本发明专利技术公开一种叶瓜参多糖A及其在制备防治糖尿病药物中的应用。自叶瓜参得到的叶瓜参多糖A由D-木糖、L-奎诺糖、D-葡萄糖和3-甲基-O-D-葡萄糖所组成。对蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B具有显著的抑制活性，可用于制备防治糖尿病的药物及保健功能食品，为新的防治糖尿病的药物及保健功能食品的研制开发提供了重要的参考信息，对开发利用新的海洋药用生物资源具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药
，是叶瓜参多糖A在制备防治糖尿病药物及保健功能食品中的应用。
技术介绍
糖尿病是一种由遗传、免疫、毒素和精神等因素作用于机体导致胰岛功能减退和胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质。脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合症。研究开发高效的抗糖尿病新药是 目前医药保健中迫切需要解决的课题。叶瓜参(Cucumariafrondosa Gunnerus)属棘皮动物门(Echinodermata)海参纲(Holothurcidea)枝手目(Dendrochirotida)瓜参科(Cucumariidae)海洋动物。一般体长50mm左右，体呈圆筒状，体色棕色或黑色，体壁较厚，角质且坚硬，触手5个。该物种广泛分布于俄罗斯、加拿大、挪威和英国，我国的南方海域亦有分布。此外从格陵兰到马萨诸塞的西大西洋水域也有分布。国外学者曾对该种海参中的多糖类成分有过研究(JohnA. Findlay, Hurettin Yayli. J. Natural Products. 1992，55 (I) : 93-101),但未见有关该多糖类提取物具有抗糖尿病活性的报导。
技术实现思路
在上述研究结果的基础上，本申请的专利技术人进一步对从叶瓜参中所获得的多糖类提取物的活性进行了深入的研究。本专利技术首先提供一种叶瓜参多糖A，所述叶瓜参多糖A由D-木糖、L-奎诺糖、D-葡萄糖和3-甲基-O-D-葡萄糖所组成。进一步优选地，所述叶瓜参多糖A中D-木糖、L-奎诺糖、D-葡萄糖和3-0-甲基-D-葡萄糖的克分子比为2:1:1: I。更具体地，本专利技术所述的叶瓜参多糖A通过下述方法制备①将叶瓜参干品粉碎至20目，以体积百分含量为60%的乙醇充分提取，提取液减压回收乙醇后得流浸膏；②将步骤①获得的流浸膏均匀分散在蒸馏水中，用正丁醇萃取51次，每次所用正丁醇体积与水相体积比为1:2 ;③水相加入其5倍体积量的95%乙醇，离心得到沉淀，并使丙酮洗涤脱水后，将沉淀用蒸馏水溶解，冷冻干燥，得叶瓜参多糖提取物粗品；④将步骤③所得的叶瓜参多糖提取物粗品溶解于蒸馏水中，先使用分子量5000的超滤膜超滤，滤液再经分子量3000的超滤膜超滤，上层截留液经冷冻干燥，得分子量3000-5000的叶瓜参多糖A。本专利技术另一方面提供本专利技术的叶瓜参多糖A在制备防治糖尿病药物中的应用。再一方面，本专利技术的叶瓜参多糖A也可以用于制备具有抗糖尿病功能的保健品，尤其是保健食品。本专利技术所提供的关于叶瓜参多糖A对蛋白酪氨酸磷酸酶PTPlB具有显著的抑制活性，可用于制备防治糖尿病的药物及保健功能食品，为新的防治糖尿病的药物及保健功能食品的研制开发提供了重要的参考信息，对开发利用新的海洋药用生物资源具有重要意义。具体实施例方式以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。下面结合实施例，对本专利技术作详细描述，但保护范围不局限于实施例。如无特殊说明，本专利技术中用作标准品的D-木糖购自上海恒信化学试剂有限公司，L-奎诺糖和3-0-甲基-D-葡萄糖购自瑞士 FLUKA公司，D-葡萄糖购自美国SUPELC0公司。实施例I I、叶瓜参多糖提取物的制备和鉴定将叶瓜参(Cucumaria frondosa Gunnerus)干品700克、粉碎至20目，用体积百分含量为60%的乙醇加热回流提取7次，减压回收乙醇提取液得流浸膏。