一种保存磁小体的溶液及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种保存磁小体的溶液及其应用，属于生物材料应用领域。本发明专利技术提供的保存磁小体的溶液为磷酸盐缓冲溶液（PBS），本发明专利技术溶液在保存磁小体过程中对其结构和功能的影响和干扰最小，将保存的磁小体连接得到的BMPs-PEI/DNA复合物可达到更高的PEI、核酸固定和连接效率，用其转染Hela、Hep-G2、Cos-7和C2C12细胞效率分别高于常规方法保存的磁小体的转染细胞效率。本发明专利技术提供的BMPs保存溶液对于更高效、更长期地保存BMPs，并使其更大范围地发挥应用价值具有非常实际的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物材料应用领域，具体地，涉及一种保存磁小体的溶液及其应用。
技术介绍
磁小体(BMPs, Bacterial Magnetic Particles)是趋磁性细菌合成、分泌的一种新颖的超顺磁性纳米颗粒，主要由Fe3O4构成，且外部具有类细胞膜的脂膜包被。作为一种真正意义的生物矿化合成材料，自被发现以来，BMPs由于在基因治疗方面表现出的巨大潜力，正受到越来越多研究人员的青睐。BMPs的成分纯、形态独特且细小均匀，通过多聚物连接核酸以后构成的基因传递复合物既可以在体外水平进行细胞转染以提高转染效率并降低转染毒性，又可以在体内运送药物或核酸进行癌症治疗或者基因治疗，目前已有研究证 明，BMPs可以直接固定治疗肿瘤的药物阿霉素在体内发挥作用。更重要的是，BMPs直接或间接(通过其他媒介)与核酸、药物、蛋白质、酶或抗体连接后，在外界磁场的作用下，连接而成的复合物可向器官或组织定向、高效传递药物，提高治疗水平。目前，BMPs的研究和应用领域主要涉及磁转染、基因治疗、癌症治疗(如恶性癌症的热疗)、靶向药物投送、核磁共振成像、组织修复、免疫荧光分析等领域。如今，关于BMPs的研究主要涉及BMPs的高效生产、分离和纯化，膜蛋白，形成机制，抗体(药物)连接，磁性细胞分离，免疫荧光分析和mRNA回收等，关于如何更好地保存BMPs的研究目前未见有文献报道。由于BMPs外有脂膜包被，脂膜一旦遭到破坏，磁小体容易被氧化，功能受到极大影响，甚至失去应用价值。由于实际生产、分离和纯化BMPs采用的大多为大规模培养，而BMPs大规模的推广应用目前还受到一些因素的影响，因此，如何更好的保存得来不易的BMPs并使其结构和功能保持稳定就显得尤为重要。目前，合成、分泌BMPs的趋磁性细菌分离、培养困难，国内只有个别实验室能够成功做到。因此，找到珍贵且具有广阔应用前景的磁小体的适宜保存条件迫切而重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种保存磁小体的溶液及其应用；本专利技术的另一个目的在于提供保存磁小体的方法。本专利技术提供的一种保存磁小体的溶液，其磷酸盐缓冲溶液(PBS溶液)。优选地，本专利技术提供的保存磁小体的溶液为0. OlM的pH值为7. 26的磷酸盐缓冲溶液。上述0. OlM的pH值为7. 26的磷酸盐缓冲溶液，其IL的配方为称7. 9g NaCl,0. 2gKCl，0. 24g KH2PO4 (或 I. 44g Na2HPO4)和 I. 8g K2HPO4,溶于 800ml 蒸馏水中，用 HCl 调节溶液的pH值至7. 26,最后加蒸懼水双蒸水定容至1L。本专利技术提供了上述0. OlM的pH值为7. 26磷酸盐缓冲溶液在保存磁小体中的应用。本专利技术提供了上述0.0IM的pH值为7. 26磷酸盐缓冲溶液在细胞转染中的应用。本专利技术还提供了一种保存磁小体的方法，是将磁小体保存于磷酸盐缓冲溶液中优选地，本专利技术提供的保存磁小体的方法是将磁小体保存于0. OlM的pH值为7. 26的磷酸盐缓冲溶液中。其中，磁小体在磷酸盐缓冲液中的保存浓度为I U g/iil-10ii g/iil。优选地，将磁小体加入磷酸盐缓冲液以后形成的BMPs保存溶液的浓度是I U g/Ul时，保存效果最佳。其中，保存温度为4°C。其中，保存时间为l-180d。本专利技术发现0. OlM的pH值为7. 26的磷酸盐缓冲溶液在保存磁小体过程中对磁小体的结构和功能的影响和干扰最小，将保存的磁小体连接得到的BMPs-PEI/DNA复合物可达到更高的PEI、核酸固定和连接效率，用其转染Hela、Ifep-G2、COS-7和C2C12细胞效率分别是55. 45%、15. 01%、19. 01%和15. 92%，分别高于常规方法保存的磁小体的转染细胞效率。