枯草芽孢杆菌Bs-916草酸盐脱羧酶基因序列及其应用制造技术

一种枯草芽孢杆菌Bs-916草酸盐脱羧酶氨基酸序列，所述氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。枯草芽孢杆菌Bs-916草酸盐脱羧酶基因序列的表达，首先构建含枯草芽孢杆菌Bs-916草酸盐脱羧酶基因的质粒PET28a-Baci，然后将PET28a-Baci转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行诱导表达；最后进行蛋白纯化。本发明专利技术分离获得了枯草芽孢杆菌Bs-916草酸盐脱羧酶基因序列，并构建了其表达技术体系，表达得到草酸盐脱羧酶，揭示了该酶活性的最佳酶活性，对水稻纹枯病、油菜菌核病等病害有较好的防治效果，是植物病害防治主要的基因资源。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌BS-916草酸盐脱羧酶基因序列及其应用。
技术介绍
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是ー类好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，是分布在土壌、植物表面和根际的重要微生物种类，能产生一系列代谢产物抑制其它微生物的生长，具有防治植物病害的作用。目前在全世界保存的野生型枯草芽孢杆菌菌株有几百种，研究证实枯草芽孢杆菌能够产生40多种具有不同结构和功能的抗菌物质。枯草芽孢杆菌能产生多种对植物病原真菌具有抑制活性的物质，主要为低分子量的多肽类抗生素和ー些高分子量的蛋白类抗菌物质。申请者实验室前期从枯草芽孢杆菌Bs-916中分离到分子量约为45KDa的抑菌活性蛋白Bacisubin (ZL200610097847. 1)，该蛋白对核盘菌 (Sclerotinia sclerotiorum)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)等病菌生长具有明显的抑制作用。利用Q-TOF质谱检测到Bacisubin多个肽段，初步鉴定其为草酸脱羧酶。草酸是多种植物病原真菌重要的致病因子，如核盘菌(Sclerotiniascler本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种枯草芽孢杆菌Bs？916草酸盐脱羧酶基因序列，其特征在于：所述基因序列如SEQ？ID？NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌BS-916草酸盐脱羧酶基因序列，其特征在于所述基因序列如SEQ ID NO: I 所示。2.一种枯草芽孢杆菌Bs-916草酸盐脱羧酶氨基酸序列，其特征在于所述氨基酸序列如 SEQ ID NO:2 所示。3.一种枯草芽孢杆菌Bs-916草酸盐脱羧酶基因序列的表达，其特征在于包括如下步 骤 (1)、构建含枯草芽孢杆菌Bs-916草酸盐脱羧酶基因的质粒PET28a-Baci:利用引物对扩增枯草芽孢杆菌Bs-916草酸盐脱羧酶基因，在5’端加上GGATCC以构成BamH I识别位点，3’端加上CTCGAG以构成Xho I识别位点，将该开放阅读框片段克隆至大肠杆菌表达载体PET-28a(+)相应的酶切位点中构成质粒PET28a-Baci ； 所用引物对为BaciF: aaaGGATCCATGTCAAAAGAAAATAACTGCAATATCC ；BaciR: aaaCTCGAGTCAGCATTTCTTTTTGACGACAGGGTGT ； (2)、将PET28a-Baci转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行诱导表达将PET28a-Baci 转化至大肠杆菌 BL21 (DE3) pLysS 中，将含有 PET28a_Baci 的 BL21 (DE3) pLysS菌株于LB液体培养基中，120rpm，摇培12小时，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘永锋，于俊杰，陈志谊，聂亚锋，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：