一种止血剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种止血剂，包括明胶、微生物谷氨酰胺转胺酶酶原以及所述微生物谷氨酰胺转胺酶酶原的激活剂；所述明胶、微生物谷氨酰胺转胺酶酶原和激活剂的比例为100000:1~200:1~100。本发明专利技术还公开了该止血剂的制备方法及应用。本发明专利技术止血剂具有更好稳定性和止血效果，其安全性和可靠性增强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种止血材料相关
，具体涉及一种止血剂及其制备方法和应用。
技术介绍
现有技术中明胶已经被广泛用于止血，如强生医疗器材有限公司的Surgiflo 流体明胶，壳聚糖明胶(中国专利申请号200310121182. X)，改性明胶(中国专利申请号=200910244834. 6)以及其它用于止血的明胶，如中国专利02121201. 5,98117763. 8，03126852. 8,02104346. 9，01142070. 7 等；美国专利 6，652，840，，413，713，6，238，688，6，194，138 5，645，849,4, 596，788,4, 539，204等。明胶具有止血效果，可以用于外伤或者手 术止血。微生物谷氨酰胺转胺酶(microbial transglutaminase,缩写MTG)与凝血因子FACTOR XIII属于同一个家族的酶，很多研究表明了其在凝血反应中的作用。利用MTG可以交联明胶，形成良好的多空物或者网状物，例如，它可以交联I型胶原蛋白形成抗高温的胶(Nomura Y, Toki S，Ishii Y, Shirai K. Biosci Biotechnol Biochem.2001 Apr;65(4) :982-5) ;MTG与明胶作用形成的胶不会受热溶解(Chen T, Embree HD,Brown EM, Taylor MM, Payne GF. , Biomaterials. 2003 Aug; 24 (17) : 2831-41,美国专利5, 834，232)并可用于细胞固定(Chen T, Small DA, McDermott MK, Bentley WE,Payne GF. , Biomacromolecules. 2003 Nov-Dec; 4 (6) : 1558-63),生物支架(BroderickEP, 0’Halloran DM, Rochev YA, Griffin M, Collighan RJ, Pandit AS. J BiomedMater Res B Appl Biomater. 2005 Jan 15;72 (I):37-42. ；Chen RN, Ho HO, Sheu MT.Biomaterials. 2005 Jul; 26 (20) : 4229-35)。用MTG增强明胶的交联，以提高其强度和黏性，用于制作止血材料、止血敷料或止血用密封材料(McDermott MK, Chen T, WilliamsCM, Markley KM, Payne GF. Biomacromolecules. 2004 Jul-Aug; 5 (4) : 1270-9 ;中国专利:200980131973. 6 和 200780051215. 4 ;美国专利8, 133，484 ;欧洲专利TO2012017415、W02011132153、BRPI0718328、ZA200904470、EP2303344、EP2303341 及 CN102124058)。现有技术所采用的MTG是指将谷氨酰胺酶原(PiO-MTG)切除前肽后所获得的成熟的酶。在通常保存条件下MTG较易失活而不稳定，对温度比较敏感，不稳定，且必须在较高纯度条件下才能发挥交联作用。MTG是成熟的酶，是谷氨酰胺酶原(pro-MTG)被切除前肽后所获得的(RalfPASTERNACK, Simone D0RSCH, Jens T. 0TTERBACH, Isabella R. R0BENEK, Sabine WOLFand Hans-Lothar FUCHSBAUER, Eur. J. Biochem. 257，5702576 (1998))。