本发明专利技术公开了鹅免疫球蛋白编码区及其恒定区特异性单克隆抗体与应用。本发明专利技术提供的鹅免疫球蛋白编码区包含λ链的全部编码区序列，重链的可变区、D片段和J片段编码序列、α链的恒定区编码序列以及μ链、υ链恒定区的部分编码序列。本发明专利技术的免疫球蛋白恒定区可用于制备抗鹅免疫球蛋白λ链、μ链、α链、υ链恒定区抗体，还可用于鉴别与抗鹅免疫球蛋白单克隆抗体结合的鹅免疫球蛋白的类和型。本发明专利技术还提供了一种采用Protein?A亲和层析方法纯化的鹅血清免疫球蛋白作为免疫原制备抗鹅免疫球蛋白单克隆抗体的方法及由该方法得到的单克隆抗体及分泌该抗体的杂交瘤细胞株。本发明专利技术的抗鹅免疫球蛋白恒定区抗体能够用于检测或纯化鹅免疫球蛋白。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及鹅免疫球蛋白编码区及其单克隆抗体和应用，特别涉及鹅免疫球蛋白λ链、α链、μ链、U链恒定区及其单克隆抗体，以及所述单克隆抗体在制备检测或纯化鹅免疫球蛋白试剂中的应用。本专利技术属于生物
技术介绍
我国是世界养禽大国，更是世界主要鹅类养殖地和消费国，鹅类养殖业的持续、稳定、健康发展不仅直接关系到我国新农村建设中畜牧业的健康稳定发展，而且关系到人们的生活方式和健康水平。免疫球蛋白IgM、IgG和IgA是体液免疫的重要效应分子，其含量的变化可以作为 检验机体免疫状况和感染情况的指标之一。IgM、IgG分别是感染早期和机体抗感染的重要抗体类型，血清中抗体水平的测定可作为免疫或感染的重要指征。IgA是黏膜免疫的主要因子，其水平的测定可作为黏膜免疫的重要指征。抗免疫球蛋白抗体，包括多克隆抗体和单克隆抗体，可用于检测机体内免疫球蛋白的含量，进而作为疾病诊断与免疫防治的重要工具。王君伟等(2006，CN1817005A)用无水硫酸钠和Sephadex G-200纯化的鸭卵黄免疫球蛋白作为免疫原，制得兔抗鸭IgY+IgY(AFc) (H+L)多克隆抗体，经辣根过氧化物酶标记后用于检测鸭机体受到刺激后所产生的特异性抗体，并应用于鸭类疾病的检测。王君伟等(2006，CN1818651)用无水硫酸钠和Sephadex G-200纯化的鹅卵黄免疫球蛋白作为免疫原，制得兔抗鹅IgY+IgY( Λ Fe) (H+L)多克隆抗体，经辣根过氧化物酶标记后用于检测鹅机体受到刺激后所产生的特异性抗体,并应用于鹅类疾病的检测。但多克隆抗体主要来源于动物免疫血清，是多种不同抗原表位特异性抗体的混合，特异性不高，常出现交叉反应，其应用受到一定的限制。McAb具有高度的特异性，已被广泛应用于人类和动物医学方面生物活性物质的鉴定和纯化、病原微生物的鉴定、特定抗原成分的定位功能分析以及疾病的快速诊断和动物免疫水平检测，可与标记物直接偶联制备的单克隆二抗，直接用于临床检测，并有利于实际操作技术的标准化和简便化。抗免疫球蛋白单克隆抗体的研究在人疾病的诊断及应用方面比较系统成熟，哺乳类动物在此方面的研究相对比较成熟，而禽类在此方面的研究相对比较滞后。Van Zaane，D等(1987年)制备和鉴定了针对猪不同免疫球蛋白类和型的单抗，所制备的单抗已成功用于检测猪各种病毒所产生同种型的抗体；赵莉(2006年)用原核表达的鸡IgMy链蛋白作为免疫原，采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠，四免后进行融合，采用真核表达的鸡、猪、牛IgMy链蛋白来筛选单克隆抗体，制备出与鸡、猪、牛IgMy链有交叉反应性的抗鸡IgMy链单克隆抗体；张红等(2008年)用真核表达的带有信号肽的鸡IgA轻链作为免疫原，制备出抗鸡IgX轻链单克隆抗体；王文强等(2010年)以新鲜的鸡胆汁为材料，采用硫酸铵盐析法从鸡胆汁中粗提纯鸡SIgA，SDS-PAGE纯化的SIgA重链为抗原，制备抗SIgA重链的免疫球蛋白；KothloW，S等(2005年)制备了一系列与鸭白细胞表面抗原反应的单克隆抗体，包括一株与鸭免疫球蛋白轻链反应的单克隆抗体，并用制备的单克隆抗体建立了 B型鸭肝炎病毒的替代感染模型；KothloW，S等(2011年)用抗鸭免疫球蛋白轻链单克隆抗体建立了一种检测水禽NDV的免疫学方法，而有关抗鹅免疫球蛋白单克隆抗体的研究国内外尚未见报道。制备抗免疫球蛋白的单克隆抗体，抗原多用但不仅限于从血清、卵黄等原料中纯化出天然的免疫球蛋白。常见的免疫球蛋白纯化方法为先将原料利用盐析法初步提取，得到粗提物后再经非亲合层析的方法进行纯化。