同时，本专利技术发现0. OlM的pH值为7. 26的磷酸盐缓冲溶液转染细胞效率分别高于相同浓度下不同PH值的PBS保存磁小体的转染细胞效率，因此本专利技术提供的0. 0IM的pH值为7. 26的磷酸盐缓冲溶液是目前最高效保存磁小体的溶液。本专利技术的PBS保存液容易配制，方便获得，在实验室中极易推广。另外，采用本专利技术溶液保存的磁小体用于细胞基因传递时能够获得更高的基因投送效率，能够很好地应用于体外基因转染或体内靶向基因投送，适合推广使用。总之，本专利技术所提供BMPs保存溶液对于更高效、更长期地保存BMPs，并使其更大范 围地发挥应用价值具有非常实际的意义。附图说明图I为A、B两组的BMPs-PEI/DNA复合物对Hela细胞的转染效率图。图2为A、B两组的BMPs-PEI/DNA复合物对H印-G2细胞的转染效率图。图3为A、B两组的BMPs-PEI/DNA复合物对Cos_7细胞的转染效率图。图4为A、B两组的BMPs-PEI/DNA复合物对C2C12细胞的转染效率图。图5为为激光共聚焦显微镜扫描的Hela细胞不同转染效率对应的绿色荧光通道效果图，其中图A为用150mM的pH值为7. 00的NaCl溶液保存的BMPs连接BMPs-PEI/DNA转染复合获得的转染效果，图B为用0. OlM的pH值为7. 26的PBS溶液保存保存的BMPs连接BMPs-PEI/DNA转染复合获得的转染效果；图中白色部分代表在此视野中成功表达增强型绿色荧光蛋白的Hela细胞，白色部分占据图片的部分越多，代表成功表达增强型绿色荧光蛋白的Hela细胞越多，即转染效率越高。图6为为激光共聚焦显微镜扫描的Hep_G2细胞不同转染效率对应的绿色荧光通道效果图，其中图A为用150mM的pH值为7. 00的NaCl溶液保存的BMPs连接BMPs-PEI/DNA转染复合获得的转染效果，图B为用0. OlM的pH值为7. 26的PBS溶液保存保存的BMPs连接BMPs-PEI/DNA转染复合获得的转染效果；图中白色部分代表在此视野中成功表达增强型绿色荧光蛋白的Hep-G2细胞，白色部分占据图片的部分越多，代表成功表达增强型绿色荧光蛋白的Hep-G2细胞越多，即转染效率越高。图7为激光共聚焦显微镜扫描的Cos-7细胞不同转染效率对应的绿色荧光通道效果图，其中图A为用150mM的pH值为7. 00的NaCl溶液保存的BMPs连接BMPs-PEI/DNA转染复合获得的转染效果，图B为用0. OlM的pH值为7. 26的PBS溶液保存保存的BMPs连接BMPs-PEI/DNA转染复合获得的转染效果；图中白色部分代表在此视野中成功表达增强型绿色荧光蛋白的Cos-7细胞，白色部分占据图片的部分越多，代表成功表达增强型绿色荧光蛋白的Cos-7细胞越多，即转染效率越高。图8为激光共聚焦显微镜扫描的C2C12细胞不同转染效率对应的绿色荧光通道效果图，其中图A为用150mM的pH值为7. 00的NaCl溶液保存的BMPs连接BMPs-PEI/DNA转染复合获得的转染效果，图B为用0. OlM的pH值为7. 26的PBS溶液保存保存的BMPs连接BMPs-PEI/DNA转染复合获得的转染效果；图中白色部分代表在此视野中成功表达增强型绿色荧光蛋白的C2C12细胞，白色部分占据图片的部分越多，代表成功表达增强型绿色荧光蛋白的C2C12细胞越多，即转染效率越高。·图9为分别用pH值为5、6、8、9的PBS保存本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种保存磁小体的溶液，其为磷酸盐缓冲溶液PBS。

【技术特征摘要】
1.一种保存磁小体的溶液，其为磷酸盐缓冲溶液PBS。2.如权利要求I所述的溶液，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲溶液PBS的浓度为·0.01M, pH 值为 7. 26。3.如权利要求2所述的溶液，其IL的配方为称7.9gNaCl, 0. 2gKCl,0. 24g KH2PO4或1.44g Na2HPO4,1. 8g K2HPO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7. 26，最后加蒸馏水双蒸水定容至1L。4.权利要求1-3任一所述的溶液在保存磁小体中的应用。5.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：方美英，康晓龙，杨万杰，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：