在生物体内发生，能将酶原切割出活性MTG分子的蛋白酶有Streptomyces albogriseolus来源的SAM-P20、SAM-P26、SAMP45 和 SAP 以及 Sti^ptomyces mobaraensis 来源的内源性 TG 激活酶 TAP 和 Streptomyces hygroscopicus 中的丝氨酸蛋白酶等(Taguchi S，Arakawa K,Yokoyama K, et al. J Biosci Bioeng, 2002，94 (5) : 478-81. Zhang D, Wang M, Wu J,et al. J Agric Food Chem, 2008，56 (21) : 10261-4.)。但上述反应不能被用于成熟 MTG的工业应用。由于纤维蛋白和胶原蛋白的完整性是实现人体正常凝血功能的必要因素之一，而激活剂，如分散酶(dispase)，不仅会切割微生物谷氨酰胺转胺酶酶原，还会切割纤维蛋白和胶原蛋白(Stenn KS, Link R, Moellmann G, et al. J InvestDermatol, 1989，93(2) :287-90.)，因此，在止血类产品中通常不使用分散酶等激活剂，以防其对上述酶原及蛋白的切割作用。此外，热处理的微生物谷氨酰胺转胺酶原(pro-MTG)可以有效抑制MTG的活性(Christa Pfleiderer, Martina Mainusch, Johannes Weber,Microbiological Research160 (2005) 265— 271)，因此，如果反应过程中是需要利用成熟MTG活性的，通常要求先严格去除pro-MTG，以避免pro-MTG对MTG活性的抑制。
技术实现思路
本专利技术克服现有技术以上缺陷，提供了一种止血剂，可用于各类伤口止血、手术止血，创新提出了将激活剂用于止血剂的技术方案，不仅避免了激活剂分解所述酶原及蛋白的副作用，还显著增强了止血效果。本专利技术提出了一种止血剂，包括明胶、微生物谷氨酰胺转胺酶酶原、以及所述微生物谷氨酰胺转胺酶酶原的激活剂。其中，所述明胶、所述微生物谷氨酰胺转胺酶酶原和所述激活剂的比例为100000:Γ200: Γ ΟΟο其中，所述明胶的强度不低于300布鲁姆。其中，所述微生物谷氨酰胺转胺酶酶原的纯度不低于80%。优选地，其纯度不低于99%。其中，所述微生物谷氨酰胺转胺酶酶原在被完全激活时的最小比酶活不低于20U/mg ο其中，所述激活剂是分散酶(dispase)。本专利技术中，微生物谷氨酰胺转胺酶酶原是微生物来源的，分子量大约为42kDa，包含376个氨基酸残基，其序列为GenBank CAA77128. I。优选地是由茂源链霉菌(Streptomyces mobaraensis)发酵产生的。本专利技术中，微生物谷氨酰胺转胺酶酶原没有酶活性的，其所含有的前肽未被切割，不能催化蛋白质交联。在常温条件下，微生物谷氨酰胺转胺酶酶原比MTG更加稳定，不容易受热变性或被酶解。本专利技术不需要分离去除微生物谷氨酰胺转胺酶原(pro-MTG)，仍可利用成熟MTG的活性，实现显著良好的止血效果，其止血机制明显不同于现有技术。本专利技术中，激活剂是指可以激活酶原产生成熟MTG或者使酶原具有催化蛋白质发生谷氨酰胺转胺基反应从而导致蛋白质交联的任何蛋白酶。本专利技术中，微生物谷氨酰胺转胺酶酶原的激活剂是一类蛋白水解酶，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种止血剂，其特征在于，包括明胶、微生物谷氨酰胺转胺酶酶原、以及所述微生物谷氨酰胺转胺酶酶原的激活剂。

【技术特征摘要】
1.一种止血剂，其特征在于，包括明胶、微生物谷氨酰胺转胺酶酶原、以及所述微生物谷氨酰胺转胺酶酶原的激活剂。2.如权利要求I所述的止血剂，其特征在于，所述明胶、所述微生物谷氨酰胺转胺酶酶原和所述激活剂的比例为100000: I 200: I 100。3.如权利要求I所述的止血剂，其特征在于，所述明胶的强度不低于300布鲁姆。4.如权利要求I所述的止血剂，其特征在于，所述微生物谷氨酰胺转胺酶酶原的纯度不低于80%。5.如权利要求I所述的止血剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：金明飞，刘明耀，高红亮，易正芳，
申请(专利权)人：华东师范大学，
类型：发明
国别省市：