贺云霞等(2005年)采用三氯甲烷去脂、无水Na2SO4盐析、DEAE23纤维素层析相结合的方法纯化鹅卵黄IgY，SDS-PAGE检测表明，所得的鹅卵黄IgG纯度可达93% ;贾晓伟等(2010年)以新鲜的鹅血为原料通过饱和硫酸铵盐析的方法对鹅血清中的IgG进行分离提取，得到IgG粗提物，然后经过s印hadexG-50凝胶层析和DEAE-52阴离子交换层析等纯化方法，将制备的IgG进一步纯化，得到纯度95%以上的IgG ;浙江大学(2010，CN101899110A)专利技术了一种从鹅血中分离免疫球蛋白IgY(AFc)的方法，先制备出脱脂血浆，辛酸沉淀，然后用填充有混合模式吸附剂的层析柱分离上清液，最 后脱盐和干燥，得到纯度大于95%的免疫球蛋白IgY(AFc) ;D.A. Higgins等(1994年)采用Protein A和Protein G亲和层析的方法纯化鸭血清免疫球蛋白，得出Protein A的纯化效果优于Protein G，但均不如哺乳动物理想，并推测亲和层析的结合原理可能和其特定的氨基酸组成有关，目前未见有亲和层析的方法应用于鹅免疫球蛋白的纯化的研究。抗免疫球蛋白单克隆抗体的鉴定，可用天然免疫球蛋白或外源表达的免疫球蛋白片段进行。免疫球蛋白基因的克隆和应用，人和小鼠的研究比较完善，而鸟纲类的研究报道相对较少。Reynaud，C A和Dahan，A等(1983年)从脾cDNA文库中分别筛选出编码鸡λ型轻链免疫球蛋白和μ型重链免疫球蛋白恒定区的cDNA全序列；Parvari，R等(1988年)从脾cDNA文库中筛选出编码鸡u型重链免疫球蛋白的cDNA全序列；Magor，K E等于1994年克隆得出编码鸭轻链和u链免疫球蛋白的编码序列又于1998年克隆得出编码鸭免疫球蛋白α链和μ链的编码序列。目前有关鹅免疫球蛋白基因方面的研究报道除了吕雪峰(2011,CN 102161993Α)采用RACE方法扩增出整条鹅轻链IgX基因外，国内外尚未见其它相关报道，这也给开展鹅基础免疫方面的研究工作带来一定的困难。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供鹅免疫球蛋白λ链的前导区、可变区、J片段和恒定区，重链的可变区、D片段和J片段，μ链、α链、U链的恒定区氨基酸序列及其编码核苷酸序列；本专利技术的目的之二在于提供所述的鹅免疫球蛋白λ链的前导区、可变区、J片段和恒定区，重链的可变区、D片段和J片段，μ链、α链、U链的恒定区在制备检测抗鹅免疫球蛋白抗体试剂中的应用；本专利技术的目的之三在于提供免疫球蛋白λ链、μ链、α链、υ链恒定区在制备检测抗鹅免疫球蛋白抗体试剂中的应用，及在制备抗鹅免疫球蛋白或鹅免疫球蛋白λ链、μ链、α链、U链恒定区抗体中的应用及其在鉴别与抗鹅免疫球蛋白单克隆抗体所结合的鹅免疫球蛋白的类和型中的应用。本专利技术的目的之四在于提供一种利用本专利技术的鹅免疫球蛋白λ链、μ链、α链、u链恒定区制备抗鹅免疫球蛋白恒定区的单克隆抗体的方法。本专利技术的目的之五在于提供一种由本专利技术方法制备得到的抗鹅免疫球蛋白恒定区的单克隆抗体，及分泌该抗体的杂交瘤细胞株。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的本专利技术的鹅免疫球蛋白编码区，其特征在于所述的鹅免疫球蛋白编码区为鹅免疫球蛋白λ链的前导区、鹅免疫球蛋白λ链可变区、鹅免疫球蛋白λ链J片段、鹅免疫球蛋白λ链恒定区、鹅免疫球蛋白重链可变区、鹅免疫球蛋白重链D片段、鹅免疫球蛋白重链J片段、鹅免疫球蛋白α链恒定区 、鹅免疫球蛋白μ链恒定区或鹅免疫球蛋白υ链恒定区。其中，所述的鹅免疫球蛋白λ链前导区具有如SEQ ID NO. I所示的氨基酸序列；本文档来自技高网...
【技术保护点】
鹅免疫球蛋白编码区，其特征在于所述的鹅免疫球蛋白编码区为鹅免疫球蛋白λ链的前导区、可变区、J片段和恒定区、鹅免疫球蛋白重链的可变区、D片段和J片段、鹅免疫球蛋白α链的恒定区、鹅免疫球蛋白μ链的恒定区或鹅免疫球蛋白υ链的恒定区；其中，所述的鹅免疫球蛋白λ链的前导区具有如SEQ？ID？NO.1所示的氨基酸序列；其中，所述的鹅免疫球蛋白λ链的可变区具有如SEQ？ID？NO.2所示的氨基酸序列；其中，所述的鹅免疫球蛋白λ链的J片段具有如SEQ？ID？NO.3所示的氨基酸序列；其中，所述的鹅免疫球蛋白λ链的恒定区具有如SEQ？ID？NO.4所示的氨基酸序列；其中，所述的鹅免疫球蛋白重链的可变区具有如SEQ？ID？NO.5所示的氨基酸序列；其中，所述的鹅免疫球蛋白重链的D片段具有如SEQ？ID？NO.6所示的氨基酸序列；其中，所述的鹅免疫球蛋白重链的J片段具有如SEQ？ID？NO.7所示的氨基酸序列；其中，所述的鹅免疫球蛋白α链的恒定区具有如SEQ？ID？NO.8所示的氨基酸序列；其中，所述的鹅免疫球蛋白μ链的恒定区具有如SEQ？ID？NO.9所示的氨基酸序列；其中，所述的鹅免疫球蛋白υ链的恒定区具有如SEQ？ID？NO.10所示的氨基酸序列。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王君伟，郭永丽，高明春，马波，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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