ELISA抗体检测方法检测免疫鸭血清，非免疫对照组鸭ELISA抗体阳性率为0%，免疫组鸭ELISA抗体阳性率为80%，说明疫苗效力检验合格。实施例2鸭出血性卵巢炎灭活疫苗(ELISA抗体测定法)效力检验用鸭的日龄、免疫剂量、采样时间(2)使用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗(批号201102，北京市农林科学院畜牧兽医研究所和瑞普(保定)生物药业有限公司研制)免疫42日龄且未感染DHOV的北京鸭10只，Iml/只，胸部肌肉注射。首免后2周按照相同剂量和相同途径二免，采集二次免疫后4周鸭的血 清，使用附注的ELISA抗体检测方法检测免疫鸭血清，非免疫对照组鸭ELISA抗体阳性率为0%，免疫组鸭ELISA抗体阳性率为90%，说明疫苗效力检验合格。实施例3鸭出血性卵巢炎灭活疫苗(ELISA抗体测定法)效力检验用鸭的日龄、免疫剂量、采样时间(3)使用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗(批号201103，北京市农林科学院畜牧兽医研究所和瑞普(保定)生物药业有限公司研制)免疫180日龄且未感染DHOV的北京鸭10只，2ml/只，胸部肌肉注射。首免后2周按照相同剂量和相同途径二免，采集二次免疫后4周鸭的血清，使用附注的ELISA抗体检测方法检测免疫鸭血清，非免疫对照组鸭ELISA抗体阳性率本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗效力检验方法，其特征在于，使用鸭出血性卵巢炎灭活疫苗免疫鸭，免疫2次，首免后2周进行二免，采集二免后3~5周的鸭血清进行ELISA抗体检测，非免疫组ELISA抗体阳性率为0%，免疫组ELISA抗体阳性率为不低于80%判为疫苗效力检验合格。

【技术特征摘要】
1.ー种鸭出血性卵巣炎灭活疫苗效カ检验方法，其特征在于，使用鸭出血性卵巣炎灭活疫苗免疫鸭，免疫2次，首免后2周进行ニ免，采集ニ免后3飞周的鸭血清进行ELISA抗体检测，非免疫组ELISA抗体阳性率为0%，免疫组ELISA抗体阳性率为不低于80%判为疫苗效カ检验合格。2.如权利要求I所述的方法，其特征在干，效カ检验用鸭的日龄为42 560日龄。3.如权利要求I所 述的方法，其特征在于，所述2次免疫的剂量为0.5ml/只 2ml/只。4.如权利要求1-3任一所述鸭出血性卵巣炎灭活疫苗效カ检验方法，其特征在于所用的ELISA抗体检测是以纯化的黄病毒科病毒为包被抗原的ELISA检测试剂盒。5.如权利要求1-3任一所述鸭出血性卵巣炎...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘月焕，杨保收，韩春华，何平有，林健，郁宏伟，朱秀同，刘浩，毛雅园，徐倩倩，赵际成，段会娟，潘洁，梁武，
申请(专利权)人：北京市农林科学院畜牧兽医研究所，瑞普保定生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：