用高极性流动相检测含顺反异构的类胡萝卜素含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种用高极性流动相检测含顺反异构类胡萝卜素含量的方法。本方法包括以下步骤：a.色谱柱选用：反相酰胺色谱柱；b.甲醇乙腈混合溶液作为色谱流动相，甲醇乙腈混合溶液中甲醇的体积百分比含量可以为0至50%之间；c.所用检测条件为：柱温采用室温，流速控制在0.2～0.6mL/min，检测波长440～490nm，进样体积为5～20μL；d.采用乙腈溶解样品。本发明专利技术的检测分析方法能同时检测分析出番茄红素和γ-胡萝卜素顺反异构体的相对含量，摒弃了传统分析方法中使用二氯甲烷等低极性有机溶剂作为流动相，从而避免低极性流动相对色谱仪和色谱柱的腐蚀和堵塞。本发明专利技术的检测分析方法分辨率和灵敏度高、简单易行，且对色谱仪要求低，单泵系统即可完成检测分析，适用性广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品分析与检测领域，涉及。该方法采用高效液相色谱法高灵敏度简单测定类胡萝卜素含量。可以同时测定三种主要类胡萝卜素番茄红素、Y-胡萝卜素、β-胡萝卜素的含量以及番茄红素、Y-胡萝卜素中顺反异构体的相对含量。
技术介绍
高效液相色谱法(HPLC)因其检测的有效性和准确性而被广泛应用于类胡萝卜素含量的测定。通常情况下，类胡萝卜素的测定都用到了 C18反相色谱柱为分离柱，用到了二 氯甲烷作为流动相。二氯甲烷极性很低，在反相色谱柱中残留量大，对C18反相色谱柱损害大，严重缩短了色谱柱的使用寿命。高效液相色谱仪中的塑料材质的接头和垫圈也会受到二氯甲烷的腐蚀。这些不利因素使得以C18反相色谱柱为分离柱以二氯甲烷为流动相的色谱法来检测类胡萝卜素的含量受到了很大的限制。因此，用一种不以二氯甲烷为流动相的色谱法来取代当前通用的C18柱为反相色谱柱以二氯甲烷为流动相的色谱法，对从事类胡萝卜素生产的科研单位和企业都具有重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种。该方法在测定层面上客观真实的反映出番茄红素、Y-胡萝卜素、β_胡萝卜素的含量，同时也测定出番茄红素和Y-胡萝卜素中顺反异构体的相对含量，方法简单、测定准确、重现性好。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为，其特征在于，所述方法包括以下步骤a.采用反相酰胺色谱柱；b.以甲醇乙腈混合溶液作为色谱流动相，甲醇乙腈混合溶液中甲醇的体积百分比含量可以为O至50%之间；c.所用条件为柱温室温；流速0· 2 O. 6mL/min ;检测波长440 490nm ;进样体积5 20 μ L ;d.采用乙腈溶解样品。作为上述技术方案的改进，所述的反相酰胺色谱柱为AscentisRP-Amide规格为1SOmmX 2. Imm, 5 μ m 或 Halo RP-Amide 规格为 1 SOmmX 3. Omm, 2. 7 μ m。与现有技术相比，本专利技术具有的优点和效果如下I.本专利技术的检测分析方法分辨率、灵敏度高、重现性好、简单易行。2.本专利技术不用二氯甲烷为流动相，避免了二氯甲烷对色谱仪和色谱柱的腐蚀和堵塞，延长了色谱柱的使用寿命。3.有效的检测出番茄红素和Y-胡萝卜素中顺反异构体的相对含量。传统C18柱检测分析方法，不能检测出番茄红素和Y-胡萝卜素的顺反异构体。4.对色谱仪要求低，单泵系统即可完成检测分析，适用性广。附图说明图I是传统的C18色谱柱检测分析色谱图；图2是实施例I的Ascentis RP-Amide色谱柱检测分析色谱图；图3是实施例2的Ascentis RP-Amide色谱柱检测分析色谱图；图4是实施例3的Ascentis RP-Amide色谱柱检测分析色谱图；图5是实施例4的Halo RP-Amide色谱柱检测分析色谱图；图6是实施例5的Halo RP-Amide色谱柱检测分析色谱图；图7是实施例6的Halo RP-Amide色谱柱检测分析色谱图。具体实施例方式图I是传统的C18色谱柱HPLC检测分析得到的色谱图，该检测分析方法的仪器与条件为a.高效液相色谱仪Agilent 1100 ；b.色谱柱Agilent Zorbax SB-C18(250mmX4. 6mm, 5 μ m) ；c.流动相:二氯甲烧乙腈(3:7);流速lmL/min ;检测波长472nm ；柱温室温；进样体积5μ L)。该方法不能检测分析出番茄红素和Y -胡萝卜素的顺反异构体。图2，图3，图4，图5，图6，图7是本专利技术提供的HPLC检测分析方法得到的色谱图。