将流浸膏均匀分散在200毫升蒸馏水中，用正丁醇萃取6次，每次100毫升；向水层中加入5倍体积量的95%乙醇，离心得沉淀，并用丙酮洗涤脱水后，将沉淀用20毫升蒸馏水溶解，冷冻干燥，得叶瓜参多糖提取物粗品15. 2克，该粗品为黄色粉末。将上述叶瓜参多糖提取物粗品溶解于100毫升蒸馏水中，采用分子量5000的超滤膜超滤，通过液再经分子量3000的超滤膜超滤，截留液冷冻干燥，得分子量3000-5000的叶瓜参多糖A 3. 7克。所得的叶瓜参多糖A为白色粉末。2、叶瓜参多糖提取物的组成鉴定①叶瓜参多糖A酸水解取实施例I制备的叶瓜参多糖A 10mg，溶于2M三氟乙酸2ml中，置2ml安瓿中，充氮气，封管，于烘箱中120°C加热反应2h后，40°C减压蒸干，加甲醇Iml后减压抽干以除去三氟乙酸，重复3次，残渣以二氯甲烷/水为5ml/5ml分配，水层再以5ml 二氯甲烷洗涤I次，取水层水浴上蒸干，得叶瓜参多糖A的酸水解物；②酸水解物的硅胶薄层色谱分析a.试剂本专利技术所使用的高效薄层层析板购自烟台芝罘黄务硅胶开发试验厂。b.展开剂的配制氯仿甲醇水=30 12 4 (体积比，下同)混合后在分液漏斗静置分层，待澄清后取下层澄清液，以下层澄清液乙酸=9 :1作为展开剂。c.显色剂的配制邻苯二甲酸I. 6g溶于水饱和的正丁醇IOOml中，加苯胺0. 93g。d.硅胶薄层色谱将步骤①所得的叶瓜参多糖A的酸水解物用水配制成浓度为5mg/ml的溶液，用高效薄层层析板按常规进行硅胶薄层色谱，展开后用苯胺-邻苯二甲酸显色剂喷雾，于105°C加热10分钟显色。e.结果硅胶薄层色谱显示的斑点全为棕色斑点，分别与标准品D-木糖、L-奎诺糖、D-葡萄糖和3-0-甲基-D-葡萄糖的Rf值一致，表明叶瓜参多糖提取物中含有上述4种糖。③叶瓜参多糖A样品的酸水解产物的气相-质谱鉴定a.试剂本专利技术以D-木糖、L-查诺糖、D-匍萄糖和3_0_甲基-D-匍萄糖为标准品。b.制备标准糖糖腈乙酸酯衍生物取上述标准品糖各IOmg分别与IOmg盐酸羟胺均匀混合，加入0. 5ml吡啶，90°C水浴加热30分钟并振荡，生成糖肟。反应物冷却至室温,加入0. 5ml乙酸酐，90° C水浴加热30分钟进行乙酰化，即生成各标准糖糖腈乙酸酯衍生物溶液，将溶液减压浓缩至原体积的1/3，即可用于气相-质谱分析。 c.制备叶瓜参多糖A的酸水解物糖腈乙酸酯衍生物将步骤①所得的叶瓜参多糖A的酸水解物IOmg与IOmg盐酸羟胺均匀混合，加入0. 5ml吡啶，90° C水浴加热30分钟，生成糖肟。反应物冷却至室温，加入0. 5ml乙酸酐，90° C水浴加热30分钟，生成叶瓜参多糖A酸水解物糖腈乙酸酯衍生物溶液。将溶液减压浓缩至原体积的1/3，即可用于GC-MS分析。d.糖腈乙酸酯衍生物的气相-质谱分析条件检测仪器美国Finnigan Voyager气相色谱_质谱联用仪检测条件色谱柱 HP-5石英毛细管色谱柱(30 mxQ.25 mm, 0.25 pm)柱温 150 0C (保持2分钟)-300 0C (保持10分钟)升温速度 15 °C/分钟汽化温度 250 °C进样量 I^il载气(流量)氦气(1.0 ml/分钟) 分流比 30: I质谱检测器EI电离源、电离电压70 eV、源温200 0C质谱标准库NIST库e.气相-质谱分析结果叶瓜参多糖A的酸水解物气相-质谱分析显示与上述4种标准糖的气相-质谱分析有相同的吸收峰，表明叶瓜参多糖A由上述4种糖所组成。从峰面积推算糖的克分子比为；D-木糖L-奎诺糖D-葡萄糖3-0-甲基-D-葡萄糖=2:1:1: I。实施例2.叶瓜参多糖提取物的活性检测蛋白酪氨酸磷酸酶PTPlB试验PTP1B是第一个被鉴定的蛋白酪氨酸磷酸酯酶(protein tyrosine phosphatase),通过本文档来自技高网...
【技术保护点】
叶瓜参多糖A，其特征在于所述的叶瓜参多糖A由D？木糖、L？奎诺糖、D？葡萄糖和3？甲基？O？D？葡萄糖所组成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邵俊杰，焦健，易杨华，
申请(专利权)人：大连海晏堂生物有限公司，
类型：发明
国别省市：
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