多血清型口蹄疫病毒3C基因特异性siRNA筛选与应用制造技术

多血清型口蹄疫病毒3C基因特异性siRNA筛选与应用属口蹄疫生物防治技术领域，目标是提供的一组能特异性抑制O型、A型和Asia?I型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA，其序列为siRNA1-3C、siRNA2-3C、siRNA3-3C以及A型和Asia?I型口蹄疫病毒基因组中对应的序列；设计与筛选方法是人工合成参考毒株3C基因部分片段、构建表达EGFP-3C融合基因的真核表达载体、真核表达载体与siRNA共转染HEK293T细胞、荧光显微镜观察检测EGFP荧光及实时定量RT-PCR检测EGFP-3C基因mRNA表达来筛选和验证siRNA对3C基因表达的抑制效果。本发明专利技术可快速筛选出抑制多血清型口蹄疫病毒的广谱高效siRNA，也可通过质粒载体表达或通过体外转录的方法制备目标siRNA；本发明专利技术可应用于抗多血清型口蹄疫病毒治疗药物制备和抗口蹄疫转基因动物培育。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属ロ蹄疫生物防治
，具体涉及针对多血清型(O型、A型和Asia I型)ロ蹄疫病毒3C基因保守区分析，及可靶向特异性抑制三种血清型ロ蹄疫病毒3C基因表达的siRNA筛选及验证。
技术介绍
ロ蹄疫(Foot and mouth disease, FMD)是由 ロ 蹄疫病毒(Foot and mouthdisease virus, FMDV)引起的一种致偶蹄动物急性、热性、高度接触性传染病，国际兽医局(OIE)将其列为A类传染病之首，该病宿主广泛，其中对猪、牛等家养偶蹄动物危害最为严重。FMD在世界范围内多次发生大流行，屡次重创世界畜牧经济，因此素有“政治经济病”之称。世界各国在预FMD流行中投入了大量人力、物力，建立了包括动物捕杀，疫苗接种及流 行病学监测等预防手段在内一套严密的防控体系，但目前仍无法有效控制FMD的发生与流行，其根本原因在于FMDV血清型、血清亚型众多(七种血清型及65种以上的血清亚型)，各血清型/亚型间交叉免疫原性差，无法提供有效的保护力。另外FMDV属于小RNA病毒，其基因组突变率高，病毒流行株更迭迅速，可快速摆脱疫苗株抗体的抑制。因此研制出具有广本文档来自技高网...

【技术保护点】
一组能特异性抑制O型、A型和Asia？I型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA，其特征在于以口蹄疫基因组3C基因为干扰靶点，其序列分别为siRNA1？3C、siRNA2？3C、siRNA3？3C以及A型和Asia？I型口蹄疫病毒基因组中对应的靶序列。

【技术特征摘要】
1.一组能特异性抑制O型、A型和Asia I型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA，其特征在于以口蹄疫基因组3C基因为干扰靶点，其序列分别为siRNAl-3C、siRNA2-3C、siRNA3-3C以及A型和Asia I型口蹄疫病毒基因组中对应的靶序列。2.根据权利要求I所述的一组能特异性抑制O型、A型和AsiaI型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA，其设计与筛选方法包括下列步骤 1)比对分析所有O型、A型和AsiaI型口蹄疫病毒分离株3C基因核苷酸序列，找出三种血清型3C基因序列的保守区，在此区域内设计...

【专利技术属性】
技术研发人员：张立春，赵玉民，金海国，曹阳，于永生，闫晓刚，王晓阳，朴庆林，吕礼良，刘晓辉，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：