本专利技术的检测方法能检测分析出番茄红素和Y -胡萝卜素的顺反异构体。图1，图2，图3，图4，图5，图6，图7是对同一种类胡萝卜素样品检测分析，采用不同的高效液相分析方法得到的HPLC色谱图。为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并 不用于限定本专利技术。实施例I仪器与条件高效液相色谱仪=Agilent 1200 ；色谱柱Ascentis(RP-Amide, 15cmX 2. lmm, 5 μ m);流动相乙腈；流速0.2mL/min ；检测波长490nm；柱温室温；进样体积10 μ L。对待测的混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，所得到的色谱图如图2所示。实施例2仪器与条件高效液相色谱仪=Agilent 1200 ；色谱柱Ascentis(RP-Amide, 15cmX 2. lmm, 5 μ m);流动相乙腈；流速0.4mL/min ； 检测波长480nm；柱温室温；进样体积10 μ L。对待测的混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，所得到的色谱图如图3所示。实施例3仪器与条件高效液相色谱仪=Agilent 1200 ；色谱柱Ascentis(RP-Amide, 15cmX 2. lmm, 5 μ m);流动相乙腈；流速0.6mL/min ；检测波长460nm；柱温室温；进样体积10 μ L。对待测的混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，所得到的色谱图如图4所示。实施例4仪器与条件高效液相色谱仪=Agilent 1200 ；色谱柱Halo(RP-Amide, 1 SOmmX 3. Omm, 2· 7 μ m)；流动相甲醇乙腈混合溶液(甲醇的体积百分比含量为10%)；流速0.4mL/min ；检测波长470nm；柱温室温；进样体积10 μ L。对待测的混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，所得到的色谱图如图5所示。实施例5仪器与条件高效液相色谱仪=Agilent 1200 ；色谱柱Halo(RP-Amide, 1 SOmmX 3. Omm, 2· 7 μ m)；流动相甲醇乙腈混合溶液(甲醇的体积百分比含量为20%)；流速0.4mL/min ；检测波长450nm；柱温室温；进样体积5yL。对待测的混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，所得到的色谱图如图6所示。实施例6仪器与条件高效液相色谱仪=Agilent 1200 ；色谱柱Halo(RP-Amide, 1 SOmmX 3. Omm, 2· 7 μ m)； 流动相甲醇乙腈混合溶液(甲醇的体积百分比含量为50%)；流速0.3mL/min ；检测波长440nm；柱温室温；进样体积20 μ L。对待测的混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，所得到的色谱图如图7所示。本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测含顺反异构的类胡萝卜素含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a.采用反相酰胺色谱柱；b.以甲醇乙腈混合溶液作为色谱流动相，甲醇乙腈混合溶液中甲醇的体积百分比含量可以为0至50%之间；c.所用条件为：柱温：室温；流速：0.2～0.6mL/min；检测波长440～490nm；进样体积5～20μL；d.采用乙腈溶解样品。

【技术特征摘要】
1.一种检测含顺反异构的类胡萝卜素含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤 a.采用反相酰胺色谱柱； b.以甲醇こ腈混合溶液作为色谱流动相，甲醇こ腈混合溶液中甲醇的体积百分比含量可以为O至50%之间； c.所用条件为柱温室温；流速0.2 0. 6mL/min ;检测波长440 490nm ...

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙江，王红波，鲁明波，何谧，何峰，
申请(专利权)人：华中科技大学，湖北广济药业股份有限公司，湖北普信工业微生物应用技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：